健脾湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠胃潰瘍的治療作用及其抗強(qiáng)的松再損傷的實(shí)驗(yàn)研究

健脾湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠胃潰瘍的治療作用及其抗強(qiáng)的松再損傷的實(shí)驗(yàn)研究【摘要】目的：從潰瘍愈合質(zhì)量的角度探討健脾湯抗消化性潰瘍復(fù)發(fā)的機(jī)制。方法：采用乙酸胃潰瘍大鼠模型，按完全隨機(jī)設(shè)計(jì)法將大鼠分為3組，分別為健脾湯組16只，西咪替丁組16只，生理鹽水組12只，于造模第6天開(kāi)始灌胃，按人與大鼠體表面積折算大鼠用藥量，每日1次，共16d，從各組隨機(jī)取一半大鼠斷頭處死，檢測(cè)胃潰瘍大鼠胃再生黏膜厚度、黏膜肌層缺損寬度、表面黏液厚度和胃組織EGF、NO含量。其余大鼠自由飲食，于第31天開(kāi)始灌服強(qiáng)的松5mg·kg-1·d-1，共20d，于第51天將各組剩余大鼠全部處死，并進(jìn)行與第22天相同方法、相同指標(biāo)的檢測(cè)。結(jié)果：治療后，A組和B組再生黏膜厚度、黏液厚度均大于C組，黏膜肌層缺損寬度均小于C組，A組黏液厚度高于B組，A組EGF較B、C兩組含量高。灌服強(qiáng)的松后，A、B兩組再生黏膜厚度、黏液厚度均高于C組，黏膜肌層缺損寬度均小于C組，且A組黏液厚度高于B組，黏膜肌層缺損寬度小于B組，NO含量A、B兩組均高于C組，且A組高于B組是內(nèi)科的常見(jiàn)病、多發(fā)病。提高消化性潰瘍的遠(yuǎn)期療效，防止其復(fù)發(fā)仍是目前該病治療中的難題之一。陳少芳[1]認(rèn)為消化性潰瘍的發(fā)生是因胃黏膜的損害因素與防御因素之間失衡，當(dāng)對(duì)胃黏膜的損害因素大于防御因素時(shí)，潰瘍就可能形成。王氏研究消化性潰瘍病常用方劑之一四君子湯之所以具有預(yù)防精神壓力型胃潰瘍發(fā)生之效果，其原因除了能抑制胃酸的分泌外，與腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)傳遞物含量的變化有密切的關(guān)聯(lián)性。林壽寧研究健脾益胃類(lèi)發(fā)揮抗?jié)冏饔每赡芡ㄟ^(guò)降低血清胃泌素和提高血清表皮生長(zhǎng)因子，而減少黏膜攻擊因子和增強(qiáng)胃黏膜保護(hù)而發(fā)揮抗?jié)冏饔?。筆者在臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，健脾湯對(duì)脾氣虛弱、瘀血阻滯型消化性潰瘍病患者，有較好的遠(yuǎn)期療效，能防治其復(fù)發(fā)。本研究采用大鼠乙酸胃潰瘍模型，觀察健脾湯治療胃潰瘍的愈合質(zhì)量，并觀察該方抗強(qiáng)的松的再損傷能力，以探討該方抗消化性潰瘍復(fù)發(fā)的機(jī)理。

1材料與方法

材料

動(dòng)物SD大鼠，44只，雌雄各半，體重180~230g，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供。

藥物與試劑健脾湯，由炙黃芪20g，黨參15g，白術(shù)10g，丹參15g，赤芍10g，陳皮6g，炙甘草5g，七味藥共81g組成，藥材由湖北中醫(yī)學(xué)院門(mén)診部藥房提供，經(jīng)生藥學(xué)鑒定，常規(guī)水煎2次，濃縮至100%，使藥汁中含生藥1g/mL，置500mL玻璃瓶?jī)?nèi)，低溫保存，備用；西咪替丁片，由江西制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)070808-1，用時(shí)加蒸餾水配成%的混懸液；強(qiáng)的松片，浙江醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：070581。表皮生長(zhǎng)因子試劑盒；一氧化氮試劑盒。

儀器顯微鏡測(cè)微尺；721分光光度計(jì)；FJ2003/50Pγ放射免疫計(jì)數(shù)器。

方法

造模與分組參考鄢順琴等的方法。大鼠造模前24h，禁食不禁水。用20%烏拉坦4mL/kg體重腹腔注射麻醉。腹部備皮、消毒，于劍突下腹中線打開(kāi)腹腔，手術(shù)切口長(zhǎng)約2cm，暴露出胃，在胃前壁漿膜面竇體交界處同一部位用浸有乙酸、直徑為5mm的圓形濾紙接觸2次，每次30s，然后還納胃體，逐層縫合切口。涂上一層稀釋的火棉膠，保護(hù)切口。造模大鼠清醒后，按完全隨機(jī)設(shè)計(jì)法將大鼠分為3組，分別為健胃湯組16只，西咪替丁組16只，生理鹽水組12只。

