土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)已用

課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)專題2微生物的培養(yǎng)與應用本文檔共58頁；當前第1頁；編輯于星期二\0點44分一、課題背景1、尿素的利用尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細菌利用尿素的原因土壤中的細菌分解尿素是因為它們能合成脲酶CO(NH2)2脲酶+H2O+CO22NH33、本課題目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌②統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌本文檔共58頁；當前第2頁；編輯于星期二\0點44分1、實例：啟示：尋找目的菌種時要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應的環(huán)境中去尋找。原因：因為熱泉溫度70～800C，淘汰了絕大多數(shù)微生物只有耐熱的Taq細菌被篩選出來。DNA多聚酶鏈式反應（PCR)是一種在體外將少量DNA大量復制的技術，此項技術要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。一、研究思路㈠篩選菌株㈡統(tǒng)計菌落數(shù)目㈢設置對照本文檔共58頁；當前第3頁；編輯于星期二\0點44分要分離一種微生物，必須根據(jù)該微生物的特點，包括營養(yǎng)、生理、生長條件等；方法：⑴抑制大多數(shù)微生物的生長⑵造成有利于該菌生長的環(huán)境結果：培養(yǎng)一定時間后，該菌數(shù)量上升，再通過平板劃線法或稀釋涂布平板法等方法對它進行純化培養(yǎng)分離。2、實驗室中微生物的篩選原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物生長。選擇培養(yǎng)基：在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。本文檔共58頁；當前第4頁；編輯于星期二\0點44分15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)所需培養(yǎng)基：在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素〖思考1〗本文檔共58頁；當前第5頁；編輯于星期二\0點44分①從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于

培養(yǎng)基，是由于加入了凝固劑

。②從功能上看屬于

培養(yǎng)基，此培養(yǎng)基的

只有尿素，能利用尿素的微生物可分泌脲酶，因此能在此培養(yǎng)基上生長，此培養(yǎng)基屬于

培養(yǎng)基。〖思考2〗該培養(yǎng)基對微生物

（具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機制是

。具有只有能夠以尿素作為氮源的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長選擇固體瓊脂選擇氮源〖思考3〗15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4本文檔共58頁；當前第6頁；編輯于星期二\0點44分培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。4、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4本文檔共58頁；當前第7頁；編輯于星期二\0點44分活學活用1.在缺乏氮源的培養(yǎng)基上，大部分微生物無法生長；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細菌和放線菌的生長；在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細菌和霉菌的生長。利用上述選擇培養(yǎng)基依次能從混雜的微生物群體中分離出(

)A.乳酸菌、金黃色葡萄球菌、放線菌B.固氮細菌、大腸桿菌、放線菌C.固氮細菌、霉菌、放線菌D.固氮細菌、金黃色葡萄球菌、放線菌C本文檔共58頁；當前第8頁；編輯于星期二\0點44分（1）原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。（2）常用方法：稀釋涂布平板法。每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。（二）統(tǒng)計菌落數(shù)目：1.活菌計數(shù)法（3）計算公式：（間接計數(shù)法）本文檔共58頁；當前第9頁；編輯于星期二\0點44分想一想，如何根據(jù)平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板上的菌落數(shù)的平均值，然后按以下公式進行計算。旁欄思考題每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。本文檔共58頁；當前第10頁；編輯于星期二\0點44分實例分析P22

第二位同學的統(tǒng)計結果更接近真實值。因為第一位同學只涂布了一個平板，沒有設置重復組，因此結果不具有說服力。你認為哪個同學的結果更接近真實值？你認為這兩位同學的實驗需要改進嗎？如果需要，如何改進？

