飼草中主要農(nóng)藥殘留及真菌毒素的測定：飼草中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的測定　液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

飼草中主要農(nóng)藥殘留及真菌毒素的測定：飼草中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法警示：整個(gè)分析操作過程應(yīng)在指定區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。該區(qū)域應(yīng)避光（陽光），具備相對獨(dú)立的操作臺和廢棄物存放裝置。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，操作者應(yīng)按照接觸劇毒物的要求采取相應(yīng)的保護(hù)措施。范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼草中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼草中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的測定。本方法檢出限：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇為10μg/kg和玉米赤霉烯酮為5μg/kg；定量限：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇為25μg/kg和玉米赤霉烯酮為10μg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法原理試樣經(jīng)乙腈-甲酸水溶液提取，經(jīng)QuEChERS萃取包凈化后，氮?dú)獯蹈桑状?水溶液復(fù)溶，液相色譜分離，串聯(lián)質(zhì)譜檢測，內(nèi)標(biāo)法定量。試劑或材料除非另有說明，僅使用分析純試劑，水符合GB/T6682一級水的規(guī)定。甲醇：色譜純。甲酸：色譜純。乙腈：色譜純。提取液：準(zhǔn)確量取乙腈（4.3）800mL，加入甲酸（4.2）10mL，用水定容至1000mL。甲醇溶液：量取甲醇（4.1）100mL，加入水100mL，混勻，備用。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON，C15H20O6，CAS：51481-10-8）標(biāo)準(zhǔn)溶液：100μg/mL。玉米赤霉烯酮（ZEN，C18H22O5，CAS：17924-92-408）標(biāo)準(zhǔn)溶液：100μg/mL。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇同位素內(nèi)標(biāo)（13C15-DON，13C15H20O6）溶液：25μg/mL?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)中間液溶液：準(zhǔn)確吸取1.0mL脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.6）和0.1mL玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.7）于10mL容量瓶中，用水定容，此時(shí)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇濃度為10μg/mL，玉米赤霉烯酮濃度為1μg/mL，于-20℃冰箱保存。同位素內(nèi)標(biāo)溶液：準(zhǔn)確吸取1.0mL脫氧雪腐鐮刀菌烯醇同位素標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.8）于10mL容量瓶中，用水定容，此時(shí)濃度為2.5μg/mL，于-20℃冰箱保存。QuEChERS鹽包：4.0g硫酸鎂，1.0g氯化鈉，1.0g檸檬酸鈉，0.5g檸檬酸二鈉鹽倍半水合物。微孔濾膜：有機(jī)相，0.22μm。儀器設(shè)備液相色譜—三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀：配電噴霧離子源（ESI源）。分析天平：感量0.01g。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于8000r/min。氮吹儀，可控溫。粉碎機(jī)。渦旋混合器。恒溫振蕩器。試樣的制備樣品粉碎后充分混勻，于–18℃下保存。測定步驟前處理準(zhǔn)確稱取平行試樣，干樣2g或鮮樣5g于50mL離心管中，加入20mL提取液（4.4），渦旋混勻后于恒溫振蕩器中振蕩30min；加入QuEChERS鹽包（4.11），渦旋2min，充分混勻，8000r/min離心5min，取2mL上清液，加20μL同位素內(nèi)標(biāo)溶液（4.10），置于40℃水浴中氮吹至近干；用甲醇溶液（4.5）復(fù)溶，定容至0.5mL，旋渦振蕩1min，過微孔濾膜（4.12），用于測定。測定液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：色譜柱：C18色譜柱，柱長100mm，柱內(nèi)徑2.1mm，顆粒內(nèi)徑1.7?μm，或性能相當(dāng)者；流動相：0.1%甲酸溶液（流動相A），乙腈（流動相B）；流速：0.3mL/min；進(jìn)樣量：2.0μL；柱溫：40℃；流動相及梯度洗脫條件見表1。流動相梯度洗脫條件時(shí)間min流動相A流動相B090100.290102.010904.010904.590107.09010質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：離子源：電噴霧離子源（ESI+）；毛細(xì)管電壓：3.5KV；離子源溫度：120℃；脫溶劑氣溫度：500℃；掃描模式：正離子；監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），監(jiān)測條件見表2。多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）條件化合物名稱母離子m/z錐孔電壓V定量離子m/z碰撞能量eV定性離子m/z碰撞能量eVDON297.130249.110203.116ZEN319.120283.119187.11113C15-DON312.030263.016——標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確吸取適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和同位素內(nèi)標(biāo)溶液，用甲醇水溶液（4.5）配制成10?μg/L、20?μg/L、50?μg/L、100?μg/L、200?μg/L和500?μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，其中同位素內(nèi)標(biāo)溶液濃度為100?μg/L，上機(jī)測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。定性及定量定性測定通過試樣色譜圖的特征離子與相應(yīng)對照溶液各色譜峰的特征離子相對照定性。試樣與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間的相對誤差不大于2.5%；試樣特征離子的相對離子豐度與標(biāo)準(zhǔn)品特征離子的相對離子豐度一致，相對離子豐度偏差不超過表3的規(guī)定，則可判斷試樣中含有脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮。定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許誤差相對離子豐度＞50%＞20%～50%（含）＞10%～20%（含）≤10%允許的相對偏差±20±25±30±50定量外標(biāo)法定量。試樣溶液的測定將基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液依次注入液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀中，保留時(shí)間和定性離子定性，測定定量離子峰面積，待測樣液中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的定量測定線性范圍之內(nèi)，超過線性范圍時(shí)應(yīng)根據(jù)測定濃度進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后再進(jìn)行分析。空白試驗(yàn)除不加試料外，按照7.1～7.4規(guī)定進(jìn)行平行操作。分析結(jié)果的表述試料中被測脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮?dú)埩袅恳再|(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位以微克每千克（μg/kg）表示，按公式（1）計(jì)算： （SEQ標(biāo)準(zhǔn)自動公式\*ARABIC1）式中：——試料中被測物殘留量，單位為微克每千克（μg/kg）；——從基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的樣液中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的質(zhì)量濃度，單位為微克每升（μg/L）；V1——樣品提取液體積，單位為毫升（mL）；V2——待濃縮的上清液體積，單位為毫升（mL）；V3——試樣液最終定容體積，單位為毫升（mL）；m——試料的質(zhì)量，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，測XX果用平行測定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測XX果的絕對差值