給藥方法于造模第6天開(kāi)始灌胃，按人與大鼠體表面積折算大鼠用藥量，A組以健脾湯mL·kg-1·d-1，B組以西咪替丁水溶液mL·kg-1·d-1，C組以生理鹽水mL·kg-1·d-1，每日1次，共16d，所有藥物溶液及生理鹽水pH值均為。于造模第22天，從各組隨機(jī)取一半大鼠斷頭處死，檢測(cè)再生黏膜厚度、黏膜肌層缺損寬度、表面黏液厚度、NO含量、EGF含量。其余大鼠自由飲食。于第31天開(kāi)始灌服強(qiáng)的松5mL·kg-1·d-1，共20d，于第51天將各組剩余大鼠全部處死，并進(jìn)行與第22天相同方法、相同指標(biāo)的檢測(cè)。

動(dòng)物處理大鼠禁食不禁水24h后，斷頭處死，剖腹取胃，以潰瘍瘢痕平行于胃長(zhǎng)軸方向的最長(zhǎng)徑為中心取材，8%甲醛固定，石蠟包埋，以瘢痕的最長(zhǎng)徑為中心連續(xù)切片，間隔5m，分別作HE染色和AB/PAS染色，取潰瘍瘢痕周?chē)M織一塊，放入生理鹽水中沖洗，吸干，電子天平稱(chēng)重，不銹鋼手術(shù)刀切碎，放入勻漿器中勻漿，用生理鹽水制成10%的組織勻漿液后，將勻漿液移入玻璃試管中，2500r/min離心20min，取上清液，-20℃冰箱內(nèi)保存，待測(cè)NO、EGF的含量。

觀察項(xiàng)目①再生黏膜厚度、黏膜肌層缺損寬度：參照楊雪松法[1]。在HE染色的連續(xù)切片上，用低倍鏡找到潰瘍愈合部位，在高倍鏡下觀察測(cè)量，用顯微鏡測(cè)微尺分別測(cè)5個(gè)視野長(zhǎng)度，計(jì)算其平均值。②表面黏液厚度：參照鄢順琴[1]法。在HE染色的切片上找到潰瘍愈合部位，在對(duì)應(yīng)的AB/PAS染色的切片上觀察，用測(cè)微尺分別測(cè)5個(gè)視野的表面黏液厚度，計(jì)算其平均值。③NO含量測(cè)定：采用硝酸還原酶法，EGF含量測(cè)定：采用放射免疫法，均嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。數(shù)據(jù)處理：利用FJ2003/50Pγ放射免疫記數(shù)器，編寫(xiě)程序，直接給出參數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品濃度。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以x±s表示，組間差異性比較采用兩樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

各組胃潰瘍的愈合質(zhì)量

治療后，A組和B組再生黏膜厚度、黏液厚度均大于C組，黏膜肌層缺損寬度均小于C組。A組黏膜厚度、黏膜肌層缺損寬度與B組比較，無(wú)顯著性差異，但A組黏液厚度高于B組，見(jiàn)表1。A組EGF較B、C兩組含量高；NO含量A、B兩組較C組高，見(jiàn)表2。

各組抗強(qiáng)的松的再損傷的情況

灌服強(qiáng)的松后，A、B兩組再生黏膜厚度、黏液厚度均高于C組，黏膜肌層缺損寬度均小于C組，且A組黏液厚度高于B組，黏膜肌層缺損寬度小于B組。EGF含量各組均無(wú)顯著性差異；NO含量A、B兩組均高于C組，且A組高于B組，見(jiàn)表3，對(duì)瘢痕周?chē)M織EGF、NO含量的影響，見(jiàn)表4。

3討論

目前認(rèn)為消化性潰瘍是一種多病因疾病。各種與發(fā)病有關(guān)的因素如胃酸、胃蛋白酶、感染、遺傳、體質(zhì)、環(huán)境、飲食、生活習(xí)慣、神經(jīng)精神因素等，通過(guò)不同途徑或機(jī)制，導(dǎo)致上述侵襲作用增強(qiáng)和防護(hù)機(jī)制減弱，均可促發(fā)潰瘍發(fā)生。胃酸－胃蛋白酶的侵襲作用增強(qiáng)和/或胃黏膜防護(hù)機(jī)制的削弱是本病的根本環(huán)節(jié)。任何影響這兩者平衡關(guān)系的因素，都可能是本病發(fā)病及復(fù)發(fā)的原因。

中醫(yī)藥治療PU從整體出發(fā)，具有益氣生肌，保護(hù)胃黏膜，促進(jìn)機(jī)體自我修復(fù)的治本功效，同時(shí)對(duì)幽門(mén)螺桿菌有根除作用，取得了很好的效果。目前中醫(yī)藥抗PU的臨床研究，顯示中醫(yī)藥治療能改善患者癥狀及緩解病程進(jìn)展，近期療效與西醫(yī)接近或優(yōu)于單純西藥，遠(yuǎn)期療效更好。根據(jù)臨床所見(jiàn)，相當(dāng)一部分消化性潰瘍患者其病機(jī)為脾氣虛弱、無(wú)力推動(dòng)血行而致瘀血阻滯、胃腸黏膜失養(yǎng)而成潰瘍，而且這類(lèi)患者病情易反復(fù)發(fā)作。同時(shí)近年來(lái)的研究表明脾胃虛弱、氣滯血瘀是影響潰瘍愈合質(zhì)量的主要病理機(jī)制。吳懷皋用健脾益胃湯治療消化性潰瘍療效明顯優(yōu)于對(duì)照組。

