滅菌方法與生物指示劑

第1頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三概要滅菌法和生物指示劑生物指示劑的形式無(wú)菌保證水平滅菌工藝驗(yàn)證常用滅菌方法制藥工業(yè)常用的滅菌方法生物指示劑的使用孢子數(shù)測(cè)定

第2頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三滅菌法和生物指示劑

滅菌法系指用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去，從而使物品殘存活微生物的概率下降至預(yù)期的無(wú)菌保證水平的方法。

生物指示劑系一類特殊的活微生物制品，可用于確認(rèn)滅菌設(shè)備的性能、滅菌程序的驗(yàn)證、生產(chǎn)過程滅菌效果的監(jiān)控等。用于滅菌驗(yàn)證中的生物指示劑一般是細(xì)菌的孢子。第3頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三生物指示劑的形式一定數(shù)量的孢子附著在惰性載體上，如濾紙條、玻片、不銹鋼、塑料制品等孢子懸浮液密封于安瓿中

第4頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三無(wú)菌保證水平

無(wú)菌保證水平一批物品的無(wú)菌特性只能相對(duì)地通過物品中活微生物的概率低至某個(gè)可接受水平來(lái)表述，即SAL（sterilityassurancelevel）。我國(guó)及歐美藥典都把SAL不得大于百萬(wàn)分之一作為最終滅菌產(chǎn)品無(wú)菌保證的要求，即SAL≤10－6

第5頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三滅菌工藝驗(yàn)證驗(yàn)證一個(gè)滅菌工藝系統(tǒng)能否使產(chǎn)品滅菌后達(dá)到無(wú)菌要求,通常認(rèn)為滅菌后微生物殘存概率小于1×10-6。物理性驗(yàn)證：通過得到的熱分布與熱穿透數(shù)據(jù),來(lái)估測(cè)一個(gè)滅菌程序?qū)ξ⑸锏闹滤佬??；瘜W(xué)指示劑驗(yàn)證：物品包外用化學(xué)指示劑用于驗(yàn)證物品是否經(jīng)過滅菌處理，物品包內(nèi)中心部位的化學(xué)指示劑才可作為物品是否達(dá)到滅菌的參考標(biāo)志。生物指示劑驗(yàn)證：將已知其耐熱性的生物指示劑直接接種在產(chǎn)品溶液或相似溶液中進(jìn)行驗(yàn)證,是評(píng)判滅菌工藝殺滅效果最直觀有效的方法,也是滅菌工藝驗(yàn)證必不可少的試驗(yàn)。第6頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三常用的滅菌方法濕熱滅菌法干熱滅菌法氣體滅菌法輻射滅菌法過濾除菌法第7頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三不同滅菌方式不同的菌種種類的選擇第8頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三濕熱滅菌法

指將物品置于滅菌柜內(nèi)利用高壓飽和蒸汽、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法。

須保證物品滅菌后的SAL≤10-6對(duì)熱穩(wěn)定的物品，可采用過度殺滅法，其SAL應(yīng)≤10-12

第9頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三適用范圍

藥品、容器、培養(yǎng)基、無(wú)菌衣、膠塞以及其它遇高溫和潮濕不發(fā)生變化或損壞的物品第10頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三常用的生物指示劑嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(SporesofBacillusstearothermophilus，NCTC10007、NCIMB8157、ATCC7953)D值為1.5～3.0min生孢梭菌孢子(SporesofClostridiumsporogenes，NCTC8594、NCIMB8053、ATCC7955

）

D值為0.4～0.8min第11頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三生物指示劑的選擇第12頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三干熱滅菌法

指物品于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設(shè)備中，利用干熱空氣達(dá)到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的方法。

保證滅菌后的產(chǎn)品其SAL≤10-6干熱過度殺滅后產(chǎn)品的SAL應(yīng)≤10-12

第13頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三

耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品的滅菌，如玻璃器具、金屬制容器、纖維制品、固體試藥、液狀石蠟等

適用范圍第14頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三枯草芽孢桿菌孢子(SporesofBacillussubtilis，NCIMB8058、ATCC9372)

常用的生物指示劑

D值大于1.5min

第15頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三生物指示劑的選擇第16頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三氣體滅菌法

指用化學(xué)消毒劑形成的氣體殺滅微生物的方法。在充有滅菌氣體的高壓腔室內(nèi)進(jìn)行。

常用氣體：環(huán)氧乙烷、氣態(tài)過氧化氫、甲醛等

第17頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三環(huán)氧乙烷法滅菌原理：強(qiáng)氧化，其分子作用于菌體后，能與菌體蛋白、核酸和酶中的—COOH、—NH2、—SH、—OH等基團(tuán)起反應(yīng)，而使菌體死亡。

具有殺菌譜廣，滅菌能力強(qiáng)的特點(diǎn)，對(duì)微生物的繁殖體、芽孢有較強(qiáng)的殺滅效果。

第18頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三適用范圍塑料包裝的原料粉末、散劑、顆粒等固體藥料及醫(yī)療器械類固體器具等不能采用高溫滅菌的物品的滅菌含氯的物品及能吸附環(huán)氧乙烷的物品則不宜使用第19頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三常用生物指示劑枯草芽孢桿菌孢子(SporesofBacillussubtilis，NCTC10073、NCIMB8058、ATCC9372)

D值大于2.5min

第20頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三氣態(tài)過氧化氫法是利用過氧化氫在低濃度的氣體狀態(tài)下比液體狀態(tài)更具殺孢子能力的優(yōu)點(diǎn)，經(jīng)生成游離的-OH，用于進(jìn)攻細(xì)胞成分，包括脂類、蛋白質(zhì)和DNA，達(dá)到完全滅菌的要求的一種技術(shù)。第21頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三應(yīng)用：