都需要。第一位同學在該濃度下可以多涂布幾個平板；第二位同學考慮到設置重復組的問題，涂布了三個平板，但是其中1個平板的計數(shù)結果與另外2個相差太遠，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯誤，因此，不能簡單地將3個平板的計數(shù)值用來求平均值，可以在該濃度下重新進行實驗。本文檔共58頁；當前第11頁；編輯于星期二\0點44分注意事項①為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30——300的平板上進行計數(shù)。②為使結果接近真實值可將同一稀釋度涂布三個或三個以上的平板，培養(yǎng)統(tǒng)計菌落數(shù)，計算出菌落平均值。③統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。④恰當?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計菌落數(shù)目的關鍵，一般以三個稀釋度中的第二個稀釋度所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右時為最好。本文檔共58頁；當前第12頁；編輯于星期二\0點44分2、顯微鏡直接計數(shù)：利用血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。（二）.統(tǒng)計菌落數(shù)目：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運動細菌的計數(shù)；需要相對高的細菌濃度；個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察；缺點本文檔共58頁；當前第13頁；編輯于星期二\0點44分將含已知數(shù)目的紅細胞液體與待測的菌液按1：1均勻混合，在顯微鏡下數(shù)出各自的數(shù)目，然后求菌液中的細胞數(shù)目。（比例計數(shù)法，類似與標志重捕法）待測樣品等量的已知含量的紅細胞混勻涂抹測定：紅細胞數(shù)目細菌數(shù)目計算單位體積內(nèi)的細菌數(shù)目細菌紅細胞【補充】顯微鏡直接計數(shù)是測定微生物的方法。本文檔共58頁；當前第14頁；編輯于星期二\0點44分舉例：已知紅細胞濃度為M個/mL，從體積為NmL的大腸桿菌培養(yǎng)液中取出大桿菌液與紅細胞液等量均勻混合后，涂片，染色，鏡檢。在同一視野中發(fā)出有紅細胞W個，大腸桿菌Y個，求NmL大腸桿培養(yǎng)液中大腸桿菌的個數(shù)X是多少？X＝N×M×YW(個)觀察到的紅細胞平均數(shù)/觀察到的細菌平均數(shù)＝紅細胞含量/細菌含量（類似于標志重捕法）公式W/Y＝M/X(每mL中）NmL大腸桿培養(yǎng)液中大腸桿菌的個數(shù)X為：本文檔共58頁；當前第15頁；編輯于星期二\0點44分2.用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目。在某稀釋濃度下某同學做了若干個平板并統(tǒng)計每個平板的菌落數(shù)，最接近樣品中菌體數(shù)真實值的是(

)A.菌落數(shù)量最多的平板B.菌落數(shù)量最少的平板C.菌落數(shù)量適中的平板D.取若干個平板菌落數(shù)量的平均值D活學活用本文檔共58頁；當前第16頁；編輯于星期二\0點44分設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。（三）設置對照：設置對照的方法：①空白對照：不給對照組任何處理因素；②條件對照：給對照組施以部分實驗因素，但不是所要研究的處理因素；③自身對照：對照組和實驗組都在同一研究對象上進行；④相互對照：不單設對照組，而是幾個實驗組相互對照。本文檔共58頁；當前第17頁；編輯于星期二\0點44分教材提供的案例中A同學的結果與其他同學不同，可能的解釋有兩種：一是由于土樣不同；

二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。如何設置對照實驗來確定原因？方案一：其他同學用與A同學一樣的土樣進行實驗。如果結果與A同學一致，則證明A同學操作無誤；如果結果不同，則證明A同學存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。實例：教材P23本文檔共58頁；當前第18頁；編輯于星期二\0點44分教材提供的案例中A同學的結果與其他同學不同，可能的解釋有兩種：一是由于土樣不同；

二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。如何設置對照實驗來確定原因？方案二：將A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。實例：教材P23小結：通過這個事例可以看出，實驗結果要有說服力，對照實驗的設置是必不可少的。本文檔共58頁；當前第19頁；編輯于星期二\0點44分9本文檔共58頁；當前第20頁；編輯于星期二\0點44分實驗設計：實驗設計包括對實驗方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實施步驟以及時間安排等的綜合考慮和安排。本文檔共58頁；當前第21頁；編輯于星期二\0點44分二實驗設計與操作下面是土壤中尿素分解菌的分離與計數(shù)的實驗流程示意圖，請結合教材提供的資料，進行實驗設計，并寫出詳細的實驗方案：本文檔共58頁；當前第22頁；編輯于星期二\0點44分菌落計數(shù)配制土壤溶液系列稀釋涂布平板與培養(yǎng)實驗設計：實驗方案：本文檔共58頁；當前第23頁；編輯于星期二\0點44分（一）土壤取樣（三）樣品的稀釋（四）取樣涂布（五）微生物的培養(yǎng)與觀察并計數(shù)（六）鑒定

