急性毒性試驗設(shè)計

急性毒性試驗設(shè)計第一頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日一、急性毒性

急性毒性指人或動物一次或24h之內(nèi)多次接觸外源化學(xué)物后，在短期內(nèi)所發(fā)生的毒性效應(yīng)，包括致死效應(yīng)。第二頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日一次：指瞬間給實驗動物染毒，如經(jīng)口、經(jīng)靜脈注射染毒。24h之內(nèi)多次：指外源化學(xué)物毒性過低，需給予動物較大劑量。第三頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日急性毒性效應(yīng)出現(xiàn)的快慢和毒性反應(yīng)的強度與外源化學(xué)物的性質(zhì)和染毒劑量的大小有關(guān)。如：丙烯腈，過氧化二碳酸二環(huán)己酯第四頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日丙烯腈經(jīng)口急性毒性試驗設(shè)計第五頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日實驗?zāi)康脑u價丙烯腈的毒性作用，求出半數(shù)致死量LD50，并根據(jù)LD50進行急性毒性分級，掌握實驗動物隨機分組的方法和經(jīng)口灌胃的技術(shù)。觀察丙烯腈急性中毒癥狀；為后續(xù)試驗提供依據(jù)；為毒理學(xué)機制研究提供線索。第六頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日器材與試劑1、實驗動物ICR小鼠（健康成年小鼠）2、實驗器材灌胃針、注射器、吸管、容量瓶、燒杯、滴管、電子天平、動物體重秤、外科剪刀、鑷子3、實驗試劑丙烯腈、苦味酸酒精飽和液、伊紅染液第七頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日實驗方法1、實驗動物的選擇2、劑量設(shè)計及隨機化分組3、受試物的配制4、染毒途徑的選擇5、毒性反應(yīng)的觀察與LD50的計算6、急性毒性的評價第八頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日1、物種和品系

對外源化學(xué)物毒性反應(yīng)與人近似易于飼養(yǎng)管理方便實驗操作易于獲得繁殖生育力強數(shù)量較大能夠保障品系純化，價格低廉。

一、實驗動物選擇第九頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日2、實驗動物的年齡與體重

動物大鼠小鼠豚鼠兔犬貓成年年齡（周）3223~43~43~4體重（克）150152501.5kg7~15kg1kg壽命（年）2~32~36~84~915~2010~12第十頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日動物數(shù)量：動物6組，1-5組為實驗組，6組為蒸餾水對照組性別：雌雄各半年齡：成年動物生理與健康狀況：未產(chǎn)未孕者、健康動物實驗動物的預(yù)檢實驗動物的給藥前禁食處理。3、實驗動物的一般要求第十一頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日健康動物標(biāo)志發(fā)育正常、體態(tài)豐滿、外觀無畸形；被毛濃密、貼順有光澤、不蓬亂；胸闊寬闊、脊柱不弓不彎；眼睛明亮；表皮無潰瘍、無結(jié)痂（注意尾巴）；各天然孔干凈、無分泌物；行動靈活、反應(yīng)敏捷。第十二頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日實驗動物的標(biāo)記染色法編號方法：小鼠頭部為1號，順時針編號，用苦味酸編個位數(shù)，用伊紅編十位數(shù)。第十三頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日第十四頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日染色法優(yōu)點：簡單方便，不痛苦，無損傷。缺點：時間較長時，染色劑易褪色；標(biāo)記容易模糊不清。第十五頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日

劑量選擇及分組劑量選擇

廣泛查閱文獻資料，估計毒性中值預(yù)試，求出待測化學(xué)物0%~100%或10%~90%的大致致死劑量范圍設(shè)計正式試驗的劑量和分組

第十六頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日預(yù)實驗：總的原則是先用少量動物，以較大的劑量間距染毒，求出粗略的致死劑量范圍，即確定受試動物全部致死的最小劑量（b）和全部不致死的最大劑量（a），即求出待測化學(xué)物0%~100%的大致致死劑量范圍，然后在這個劑量范圍內(nèi)按幾何級數(shù)的間距設(shè)計5~7個劑量組，組間劑量呈等比級數(shù)（r），其比值為1.2~1.5。進行正式實驗。第十七頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日通過預(yù)試，找出受試化學(xué)物引起動物死亡的大致劑量范圍，以此為依據(jù)設(shè)計正式試驗的劑量和分組。按下式設(shè)計劑量組：

