治帶片中苦參堿及氧化苦參堿的HPLC法測(cè)定

治帶片中苦參堿及氧化苦參堿的HPLC法測(cè)定【摘要】目的建立治帶片中苦參堿及氧化苦參堿的高效液相色譜(HPLC)測(cè)定方法。方法色譜柱：LichrospherNH2(×250mm，5μm)，C18保護(hù)柱；流動(dòng)相：乙腈無(wú)水乙醇/L磷酸水溶液(80∶10∶10)；檢測(cè)波長(zhǎng)212nm；流速/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量20μL。結(jié)果苦參堿和氧化苦參堿線(xiàn)性范圍均為μg/mL，回歸方程苦參堿為：C=×10-4A+，r=；氧化苦參堿為：C=×10-4A+，r=，平均回收率分別為%和%，RSD分別為%和%。結(jié)論本法簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】治帶片；苦參堿；氧化苦參堿；高效液相色譜

DeterminationofAlkaloidsinZhidaipianTabletsbyhighperformanceliquidchromatogram

ABSTRACT:ObjectiveToestablishamethodofhighperformanceliquidchromatogram(HPLC)formeasuringmatrineandoxymatrineinZhidaipianTablets.MethodsALichrospherNH2column(×250mm,5μm)wasusedwithamobilephaseconsistingofacetonitrileethanol/Lphosphoricacid(80∶10∶10),andinaflowrateof/min.Thedetectivewavelengthwas212nm.Columntemperaturewasroomtemperatureandtheinjectionquantitywas20μL.ResultsThesampleswerewellseparated.Thelinearrangewasthesameforthetarget(μg/mL).ThelinearequationsformatrinewasC=×10-4A+,thecorrelationcoefficientwas,andforoxymatrinewasC=×10-4A+,whilethecorrelationcoefficientwas,respectively.Themeanrecoveryratewere%and%,respectively.RSDwas%and%,respectively(n=6).ConclusionThemethodissimple,reliable,accurateandcanbeusedtothequalitycontroloftheZhidaipianTablets.

KEYWORDS:Zhidaipiantablets;matrine;oxymatrine;highperformanceliquidchromatogram

治帶片處方由墓頭回、苦參、金櫻子、知母(鹽炒)、蒼術(shù)(炒)等組成。清利濕熱，止帶。用于濕熱下注，赤帶，白帶，黃帶等癥。方中苦參為君藥，其有效成分是苦參堿和氧化苦參堿。為有效控制藥品質(zhì)量,對(duì)制劑中的苦參堿和氧化苦參堿采用高效液相色譜(HPLC)法進(jìn)行含量測(cè)定。

1材料與方法

儀器與試藥日本島津LC10AT高效液相色譜輸液泵，SPD10AVP紫外可見(jiàn)檢測(cè)器，島津7725i進(jìn)樣器，ANASTAR色譜工作站，DL360超聲波清洗器(浙江象山縣石浦海天電子儀器廠，功率240W，頻率35kHz)，乙腈、無(wú)水乙醇為色譜純，其他試劑為分析純?？鄥A和氧化苦參堿對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(編號(hào)分別為110805200306和0780200004)，供含量測(cè)定用。治帶片由西安阿房宮制藥有限公司提供(批號(hào)20030611-20030613)。

對(duì)照品溶液的配制精密稱(chēng)取苦參堿、氧化苦參堿對(duì)照品適量，用乙腈無(wú)水乙醇(8∶1)溶解，分別制成/mL溶液作為苦參堿、氧化苦參堿對(duì)照品儲(chǔ)備液。

供試品溶液的制備取治帶片2片，研細(xì)，稱(chēng)，于100mL磨口錐形瓶中，加入20mL氯仿及濃氨液，密塞，稱(chēng)定重量。超聲處理30min，放冷，用氯仿補(bǔ)足失去的重量，搖勻、過(guò)濾，取續(xù)濾液5mL，通過(guò)中性氧化鋁柱(100-200目5g，裝前于高溫電爐400℃處理2h，冷卻后裝于內(nèi)徑1cm層析柱中)。依次用氯仿、氯仿甲醇(7∶3)各20mL洗脫，合并洗脫液，揮去并趕盡溶劑，殘?jiān)靡译鏌o(wú)水乙醇(8∶1)溶解并定容至，測(cè)定時(shí)再用乙腈無(wú)水乙醇(8∶1)稀釋5倍并過(guò)μm微孔濾膜，取續(xù)濾液測(cè)定。

陰性對(duì)照溶液的制備依處方工藝制成不含苦參藥材的片劑，再按方法制成陰性對(duì)照溶液。

2結(jié)果

色譜條件色譜柱LichrospherC18(×250mm，5μm)，C18保護(hù)柱(部件號(hào)：011200002)；流動(dòng)相為乙腈無(wú)水乙醇/L磷酸水溶液(80∶10∶10)，使用前經(jīng)μm微孔濾膜過(guò)濾并脫氣；檢測(cè)波長(zhǎng)212nm；流速/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量20μL。在此條件下，對(duì)照品、供試品及陰性對(duì)照溶液的色譜圖如圖1所示。

圖1治帶片HPLC色譜圖(橫坐標(biāo)為時(shí)間：min)