實驗的具體操作

（二）制備培養(yǎng)基：本文檔共58頁；當前第24頁；編輯于星期二\0點44分◆應在火焰旁稱取土壤10g?！粼谙♂屚寥廊芤旱倪^程中，每一步都要在火焰旁進行◆分離不同的微生物采用不同的稀釋度。原因：不同微生物在土壤中含量不同。目的：保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計數(shù)的平板。（三）樣品的稀釋特別注意的幾個具體操作

本文檔共58頁；當前第25頁；編輯于星期二\0點44分為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？①土壤中各類微生物的數(shù)量（單位：株/kg）是不同的。測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？

為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進行分離，同時還應當有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。旁欄思考題微生物細菌放線菌真菌稀釋度104、105、106103、104、105102、103、104③保證獲得菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。②稀釋度本文檔共58頁；當前第26頁；編輯于星期二\0點44分（四）取樣涂布◆實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等。◆如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個重復的菌落數(shù)相差較大，表明試驗不精確，需要重新實驗。特別注意的幾個具體操作

本文檔共58頁；當前第27頁；編輯于星期二\0點44分3.下列是關于“檢測土壤中細菌總數(shù)”實驗操作的敘述，其中錯誤的是(

)A.用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板。B.取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上。C.將實驗組和對照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時。D.確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實驗組平板進行計數(shù)。活學活用D本文檔共58頁；當前第28頁；編輯于星期二\0點44分4.測定土壤中細菌數(shù)量一般選用104、105和106倍的稀釋液進行平板培養(yǎng)，而測定真菌的數(shù)量一般選用102、103和104倍稀釋，其原因是(

)A.細菌個體小，真菌個體大B.細菌易稀釋，真菌不易稀釋C.細菌在土壤中數(shù)量比真菌多D.隨機的，沒有原因C活學活用本文檔共58頁；當前第29頁；編輯于星期二\0點44分（五）微生物的培養(yǎng)與觀察并計數(shù)在菌落計數(shù)時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。

選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，以防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目。培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。

細菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d霉菌：25～28℃的溫度下培養(yǎng)3～4d。當菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。在同一稀釋度下，至少對3個平板進行重復計數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對應的稀釋度計算出樣品中細菌的數(shù)目。

特別注意的幾個具體操作

本文檔共58頁；當前第30頁；編輯于星期二\0點44分微生物的培養(yǎng)與觀察關注菌落的形狀、大小、隆起程度、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。本文檔共58頁；當前第31頁；編輯于星期二\0點44分本文檔共58頁；當前第32頁；編輯于星期二\0點44分〖注意〗研究未知的微生物，一定要注意進行規(guī)范的無菌操作，以防被致病的微生物感染，實驗后，一定要洗手。（六）鑒定：篩選后必鑒定鑒定（鑒別）培養(yǎng)基：加入某種指示劑或化學藥品，不影響微生物的生存。1、酚紅培養(yǎng)基：鑒定分解尿素的細菌是否存在2、伊紅—美藍培養(yǎng)基：鑒定大腸桿菌是否存在特別注意的幾個具體操作

本文檔共58頁；當前第33頁；編輯于星期二\0點44分1、酚紅培養(yǎng)基：

鑒定分解尿素的細菌。原理：脲酶催化尿素分解成氨→培養(yǎng)基堿性增強→酚紅變紅→脲酶陽性2、伊紅—美藍培養(yǎng)基：

鑒定大腸桿菌。原理：代謝產(chǎn)物與伊紅—美藍結合→菌落呈深紫色并帶有金屬光澤。鑒定（鑒別）培養(yǎng)基的實例：本文檔共58頁；當前第34頁；編輯于星期二\0點44分1.實驗設計和操作提示步驟實驗操作操作提示土壤取樣從酸堿度接近