式中：r—相鄰兩組劑量的比值，一般為1.2～1.5，b—最低全致死劑量量，a—最高不致死劑量，n—設(shè)計的組數(shù)。分組恰當(dāng)與否也是確保實驗結(jié)果準(zhǔn)確的條件之一。因為組數(shù)過多，需要消耗較多的動物，還可能出現(xiàn)較大劑量組動物死亡率低于較小劑量組；組數(shù)過少，不能較精確求出LD50。第十八頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日根據(jù)公比(r)計算各組劑量各組劑量分別為第一組：a第二組：ar第三組：ar2第四組：ar3第五組：ar4第六組：ar5第十九頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日隨機化分組將實驗動物編號，從隨機數(shù)字表上任意橫行或縱行的任意數(shù)字開始，順序取下數(shù)字，標(biāo)于每個動物號下，然后用計劃組數(shù)去除隨機數(shù)字，所得余數(shù)即為所屬組別。第二十頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日

以20只動物的完全隨機分配為例動物編號1234567891011121314151617181920隨即數(shù)字5483805390755378934772095466954468676786除4后余數(shù)23012312130122300332所屬組別二三四一二三一二一三四一二二三四四三三二第二十一頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日完全隨機分配后各組所屬動物號

組別動物編號一47912二158132014三2610151819四3111617第二十二頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日20只動物完全隨機分配的結(jié)果

組別動物編號一4791219

二1581314

三26101518

四311161720第二十三頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日受試物的配制方法（1）受試化學(xué)物的量?。汗腆w受試物用稱量法，液體受試物用稱量法或吸量法。稱量法：取一定量的受試物放入已知重量的容器內(nèi)，稱重，定容，計算濃度mg/ml，備用。吸量法：依設(shè)計劑量計算出應(yīng)吸取液態(tài)受試物的容積，加入容量瓶中，用溶劑加至刻度。第二十四頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日吸量法，計算公式為：X＝式中：X——應(yīng)吸取受試物的容積；A——設(shè)計要求的受試物濃度（mg/ml）；V——容量瓶容積（ml）；d——受試化學(xué)物比重；A·Vd×1000第二十五頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日受試物的配制方法（2）受試化學(xué)物的稀釋等濃度稀釋法：等容量稀釋法：第二十六頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日等濃度稀釋法

將受試物配制成一種濃度，不同劑量組實驗動物單位體重所給受試物的體積不同，劑量越高，所用的體積越大；劑量越低，所用的體積越小。比如某受試物的試驗劑量分別為100、200、400和800mg/kg，受試物配制成10mg/ml，每組動物每10g體重分別給與0.1、0.2、0.4和0.8ml。第二十七頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日等容量稀釋法

將受試物配制成不同濃度，不同劑量組實驗動物單位體重所給受試物的體積相同，劑量越大，受試化學(xué)物配制的濃度越高。上例中，若實驗動物按0.2ml/10gb.w容量灌胃,則應(yīng)配制成4個不同濃度,即5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml和40mg/ml。第二十八頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日染毒途徑的選擇經(jīng)消化道染毒：經(jīng)口灌胃法采用專用小鼠灌胃針。左手抓住動物雙耳后至背部的皮膚，將動物固定成垂直體位，腹部面向操作。右手持注射器，將針頭由動物口腔側(cè)插入，避牙齒，沿咽后壁緩緩滑人食管。若遇阻力，可輕輕上下滑動探索，一旦感覺阻力消失，即深人至胃部。如遇動物掙扎，應(yīng)停止進針或?qū)⑨槹纬?，千萬不能強行插入，以免穿破食，甚至誤入氣管，導(dǎo)致動物立即死亡。

第二十九頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日觀察指標(biāo)中毒癥狀：確定靶器官①行動：不安定、多動、發(fā)聲；②神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)：舉尾、振顫、痙攣、運動失調(diào)、姿態(tài)異常；③自主神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)：眼球突出、流涎、流淚、排尿、下瀉、豎毛、皮膚變色、呼吸。死亡和死亡時間病理學(xué)檢查及其他指標(biāo)

第三十頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日LD50的計算（改良寇氏法）當(dāng)急性毒性試驗的最大劑量死亡率為100%，最小劑量的死亡率為0%；各組動物數(shù)相等；各劑量組的組距等比或劑量對數(shù)等差時，用下述基本公式計算LD50：第三十一頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日當(dāng)不含0%和100%死亡率時，用下式計算LD50：Xm—最大劑量對數(shù)P—各劑量組死亡率Pm—最高死亡率q—各組劑量存活率，q=1-p以上各式中：i—組距，即相鄰兩組劑量對數(shù)劑量之差Pn—最低死亡率∑p—各劑量組死亡率之和n—各組動物數(shù)第三十二頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日LD50的局限性消耗動物量大獲得的信息有限動物死亡和觀察的癥狀不足以反應(yīng)生理學(xué)、血液學(xué)和其它化驗檢查所提供的毒性信息有許多因素影響LD50值的測定，實際上測得的LD50是近似值

第三十三頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期日急性毒性試驗不等于L