隔離器的驗(yàn)證

新設(shè)備或灌裝線的調(diào)整和認(rèn)證大型或組裝設(shè)備的評(píng)估未知?dú)怏w分布動(dòng)力學(xué)研究含有多個(gè)裝載配置的設(shè)備認(rèn)證設(shè)備中最難滅菌位置的日常檢測(cè)

生物指示劑：嗜熱脂肪芽胞桿菌孢子(SporesofBacillusstearothermophilus，NCTC10007、NCIMB8157、ATCC7953)第22頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三生物指示劑的選擇第23頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三輻射滅菌法

應(yīng)用γ射線、β射線殺滅細(xì)菌的方法，又稱電離輻射，前者由鈷-60或銫-137發(fā)出，穿透力強(qiáng)；后者由電子加速器產(chǎn)生，帶電荷，穿透力弱，滅菌效果差。γ射線滅菌機(jī)理：γ射線直接作用于微生物的蛋白質(zhì)、核酸和酶等，促使化學(xué)鍵斷裂，殺死微生物；又可間接作用于微生物體內(nèi)的水分子，引起水的電離和激發(fā)，生成自由基，再作用于微生物活性分子，使微生物死亡。對(duì)于輻射滅菌，無(wú)芽孢菌比有芽孢菌敏感得多；無(wú)芽孢菌中革蘭氏陰性菌比陽(yáng)性菌敏感；而病毒敏感性很差。

第24頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三適用范圍

不耐熱藥物的滅菌，醫(yī)療器械、容器、高分子材料、包裝材料、生產(chǎn)輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。

第25頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三常用生物指示劑

短小芽孢桿菌孢子(SporesofBacilluspumilus，如NCTC10327、NCIMB10692、ATCC27142)。置于放射劑量25kGy條件下，D值約3kGy。

第26頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三過濾除菌法

系利用細(xì)菌不能通過致密具孔濾材的原理以除去氣體或液體中微生物的方法。

適用范圍：對(duì)熱不穩(wěn)定的藥物溶液、氣體、水或原料的除菌。

第27頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三常用生物指示劑濾膜孔徑為0.22μm的濾器：缺陷假單胞菌(Pseudomonasdiminuta,如ATCC19146)濾膜孔徑為0.45μm的濾器：黏質(zhì)沙雷菌(Serratin

marcescens,如ATCC14756)第28頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三制藥工業(yè)常用的滅菌方法原料藥：化學(xué)合成藥——較高熔點(diǎn)藥物常用于干熱滅菌法，對(duì)較低熔點(diǎn)的則用濕熱滅菌法，對(duì)不耐熱藥物，如是晶體，可溶解后過濾除菌；

植物提取物——若是用常規(guī)或高溫提取的單一成分的流浸膏，常用壓力蒸汽法、流通蒸汽法消毒滅菌；若是低溫提取物，則優(yōu)先考慮過濾除菌；

生化藥物——化學(xué)消毒滅菌劑，如低溫乙醇法、低溫間歇法和過濾法等。第29頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三藥品制劑：輸液劑和水針劑——壓力蒸汽滅菌法；熱不穩(wěn)定藥物如凍干粉針劑——過濾法；多數(shù)藥液——射線滅菌。軟膏等半固體制劑：干熱法或輻射法中藥：大部份藥材——壓力蒸汽法；除含揮發(fā)油、對(duì)熱不穩(wěn)定成分的藥材和生、熟功效不同的藥材——熱力法和輻射法。

第30頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三抗生素生產(chǎn)：培養(yǎng)基、種子罐和發(fā)酵罐——壓力蒸汽法；無(wú)菌空氣——過濾法；最終產(chǎn)品——過濾法。水和空氣：過濾法、甲醛蒸氣法。包裝材料：玻璃材質(zhì)的安瓿、西林瓶——干熱法；聚乙烯、聚丙烯等塑料包裝材料等——100℃蒸汽；橡膠塞等——濕熱法。

第31頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三廠房設(shè)施、設(shè)備和工器具：

不銹鋼制密閉設(shè)備、管道——壓力蒸汽；小的設(shè)備零部件、工器具和容器——干熱法或濕熱法；耐酸堿而不耐高溫的塑料材質(zhì)物品——過氧化氫法；潔凈工作服、清潔工具——壓力蒸汽法。第32頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三常用滅菌方法匯總第33頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三第34頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三第35頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三生物指示劑的使用

選擇合適的生物指示劑正確使用生物指示劑放置位置、數(shù)目、放置的方式使用之后的處理第36頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三選擇合適的生物指示劑第37頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三生物指示劑的放置位置應(yīng)放在滅菌最困難的地方：①在滅菌器中最大包裝的中心；②滅菌器排氣口，往往不易達(dá)到滅菌溫度；③靠滅菌器的門口和底部；④不同的生物指示劑擺放要求不同。第38頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三根據(jù)設(shè)備規(guī)格調(diào)整指示劑數(shù)量，建議不少于2支，一般每個(gè)滅菌周期使用不少于10支。冷藏保存的生物指示劑使用前須室溫放置1-2小時(shí)。生物指示劑的放置數(shù)目第39頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三至少一支未滅菌的作為陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性結(jié)果都要高壓滅菌后才可丟棄有些BI含有陰性對(duì)照的，需要一同滅菌后培養(yǎng)正確使用生物指示劑第40頁(yè)，講稿共43頁(yè)，2023年5月2日，星期三孢子數(shù)測(cè)定1.