根據(jù)上述情況，臨床上，我們以益氣健脾、活血化瘀為治法組成健脾湯，用于治療慢性反復(fù)發(fā)作性該病患者，發(fā)現(xiàn)該方具有較好的抗?jié)兗翱箯?fù)發(fā)作用。該方中首要藥物之一黃芪能顯著增強(qiáng)機(jī)體特異性和非特異性免疫功能，黃芪中的主要成分之一黃芪精對(duì)多種實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物胃潰瘍有抑制作用，對(duì)95%乙醇所致小鼠胃黏膜損傷具有顯著的抑制作用，可減少損傷面積，降低損傷指數(shù)，可協(xié)同西米替丁對(duì)胃黏膜的保護(hù)作用。王麗娟等研究發(fā)現(xiàn)黃芪對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍有抑制作用。該方中另一重要藥物黨參其水煎醇沉液對(duì)應(yīng)激型、幽門(mén)結(jié)扎型等所致實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍均有預(yù)防和治療作用。黨參抗?jié)冏饔脵C(jī)制包括抑制胃酸分泌，降低胃液酸度，促進(jìn)胃黏液的分泌，增強(qiáng)胃黏液-碳酸氫鹽屏障；增加對(duì)胃黏膜有保護(hù)作用的內(nèi)源性前列腺素含量[10]。白術(shù)的丙酮提取物灌胃給藥，對(duì)鹽酸-乙醇所致大鼠胃黏膜損傷有明顯的抑制作用。經(jīng)十二指腸給藥對(duì)幽門(mén)結(jié)扎大鼠胃液分泌量有抑制作用，降低胃液酸度，減少胃酸及胃蛋白酶的排出量[10]。丹參注射液能擴(kuò)張胃黏膜血管，降低胃酸度，抑制胃蛋白酶活性，促進(jìn)潰瘍愈合。能清除氧自由基，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)和提高組織抗氧化能力[10]。赤芍亦具有和丹參相似的作用。陳皮中的甲基橙皮苷皮下注射能明顯抑制實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍，而且能抑制病理性胃液分泌增多[10]。甘草能抑制胃液、胃酸分泌；直接吸著胃酸而降低胃液酸度；增加胃黏膜細(xì)胞的己糖胺成分，保護(hù)胃黏膜；促進(jìn)消化道上皮細(xì)胞再生；刺激胃黏膜上皮細(xì)胞合成和釋放有黏膜保護(hù)作用的內(nèi)源性前列腺素[10]。本實(shí)驗(yàn)選用以上藥物組成的健脾湯，目的在于進(jìn)一步探討該方的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，健脾湯組能增加再生黏膜厚度，使黏膜肌層缺損寬度減小，健脾湯組及西咪替丁組表面黏液厚度均高于生理鹽水組，且健脾湯組又高于西咪替丁組，說(shuō)明健脾湯能提高再生黏膜組織學(xué)成熟度、提高黏膜修復(fù)能力，能促進(jìn)黏液分泌，其作用優(yōu)于西咪替丁。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示，健脾湯組潰瘍瘢痕周?chē)M織EGF含量高于西咪替丁組及生理鹽水組，提示健脾湯提高了內(nèi)源性EGF的含量，其作用優(yōu)于西咪替丁。腎上腺糖皮質(zhì)激素類(lèi)：如強(qiáng)的松、地塞米松、可的松等，是誘發(fā)消化性潰瘍的因素，這類(lèi)藥物有促進(jìn)胃酸和胃蛋白酶分泌的作用。高酸性胃炎、胃和十二指腸潰瘍病患者使用上述藥物后，會(huì)誘發(fā)加重病情，嚴(yán)重者可出現(xiàn)胃出血和穿孔。實(shí)驗(yàn)表明，健脾湯能增強(qiáng)胃黏膜抗強(qiáng)的松再損傷能力，又能提高潰瘍愈合質(zhì)量，提高再生黏膜的功能成熟度。

綜上所述，健脾湯提高潰瘍愈合質(zhì)量的可能機(jī)制為：提高了黏膜再生修復(fù)能力，提高了再生黏膜組織學(xué)成熟度；促進(jìn)黏液分泌，增強(qiáng)胃黏膜屏障功能；提高了瘢痕周?chē)M織內(nèi)源性EGF及NO含量。這些作用可能也是健脾湯控制消化性潰瘍復(fù)發(fā)的機(jī)理之一。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)也提示我們，針對(duì)消化性潰瘍患者其病機(jī)大部為脾氣虛弱、無(wú)力推動(dòng)血行而致瘀血阻滯、胃腸黏膜失養(yǎng)而成潰瘍，健脾湯組方所體現(xiàn)出的中醫(yī)益氣活血治法在提高潰瘍愈合質(zhì)量、抗消化性潰瘍復(fù)發(fā)中具有重要作用。

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