潮濕的土壤中取樣。先鏟去表層土_____左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。取樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封都要經(jīng)過____制備培養(yǎng)基分別配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和

為唯一氮源的

培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為

，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了

作用3cm選擇滅菌選擇中性尿素對照填一填本文檔共58頁；當前第35頁；編輯于星期二\0點44分樣品的稀釋和涂布①稱取

g土樣加到盛有

mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻；②吸取上清液

mL，轉(zhuǎn)移至盛有

mL的無菌水的無菌大試管中，按照上圖流程進行樣品的稀釋；③按照由107～103稀釋度的順序分別吸取

mL進行

操作。按照濃度

到

的順序涂布平板，不必更換移液管①應在

旁稱取土樣；②由于初次實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個較為寬泛的范圍______倍的稀釋液；③實驗時要對所用的平板、試管作好

。如培養(yǎng)皿要注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、

、培養(yǎng)物等高稀釋度1090190.1平板涂布低火焰103～107標記本文檔共58頁；當前第36頁；編輯于星期二\0點44分培養(yǎng)將涂布好的培養(yǎng)皿放在______

℃溫度下培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時間的延長，會有不同的菌落產(chǎn)生。比較牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等，并做好記錄在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應明顯____選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，才說明選擇培養(yǎng)基有____作用30～37選擇多于本文檔共58頁；當前第37頁；編輯于星期二\0點44分計數(shù)當菌落數(shù)目____時，選取菌落數(shù)在__

的平板進行計數(shù)。在同一稀釋度下，至少對___個平板進行重復計數(shù)，然后求出_

，并根據(jù)平板所對應的稀釋度計算出樣品中細菌的數(shù)目①如果得到了____________菌落數(shù)目符合要求的平板，則說明稀釋操作比較成功；②如果同一稀釋倍數(shù)的三個重復的菌落數(shù)相差較大，表明實驗不精確，需要___

；③在菌落計數(shù)時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，以防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目平均值重新實驗穩(wěn)定30～30032個或2個以上本文檔共58頁；當前第38頁；編輯于星期二\0點44分三、操作提示

無菌操作

做好標記

制定計劃

四、結果分析與評價

（一）如何判斷培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落？

對照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。

牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。本文檔共58頁；當前第39頁；編輯于星期二\0點44分（二）如何判斷樣品的稀釋操作是否成功？如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30～300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)。如果學生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計的結果應該接近。如果結果相差太遠，需要進一步分析產(chǎn)生差異的原因。（三）重復組的結果是否一致的判定方法：四、結果分析與評價

本文檔共58頁；當前第40頁；編輯于星期二\0點44分課題小結稀釋涂布平板法顯微鏡直接計數(shù)法目的菌株本文檔共58頁；當前第41頁；編輯于星期二\0點44分1.對細菌群體生長規(guī)律測定的正確的表述是（）A.在液體培養(yǎng)基上進行B.至少接種一種細菌C.接種一個細菌D.及時補充消耗的營養(yǎng)物質(zhì)2.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（）A.培養(yǎng)細菌B.培養(yǎng)真菌C.使需要的微生物大量繁殖D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素課堂訓練A

CD本文檔共58頁；當前第42頁；編輯于星期二\0點44分4.下列說法不正確的是（）A.科學家從70－80度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNA聚合酶B.統(tǒng)計某一稀釋度的5個平板的菌落數(shù)依次為M1、M2、M3、M4、M5，以M3作為該樣品菌落數(shù)的估計值C.設置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度D.同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量最大，種類最多。5.為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中加入（）A.較多的氮源物質(zhì)B.較多的碳源物質(zhì) C.青霉素類藥物D.高濃度食鹽BC本文檔共58頁；當前第43頁；編輯于星期二\0點44分（寧夏，15分）（1）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮______、______和滲透壓等條件。由于該細菌具有體積小、結構簡單、變異類型容易選擇、______、___________________等優(yōu)點，因此常作為遺傳學研究的實驗材料。（2）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行________（消毒、滅菌）；操作者的雙手需要進行清洗和______；靜止空氣中的細菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能__________。（3）若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想使所得估計值更接近實際值，除應嚴格操作、多次重復外，還應保證待測樣品稀釋的_______。（4）通常，對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細菌進行初步的____________。（5）培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應采用的檢測方法是_________。

