慢性ITP時脾臟的形態(tài)學及免疫組化研究

慢性ITP時脾臟的形態(tài)學及免疫組化研究【摘要】目的研究ITP時脾臟的病理形態(tài)及免疫組化特點。方法應用光鏡觀察36例ITP脾臟的形態(tài)特征；用免疫組化S-P法檢測CD3、CD4、CD8、CD20、CD41、CD43、CD45Ro、CD68、P53和PCNA在ITP脾臟組織中的表達情況。結果本組男女之比為:1，男性平均年齡歲，女性平均年齡歲。脾臟呈輕度腫大。主要組織學改變是白髓濾泡反應性增生，生發(fā)中心擴大，濾泡周邊帶增寬，中央動脈壁增厚、纖維化，微血管增生。CD8+細胞多于CD4+T淋巴細胞；含血小板抗原的CD41+和CD43+淋巴細胞主要分布于生發(fā)中心；PCNA+淋巴細胞在紅、白髓中均呈彌漫而密集分布；CD68+組織細胞數量較正常增多，T、B淋巴細胞和組織細胞呈增殖現象。結論ITP脾CD8+淋巴細胞明顯高于CD4+淋巴細胞和T、B淋巴細胞及組織增生現象提示輔助T淋巴細胞亞群比例失調和功能異常。DEX治療ITP能有效緩解病情。

【關鍵詞】特發(fā)性血小板減少癥；脾臟；病理學；免疫組織化學

Chronicidiopathicthrombocytopenicpurpura:apathologicandimmunohistochemicalstudyofthespleen

【Abstract】ObjectiveToinvestigatethepathomorphologicalandimmunochemicalfeaturesofthespleeninidiopathicthrombocytopenicpurpura.MethodsLightmicroscopywasusedtostudythemorphologiccharacteristicsof36casesofthespleeninidiopathicthrombocytopenicpurpura.TheexpressionofCD3,CD4,CD8,CD20,CD41,CD43,CD45RoCD68,P53andPCNAproteinweredetectedinallcaseswithS-Pimmunohistochemicalmethod.ResultsTheratioofthemalewithfemaleis:1.Theaverageageofthemalesisyearsold.Theaverageageofthefemalesisyearsold.ThesplenomegalyofthechronicITPislow-grade.Themainpathologicchangeisreactivefollicularhyperplasiaofthewhitepulpandgerminalcentralenlargingandbroadenofthemarginalzone.Thethickandfibrosiswallsofmiddlespleenarteries.TheCD8+lymphocytesCD4+lymphocytes.ThelymphocyteswhichexpressplatlateantigenCD41andCD43mainlydistributeinthecenterofthefolliculasarea.PCNApositivelymphocyteslocateddifusslyanddenselyinredpulpandwhitepulp.TheincreasingnumberofcellssuggeststheproliferationofTandBcellsandInITPpatients,abnormaldistributionofTlymphocytesubsetsandchangesoftheproliferationofTandBlymphocytesandhistocytesmayimplythedysfunctionofTh1/Th2.TreatmentwithDEXhasbeneficialeffectofITP.

【Keywords】idiopathicthrombocytopenicpurpura;spleen;pathology;immunohistochemistry

慢性特發(fā)性血小板減少癥是常見出血性疾病之一，發(fā)病機理與免疫異常有關，血循環(huán)中存在抗血小板抗體使血小板破壞過多，同時還作用于骨髓巨核系細胞，影響其增殖、分化及成熟過程［1］。本研究用免疫組化方法對破壞血小板的重要器官與場所的脾臟檢測CD系列單克隆抗體的表達，以期提高對本病的認識水平。

1材料與方法

1．1標本來源收集我院1996年1月～2006年6月間CITP患者行外科手術治療脾切除標本36例；另選10例因創(chuàng)傷性脾破裂而手術切除的正常脾標本作對照研究。

1．2方法標本經10%甲醛固定，石蠟包埋，4mm厚連續(xù)切片，染色，每張切片均再次經2位副高以上醫(yī)師復檢結果一致為最終診斷。鼠抗人P53抗體、CD系列抗體、PCNA單克隆抗體和S-P試劑盒購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。每例標本分別標記上述抗體，DAB顯色，以PBS緩沖液代替第一抗體作陰性對照；分別用已知對P53高表達的肺癌組織和對CD系列高表達的淋巴結作陽性對照。

2結果

2．1臨床資料共獲ITP脾36例，男6例，女30例，男女之比為:1，男性平均年齡歲；女性平均年齡歲。所有病例均以全身皮膚彌漫散在瘀點或瘀斑或紫癜為首發(fā)癥狀，育齡婦女則長期月經過多。實驗室檢查：血小板計數在×109/L之間，其中1例血小板只有12×109/L。血紅蛋白和紅細胞計數大多減少，多呈小細胞低色素缺鐵性貧血；白細胞計數正常；出血時間大多延長，而凝血時間正常；骨髓像均見巨核細胞顯著增多，以顆粒性巨核細胞和裸核為主，產血小板巨核細胞少見。用酶聯(lián)免疫熒光法檢測血小板相關抗體：PAIgG增高33例，占%；PAIgM增高8例，占22%，且常伴較嚴重出血；T8細胞百分值增高，而T4細胞比值下降。本組臨床上均排除繼發(fā)性血小板減少，診斷ITP明確。本組均因內科治療不滿意而行脾切除術，術后第5天平均應用地塞米松40mg/d左右，血小板上升維持在×109/L。

