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第十七章藥物制劑的微生物檢驗(yàn)演示文稿本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第1頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分優(yōu)選第十七章藥物制劑的微生物檢驗(yàn)本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第2頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分一、藥物的體外抑菌試驗(yàn)(一)體外抑菌試驗(yàn)

藥物的體外抑菌試驗(yàn)是常用抗菌試驗(yàn)方法,其中最常用的方法用系列稀釋法和瓊脂擴(kuò)散法。

1、連續(xù)稀釋法稀釋法有液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法和固體稀釋法(斜面法)兩種。這兩種方法都可以用來(lái)測(cè)定藥物的最小抑菌濃度(MIC):是指該藥物能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低濃度,通常用μg∕ml或U/ml表示。

本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第3頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分(1)液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第4頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分(2)固定培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法

1)平板法將系列濃度的藥物混入瓊脂平板,用微量加樣器或多點(diǎn)接種儀接種試驗(yàn)菌,可在一組平板上測(cè)定多種試驗(yàn)菌的MIC。2)斜面法將不同濃度的藥物混入培養(yǎng)基中制成斜面,然后在斜面接種一定量試驗(yàn)菌,培養(yǎng)后觀察其MIC值。本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第5頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分2.瓊脂擴(kuò)散法利用藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴(kuò)散,并在一定濃度范圍內(nèi)抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的原理進(jìn)行的。一般用于細(xì)菌和酵母菌的藥敏試驗(yàn)。1)

濾紙片法(紙碟法)濾紙片法是最常用的方法,適用于新藥的初篩試驗(yàn)(初步藥物是否有抗菌作用)及臨床的藥敏試驗(yàn)。濾紙片分濕、干兩種,可以在試驗(yàn)時(shí)用無(wú)菌紙片沾取藥物溶液放在含菌的平板表面,也以預(yù)先做成一定濃度的干燥紙片。一般來(lái)說(shuō)預(yù)先做成的干燥紙片實(shí)用一些而且準(zhǔn)確一些。本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第6頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分世界衛(wèi)生組織規(guī)定了抗菌藥物的敏感性評(píng)定標(biāo)準(zhǔn),在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)條件下根據(jù)抑菌圈大小來(lái)判斷,比如:抗生素或化療藥物抑菌圈直徑(mm)耐藥中敏敏感氯霉素≤1213-17≥18紅霉素≤1314-17≥18四環(huán)素≤1415-18≥19卡那霉素≤1314-17≥18本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第7頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分(2)挖溝法(3)打孔法本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第8頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分(二)體外殺菌試驗(yàn)殺菌試驗(yàn)是用來(lái)評(píng)價(jià)藥物對(duì)微生物的致死活性的。

1、最低殺菌濃度(MBC)(最小致死濃度MLC)的測(cè)定按液體培養(yǎng)基稀釋法的操作方法測(cè)定藥物的MIC。然后把未長(zhǎng)出菌的各個(gè)試管培養(yǎng)液分別移種到無(wú)菌平板上,培養(yǎng)后凡是平板上無(wú)菌生長(zhǎng)的藥物最低濃度就是最小致死濃度(MLC)。如果是細(xì)菌的話可以稱為最小殺菌濃度(MBC)。本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第9頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分2、