HPLCgraphsofmatrineandoxymatrineinZhidaipianTablets

a:Standard;b:Sample;c:Blank;1:Matrine;2:Oxymatrine

線(xiàn)性關(guān)系考察用乙腈無(wú)水乙醇(8∶1)稀釋為分別含10μg/mL的苦參堿和氧化苦參堿的對(duì)照品溶液，制成含、、、、、μg/mL苦參堿和氧化苦參堿的對(duì)照品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定。以峰面積A對(duì)對(duì)照品溶液的濃度C作曲線(xiàn)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，回歸方程苦參堿為：C=×10-4A+，r=；氧化苦參堿為：C=×10-4A+，r=。說(shuō)明苦參堿和氧化苦參堿質(zhì)量濃度在μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

供試品溶液制備方法的考察實(shí)驗(yàn)采用正交法對(duì)氯仿體積、超聲時(shí)間、氧化鋁重量等影響因素進(jìn)行了考察。

因素水平A氯仿體積(mL)：A1=10，A2=20，A3=30。B超聲時(shí)間(min)：B1=15，B2=30，B3=45。C氧化鋁重量(g)：C1=3，C2=4，C3=5。

實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果精密稱(chēng)取研細(xì)的同批號(hào)相同重量供試品于100mL磨口錐形瓶中，分別按L9(34)正交表(表1)進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)定苦參堿峰面積(ofmatrine)和氧化苦參堿峰面積(ofoxymatrine)，用統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，結(jié)果見(jiàn)表2-4。

供試品溶液制備條件的優(yōu)化上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)苦參堿而言，因素A、C對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均無(wú)顯著性影響()，B對(duì)結(jié)果有顯著性影響()，B1與B2、B3間有顯著性差異()，B2、B3間無(wú)顯著性差異()；對(duì)氧化苦參堿而言，因素A、B、C對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均無(wú)顯著性影響()?？紤]到實(shí)驗(yàn)操作便易等因素，供試品溶液最佳提取工藝為A2B2C3。

表1苦參堿和氧化苦參堿提取方法正交試驗(yàn)L9(34)表

Table1Theresultsoforthogonaltestforextractiontechnologyofmatrineandoxymatrine

表2苦參堿提取方法多因素方差分析

Table2Testsofbetweensubjectseffectsforextractiontechnologyofmatrine

表3苦參堿不同超聲時(shí)間提取的方差分析表

Table3Multiplecomparisonsofdifferentultrasonicextractingtimesofmatrine

表4氧化苦參堿提取方法多因素方差分析

Table4Testsofbetweensubjectseffectsforextractiontechnologyofoxymatrine

精密度試驗(yàn)按方法制備一份樣品，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次20μL，按色譜條件測(cè)定峰面積，結(jié)果苦參堿、氧化苦參堿峰面積積分值的RSD分別為%和%。

穩(wěn)定性試驗(yàn)按方法制備一份樣品，分別于0、2、4、6、8h精密吸取20μL，按色譜條件測(cè)定，記錄峰面積積分值，結(jié)果苦參堿、氧化苦參堿峰面積積分值的RSD分別為%和%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)取同批樣品5份，按方法制備供試品并按色譜條件測(cè)定，結(jié)果苦參堿、氧化苦參堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD分別為%、%。

回收率試驗(yàn)采用加標(biāo)回收法。取已知含量的同批樣品數(shù)片，研缽中研細(xì)，稱(chēng)重6份，分別精密加入苦參堿和氧化苦參堿對(duì)照品，按方法制備樣品并按色譜條件測(cè)定。結(jié)果苦參堿和氧化苦參堿的平均回收率分別為%和%，RSD分別為%和%(表5)，表明回收率良好。

表5治帶片中苦參堿和氧化苦參堿回收率試驗(yàn)結(jié)果

Table5ResultsofrecoverytestformatrineandoxymatrineinZhidaipiantablets

樣品測(cè)定按方法及方法分別測(cè)定不同生產(chǎn)批號(hào)的三批樣品，結(jié)果三批樣品含苦參堿和氧化苦參堿總量在/g之間。按每片計(jì)，每片含苦參堿和氧化苦參堿總量在之間。

3討論

苦參中苦參堿的含量測(cè)定藥典以薄層掃描法測(cè)定[1]。本文參照文獻(xiàn)[25]，在堿性條件下，用氯仿提取苦參堿后，過(guò)中性氧化鋁柱以消除其他干擾成分，并比較了不同氧化鋁的處理方法對(duì)消除干擾成分的效果，試驗(yàn)證明，氧化鋁在400℃高溫電爐里處理2h后，效果更好。應(yīng)用HPLC，以LichrospherNH2柱(×250mm)為固定相，乙腈無(wú)水乙醇磷酸水溶液為流動(dòng)相，同時(shí)測(cè)定苦參堿和氧化苦參堿含量。通過(guò)正交L9(34)試驗(yàn)對(duì)氯仿體積、超聲時(shí)間、氧化鋁重量等影響苦參堿和氧化苦參堿提取的因素進(jìn)行了考察，為測(cè)定治帶片中苦參堿和氧化苦參堿的含量提供了一個(gè)可靠的方法。

【參考文獻(xiàn)】

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