2．2形態(tài)學觀察

2．2．1巨檢脾臟有不同程度腫大，大小范圍為××；重量為115～185g。表面光滑，包膜無增厚，切面脾小結明顯，無出血、壞死。

2．2．2鏡檢主要表現為：白髓濾泡反應性增生，生發(fā)中心擴大，濾泡邊緣帶增寬，其內見漿細胞浸潤，經激素治療后的病例濾泡呈退行性變化，數量減少，生發(fā)中心不明顯，濾泡周邊帶無增寬，細胞數量減少；脾竇擴張、淤血，紅髓內可見多少不等嗜中性粒細胞浸潤，部分聚集成片；脾索內可見吞噬紅細胞及血小板的巨噬細胞；中央動脈管壁增厚、纖維化，多見年長者，并有PAS陽性物質沉著；約半數病例出現輕度髓樣化生；微細血管密度增加；紅髓中組織細胞增生，可見泡沫細胞形成。

2．2．3免疫表型CD3+和CD45Ro+T淋巴細胞分布彌漫而密集；CD20+B細胞主要分布于濾泡套區(qū)和邊緣區(qū)及生發(fā)中心內；CD8+T淋巴細胞明顯多于CD4+T淋巴細胞；CD68+組織細胞明顯多于正常對照組；含血小板抗原CD41+和CD43+淋巴細胞主要分布于生發(fā)中心；P53+淋巴細胞分布彌漫且多呈弱陽性；PCNA+淋巴細胞在紅、白髓均呈彌漫分布。

3討論

ITP是一種由自身抗體引起的血小板破壞過多的自身免疫性疾?。?］。主要在脾臟產生抗血小板抗體，屬IgG型［3］；脾又是破壞血小板的重要場所。切除脾可去掉產生抗體的器官和破壞血小板的場所，使外周血中的血小板上升。我們認為，對內科治療無效的慢性型患者應盡早脾切除以提高療效。而對ITP的兒童一定要慎重，因為兒童有自愈的可能，要嚴格掌握手術指征。本組脾切除后，臨床療效滿意和確切，多數病例獲得持續(xù)緩解。

ITP是由脾產生的大量IgG引起的［4］?？贵w包被的血小板由于被網狀內皮系統(tǒng)的細胞快速清除而壽命短暫，特別是脾和肝。包被較重的血小板由肝吞噬細胞清除；而包被較輕的血小板則通過肝再經脾而被清除［5］；因此，脾臟是破壞血小板的重要器官和場所?？梢娖⑶谐苡行ё钄嘌“宓钠茐摹１窘M病例脾切除后48h血小板明顯上升，經2年隨訪，不需激素長期維持，血小板基本保持在正常范圍。

近年研究表明，自身免疫性疾病的發(fā)生與機體免疫內環(huán)境平衡紊亂有關，而輔助T細胞與抑制T細胞亞群間的平衡是維持免疫內環(huán)境穩(wěn)定的中心環(huán)節(jié)。研究結果顯示［6］，ITP患者外周血CD8+細胞百分率顯著增高，CD3+、CD4+細胞明顯減少，CD4+/CD8+下降。Th與Ts亞群比例失調，Th與Ts之和明顯超過總T細胞，說明外周血中存在CD4+、CD8+雙標記細胞，真正的CD8+細胞減少。相關分析結果，CD4+/CD8+與IL-2呈顯著正相關，血小板計數與CD8+細胞百分率呈顯著負相關，并發(fā)現ITP患者T細胞亞群比例失調是IL-2活性降低的始動因素。揭示細胞免疫功能異常與ITP的發(fā)展、轉歸有顯著關系。細胞毒性T細胞在ITP中的作用很早就被學者重視，Wybran和Fudenbery［7］認為部分ITP患者檢測不到自身抗體有可能因為存在多種致病機制。Handin［8］也認為血小板自身抗體復合物一旦在體內激活淋巴細胞，這些激活的淋巴細胞就可對血小板產生細胞毒性破壞作用。這就可以部分解釋為何在經脾切除和激素治療后有的患者始終存在持續(xù)的血小板破壞。而Morimoto等［8］研究也提示細胞介導的血小板破壞可能是細胞毒性T細胞直接作用于血小板的結果。最近Olsson等［9］發(fā)現細胞毒性T細胞的血小板破壞作用可能是慢性ITP患者發(fā)病中的一個重要機制，在此研究中，利用DNA芯片技術掃描活動期、緩解期ITP患者以及正常人的CD3+細胞，發(fā)現許多細胞毒性基因和Th1反應相關基因在ITP患者中的表達明顯高于正常對照組。認為細胞毒性細胞和自然殺傷細胞通過誘導細胞凋亡而扮演了破壞血小板的重要角色［9］。

本組研究顯示脾組織中CD4+、CD8+細胞和CD68+樹突狀細胞均有不同程度增生，而CD8+細胞明顯多于CD4+淋巴細胞，與外周血淋巴細胞相關研究［2］相似，提示T細胞亞群與免疫遞呈細胞的平衡紊亂是ITP細胞免疫功能異常導致血小板破壞的重要因素。

【參考文獻】

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2范磊，阮長耿.特發(fā)性血小板減少性紫癜發(fā)病機制.蘇州醫(yī)藥,2006，32：357-359.

3HayesMM，JacobsP，WoodL，etpathologyinimmuneClinPathol,1985,38:985-988.

4JiangDY，ListudyofthespleeninchronicimmunethrombocytopenicpurpurawithspecialreferencetohyperplasticfolliclesandfoamyPatholLabMed,1995,1999,533-537.

5MarrackP，KapplerJ，KotzinBL，etal.Autoimmunedisease:whyandwhereMed,2001，7:899-905.

6WilsonBS，DeloritchTL，Janus-likeroleofregulalatoryinNKTcellinautoimmunedis