活菌計(jì)數(shù)法將定量的試驗(yàn)菌加入到一定濃度的定量藥物中,作用一定時(shí)間后,取樣進(jìn)行活菌數(shù)計(jì)數(shù),從存活的微生物數(shù)量計(jì)算出藥物對(duì)試驗(yàn)菌的致死率,從而判斷藥物的殺菌能力?;罹?jì)數(shù)一般是將定量的藥物與試驗(yàn)菌作用后混合液稀釋后,混入瓊脂培養(yǎng)基做成平板,培養(yǎng)后數(shù)平板上形成的菌落數(shù),由于一個(gè)菌落是由一個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的,所以可以用菌數(shù)乘以稀釋倍數(shù),計(jì)算出混合液中存活的細(xì)菌數(shù)。本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第10頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分3、酚系數(shù)測(cè)定(石炭酸系數(shù)測(cè)定)酚系數(shù)是以酚為標(biāo)準(zhǔn),將待測(cè)的化學(xué)消毒劑與殺菌效力相比較,所得的就是殺菌效力的比值。由于各種化學(xué)消毒劑殺菌原理各不相同,因而這種方法僅僅適用于酚類消毒劑殺菌效力的測(cè)定。具體的測(cè)定方法是分別將酚及待測(cè)化學(xué)消毒劑按不同比例稀釋,各取5ml放到試管中,再加入經(jīng)24小時(shí)培養(yǎng)后的菌懸液各0.5ml,混勻后放入20℃水浴中,5、10、15分鐘分別取一接種環(huán)混合液移種到另一支5ml的肉湯培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)24小時(shí)記錄生長(zhǎng)情況。本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第11頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第12頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分(三)聯(lián)合抗菌試驗(yàn)聯(lián)合抗菌試驗(yàn)主要用于測(cè)定兩種抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的相互影響。兩種抗菌藥聯(lián)合應(yīng)用時(shí)抗菌作用加強(qiáng)的稱為協(xié)同作用;抗菌作用減弱的稱為拮抗作用;相互無(wú)影響的稱為無(wú)關(guān)。常用的聯(lián)合抗菌試驗(yàn)的方法有以下幾種。本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第13頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分出現(xiàn)4種結(jié)果:①無(wú)關(guān)作用小,兩種藥物聯(lián)合作用的活性等于其單獨(dú)活性;②拮抗作用,兩種藥物聯(lián)合作用顯著低于單獨(dú)抗菌活性;③累加作用,兩種藥物聯(lián)合作用時(shí)的活性等于兩種單獨(dú)抗菌活性之和;④協(xié)同作用,兩種藥物聯(lián)合作用顯著大于其單獨(dú)作用的總和。本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第14頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分1、棋盤稀釋法常用的定量方法,首先分別測(cè)定擬聯(lián)合的抗菌藥物對(duì)檢測(cè)菌的MIC。藥物最高濃度為MIC的2倍,對(duì)倍稀釋。兩種藥物的稀釋分別在方陣的縱列和橫列進(jìn)行,這樣在每管(孔)中可得到不同濃度組合的兩種藥物混合液。接種菌量為5×105CUF/ml,35℃孵育18h后觀察結(jié)果。計(jì)算部分抑菌濃度(FIC)指數(shù)。本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第15頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第16頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分FIC指數(shù)

0.5為協(xié)同作用;

0.5-1為相加作用;

1~2為無(wú)關(guān)作用;>2為拮抗作用。本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第17頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分[棋盤法的設(shè)計(jì)]

棋盤法的主要優(yōu)點(diǎn)在于甲、乙兩藥的每個(gè)藥物濃度都有單獨(dú)的和與另一個(gè)藥物不同濃度的聯(lián)合,因此能精確測(cè)定兩種抗菌藥物在適當(dāng)濃度的比例下所產(chǎn)生的相互作用。在進(jìn)行棋盤法之前應(yīng)先測(cè)定兩種抗菌藥物單獨(dú)對(duì)受試菌的MIC,然后以兩藥MIC的8倍、4倍、2倍、1倍以及MIC的1/2、1/4、1/8濃度(或4倍、2倍、1倍、1/2、1/4濃度)分別進(jìn)行聯(lián)合。可見舉例,如表—1的青霉素G與鏈霉素聯(lián)合藥敏實(shí)驗(yàn)。本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第18頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分藥物及濃度青霉素G(IU/m1)鏈霉素單藥對(duì)照

4210.50.25鏈霉素(μg/ml)

64------32------16------8---+++4---+++

青霉素G單藥對(duì)照---++細(xì)菌對(duì)照-:無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)+:有細(xì)菌生長(zhǎng)FIC指數(shù)=1/1+16/16=2——無(wú)關(guān)本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第19頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分

2.紙條試驗(yàn)在含菌平板上垂直放兩條浸有不同藥液的濾紙條,培養(yǎng)后觀察兩藥形成的抑菌區(qū)的圖形來(lái)判斷兩藥聯(lián)合應(yīng)用時(shí),是無(wú)關(guān)、協(xié)同還是拮抗作用。

本文檔共21頁(yè);當(dāng)前第20頁(yè);編輯于星期三\13點(diǎn)56分二、藥物的體內(nèi)抗菌試驗(yàn)

藥物的體內(nèi)抗菌試驗(yàn)又稱為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)治療試驗(yàn)或保護(hù)力試驗(yàn)。當(dāng)抗菌藥物進(jìn)入機(jī)體后,其效力的發(fā)揮要受體內(nèi)各種因

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