鹽析法分離蛋白質

鹽析法分離蛋白質本文檔共27頁；當前第1頁；編輯于星期一\17點53分沉淀定義沉淀特點應用范圍沉淀分類1.沉淀法概述本文檔共27頁；當前第2頁；編輯于星期一\17點53分鹽析法

有機溶劑沉淀法選擇性變性沉淀法等電點沉淀法離子型聚合物沉淀法聚電解質沉淀法高價金屬離子沉淀法沉淀法分類本文檔共27頁；當前第3頁；編輯于星期一\17點53分活性蛋白非活性蛋白理化性質溶解度提取方法蛋白質的理化性質的回顧

本文檔共27頁；當前第4頁；編輯于星期一\17點53分鹽析沉淀步驟加沉淀劑方式陳化條件脫鹽處理2.鹽析沉淀本文檔共27頁；當前第5頁；編輯于星期一\17點53分鹽析機理示意圖本文檔共27頁；當前第6頁；編輯于星期一\17點53分本文檔共27頁；當前第7頁；編輯于星期一\17點53分本文檔共27頁；當前第8頁；編輯于星期一\17點53分①鹽離子與蛋白質分子爭奪水分子，降低了用于溶解蛋白質的有效水量，減弱了蛋白質的水合程度，破壞了蛋白表面的水化膜，導致蛋白質溶解度下降；②鹽離子電荷的中和作用，使蛋白質溶解度下降；③鹽離子引起原本在蛋白質分子周圍有序排列的水分子的極化，使水活度降低。鹽析的機理本文檔共27頁；當前第9頁；編輯于星期一\17點53分Cohn方程式logS=β-KsIKs鹽析β鹽析二次鹽析鹽析沉淀基礎本文檔共27頁；當前第10頁；編輯于星期一\17點53分圖1碳氧血紅蛋白的溶解度與硫酸銨離子強度的關系圖本文檔共27頁；當前第11頁；編輯于星期一\17點53分不同蛋白質的溶解度曲線本文檔共27頁；當前第12頁；編輯于星期一\17點53分蛋白質的鹽析分布曲線本文檔共27頁；當前第13頁；編輯于星期一\17點53分溶解度曲線(a)和鹽析分布曲線(b)

本文檔共27頁；當前第14頁；編輯于星期一\17點53分對β影響對Ks影響鹽種類鹽濃度溫度pH值鹽析影響因素本文檔共27頁；當前第15頁；編輯于星期一\17點53分無機鹽種類的影響圖7不同鹽溶液中碳氧血紅蛋白的溶解度與離子強度的關系（25℃）

(○)NaCl;(▼)KCl;(?)MgSO4;(▲)NH4)SO4;(●)Na2SO4;(□)K2SO4;(■)檸檬酸三鈉本文檔共27頁；當前第16頁；編輯于星期一\17點53分溫度的影響本文檔共27頁；當前第17頁；編輯于星期一\17點53分pH對β的影響本文檔共27頁；當前第18頁；編輯于星期一\17點53分蛋白質起始濃度的影響本文檔共27頁；當前第19頁；編輯于星期一\17點53分二次鹽析本文檔共27頁；當前第20頁；編輯于星期一\17點53分鹽析操作本文檔共27頁；當前第21頁；編輯于星期一\17點53分3等電點沉淀實例①從豬胰臟中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝8.9，可先于pH3.0左右進行等電點沉淀，除去共存的許多酸性蛋白質(pI=3．O)。工業(yè)生產(chǎn)胰島素(pI＝5.3)時，先調pH至8.0除去堿性蛋白質，再調pH至3.0除去酸性蛋白質(同時加入一定濃度的有機溶劑以提高沉淀效果)。②堿性磷酸酯酶的pI沉淀提?。喊l(fā)酵液調pH4.0后出現(xiàn)含堿性磷酸酯酶的沉淀物，離心收集沉淀物。用pH9.0的0.1mol/LTris-HCl緩沖液重新溶解，加入20～40%飽和度的硫酸銨分級，離心收集的沉淀Tris-HCl緩沖液再次沉淀，即得較純的堿性磷酸酯酶。本文檔共27頁；當前第22頁；編輯于星期一\17點53分4有機溶劑沉淀原理圖本文檔共27頁；當前第23頁；編輯于星期一\17點53分有機溶劑沉淀實例本文檔共27頁；當前第24頁；編輯于星期一\17點53分酵母干粉中加入0.066mol/L磷酸氫二鈉溶液，37℃水浴保溫2h，室溫攪拌3h，離心收集上清液，升溫至55℃，保溫20min后迅速冷卻離心去除熱變性蛋白，上清液中多為熱穩(wěn)定性較高的醇脫氫酶。5選擇性熱變性沉淀實例本文檔共27頁；當前第25頁；編輯于星期一\17點53分（1）非離子型聚合物沉淀法（2）聚電解質沉淀法（3）金屬離子沉淀法