（6）若用大腸桿菌進行實驗，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過_______處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴散。溫度

酸堿度易培養(yǎng)生活周期短滅菌消毒損傷DNA的結構比例合適鑒定(或分類)

將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間,觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。滅菌本文檔共58頁；當前第44頁；編輯于星期二\0點44分8本文檔共58頁；當前第45頁；編輯于星期二\0點44分當堂檢測1.通常用來作為菌種鑒定的重要依據(jù)是(

)A.菌落 B.細菌形態(tài)C.細菌體積 D.細菌結構A2.從土壤中分離以尿素為氮源的細菌，下列實驗操作不正確的是(

)A.將土壤用無菌水稀釋，制備103～106土壤稀釋液B.將不同濃度的土壤稀釋液涂布于不同平板上C.用加入剛果紅指示劑的選擇培養(yǎng)基篩選分解尿素的細菌D.從周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶的菌落中挑取能夠分泌脲酶的菌株C本文檔共58頁；當前第46頁；編輯于星期二\0點44分3.請選出下列正確的操作步驟(

)①土壤取樣②稱取10g土壤，取出加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中③吸取0.1mL土壤溶液進行平板涂布④依次稀釋至101、102、103、104、105、106、107稀釋度A.①→②→③→④ B.①→③→②→④C.①→②→④→③ D.①→④→②→③C4.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑的目的是(

)A.篩選出能分解尿素的細菌B.對分離的菌種作進一步鑒定C.作細菌的營養(yǎng)成分D.如指示劑變藍就能準確地認定該菌能分解尿素B本文檔共58頁；當前第47頁；編輯于星期二\0點44分5.甘蔗是南方地區(qū)燃料酒精生產(chǎn)的重要原料。利用甘蔗生產(chǎn)燃料酒精的一般工藝流程為：甘蔗→榨汁(蔗糖)→酵母菌發(fā)酵→蒸餾→成品(燃料酒精)。(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精發(fā)酵菌種，對野生酵母菌進行誘變后通過篩選可以得到具有這些特性的突變菌，誘變及篩選過程如下：步驟1：野生菌液體培養(yǎng)一段時間后接受紫外線照射誘變處理。步驟2：制備選擇培養(yǎng)基。在基本培養(yǎng)基的基礎上，注意____________________________________和

，加瓊脂后滅菌，制成固體平板。步驟3：將紫外線照射后的菌液稀釋涂布平板。步驟4：根據(jù)_________________________________，篩選出突變菌。添加高濃度蔗糖(葡萄糖)調(diào)低pH是否能在選擇培養(yǎng)基上生長本文檔共58頁；當前第48頁；編輯于星期二\0點44分(2)上述步驟2、3和4的依據(jù)分別是________________________

。5.甘蔗是南方地區(qū)燃料酒精生產(chǎn)的重要原料。利用甘蔗生產(chǎn)燃料酒精的一般工藝流程為：甘蔗→榨汁(蔗糖)→酵母菌發(fā)酵→蒸餾→成品(燃料酒精)。(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精發(fā)酵菌種，對野生酵母菌進行誘變后通過篩選可以得到具有這些特性的突變菌，誘變及篩選過程如下：步驟2：制備選擇培養(yǎng)基。在基本培養(yǎng)基的基礎上，注意____________________________________和

，加瓊脂后滅菌，制成固體平板。步驟3：將紫外線照射后的菌液稀釋涂布平板。步驟4：根據(jù)_________________________________，篩選出突變菌。添加高濃度蔗糖(葡萄糖)調(diào)低pH是否能在選擇培養(yǎng)基上生長獲得單菌落；能生長的菌落具有耐