人血小板因子4(PF4CXCL4)ELISA分析檢測試劑盒使用說明書

人血小板因子（PF-4/）EL檢測試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中轉(zhuǎn)化生長因子（PF-4/CXCL4實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人血小板因子（PF-4/CXCL4水平。用純化的轉(zhuǎn)化生長因子（PF-4/CXCL4微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入轉(zhuǎn)化生長因（PF-4/CL4記的羊抗鼠抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TBH的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)化生長因（PF-4/用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（O值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人血小板因子4（PF-4/CXCL4試劑盒內(nèi)容及其配制：試劑盒成份96/48酶標(biāo)板塑料膜板蓋標(biāo)準(zhǔn)品：

9孔配置4孔配置塊板 半塊板（9T（4T1塊 半塊1瓶 1瓶100ng/m（1.m（0.ml空白對照

1瓶 1瓶（1.m（0.ml標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩1瓶 1瓶沖液 （8.m（4.ml生物素標(biāo)記的1瓶 1瓶抗O抗體 （8.m（4.ml親和鏈酶素-HRP洗滌緩沖液

1瓶（12ml1瓶（20ml

1瓶（5l1瓶（10ml底物A底物B終止液

1瓶 1瓶（6.m（3.ml1瓶 1瓶（6.m（3.ml1瓶 1瓶（6.m（3.ml試劑盒組成：試劑盒組成說明書封板膜密封袋酶標(biāo)包被板標(biāo)準(zhǔn)品：4μmol/L標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

4孔配置1份2片（481個×480.瓶1.瓶

9孔配置 保存1份2片（9）1個×96 2保存0.瓶 2保存1.瓶 2保存酶標(biāo)試劑 3×1瓶樣品稀釋液3×1瓶顯色劑液3×1瓶顯色劑液3×1瓶

6×1瓶 2保存6m1瓶 2保存6×1瓶 2保存6ml瓶 2保存終止液 31瓶 61瓶 2保存濃縮洗滌液

（20×2倍×（20×3倍）瓶 ×瓶

2保存自備材料：1.蒸餾水。2.加樣器：510u、50ul100l200501000ul3.振蕩器及磁力攪拌器等。樣品收集、處理及保存方法：、血清……操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，100離心1分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。、血漿……EDTA檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。100×離心3分鐘。、細(xì)胞上清液……100×離心1分鐘去除顆粒和聚合物。、組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。100×離心1分鐘，取。、保存……如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-保存避免反復(fù)。，心或過濾。不要在3℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻。人血小板因子4EL盒操作注意事項：● 丟?！??！?使?！?使用一次性的吸頭以免交叉污染吸取終止液和底物液時避免使用帶金屬部分的加樣器。● 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品?！?底物應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取O值?！?加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。● 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。安全性：1.避免直接接觸終止液和底物，一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖。2.。3.。備：1.準(zhǔn)：100（號標(biāo)直ng/品） 接加入50ul50（號標(biāo)10倍標(biāo)準(zhǔn)品ng/品） 加入10準(zhǔn)品液25（號標(biāo)10u號標(biāo)準(zhǔn)品加ng/品）12.（3號標(biāo)ng/品）6.2（2號標(biāo)ng/品）3.1（1號標(biāo)ng/品）

入10準(zhǔn)品稀液10u號標(biāo)準(zhǔn)品加入10準(zhǔn)品稀液10u號標(biāo)準(zhǔn)品加入10準(zhǔn)品稀液10u號標(biāo)準(zhǔn)品加入10準(zhǔn)品稀液0 對直ng/） 接加入50ul2.洗滌緩沖液（5×）的稀釋：蒸餾水5倍稀釋。能：1.靈敏度：最小的檢測濃度小于號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)值為0.902.。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于1%人血小板因子EL試劑盒操作步驟：1.使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50u于反應(yīng)孔加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50u的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37溫育4分鐘。4.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩3秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5.每孔加入10和鏈酶素-H，輕輕振蕩混勻，3℃溫育3分鐘。6.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩3秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。7.每孔加入底物、各50，輕輕振蕩混勻，3℃溫育分鐘。避免光。8.入50止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。9.在45處測定各孔的O值。結(jié)果判斷與分析：、儀器值：于波長45標(biāo)儀上讀取各孔的O值