第五章-獲得性免疫課件

第五章獲得性免疫第一節(jié)概述第二節(jié)免疫預(yù)防及治療第三節(jié)佐劑與免疫增強(qiáng)劑第一節(jié)概述免疫接種是防治傳染性疾病最重要的手段之一,尤其是在病毒性疾病的防制中,由于沒有有效的藥物進(jìn)行防治,因而免疫防治顯得更為重要。免疫防治就是通過免疫的方法使動(dòng)物具有針對(duì)某種傳染病的特異性抵抗力,以達(dá)到控制疾病的目的。15世紀(jì)我國(guó)民間就流傳著用良性天花患者的干燥癡皮磨成粉末后,用吹鼻法進(jìn)行免疫預(yù)防。琴納(Jenner)和巴斯德(Pasteur)最早制備并使用疫苗接種動(dòng)物,使之產(chǎn)生免疫力,有效地控制了天花、狂犬病、炭疽、霍亂、白喉等一些危害嚴(yán)重的疫病。機(jī)體對(duì)病原微生物的免疫力分為先天性免疫和獲得性免疫兩種，前者是動(dòng)物體在種族進(jìn)化進(jìn)程中得到的天然防御能力，后者是動(dòng)物體在個(gè)體發(fā)育過程中受到病原體及其產(chǎn)物刺激而產(chǎn)生的特異性免疫力。特異性免疫又分為主動(dòng)免疫和被動(dòng)免疫兩種。用疫苗對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫接種經(jīng)主動(dòng)免疫方式使動(dòng)物獲得免疫力，是預(yù)防和控制動(dòng)物傳染病的重要手段和中心工作。獲得性免疫的類型：第二節(jié)免疫預(yù)防及治療天然獲得性免疫(NaturalAcquiredimmunity)是指?jìng)€(gè)體動(dòng)物本身未經(jīng)免疫接種而具有的對(duì)某些疫病的特異性抵抗力。其包括天然被動(dòng)免疫和天然主動(dòng)免疫兩種類型。一、天然被動(dòng)免疫概念新生動(dòng)物通過母體胎盤、初乳或卵黃從母體獲得某種特異性抗體,從而獲得對(duì)某種病原體的免疫力。意義

①保護(hù)胎兒免受病原體的感染；②抵御幼齡動(dòng)物傳染病在初乳中的lgG、IgM可抵抗敗血性感染,IgA可抵抗腸道病原體的感染。母源抗體可干擾弱毒疫苗對(duì)幼齡動(dòng)物的免疫效果,是導(dǎo)致免疫失敗的原因之一。二、天然主動(dòng)免疫概念是指動(dòng)物在感染某種病原微生物時(shí)過后產(chǎn)生的對(duì)該病原體再次侵入的不感染狀態(tài),或稱為抵抗力。人工獲得性免疫概念是指人為地對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫接種,使動(dòng)物具有對(duì)某種抗原(病原體或其它抗原物質(zhì))的特異性免疫力,其包括人工被動(dòng)免疫和人工主動(dòng)免疫兩種類型。生物制品

生物制品指用于動(dòng)物傳染病預(yù)防、診斷、治療的生物制劑。包括疫苗、診斷液、免疫血清。（一）疫苗

用于人工自動(dòng)免疫預(yù)防動(dòng)物傳染病的生物制劑。包括弱毒活疫苗、滅活疫苗、類毒素和新型疫苗等。（二）診斷液

用于傳染病免疫學(xué)診斷的生物制劑。包括診斷抗原、診斷抗體、凍干補(bǔ)體等。（三）免疫血清

用于傳染病免疫防治的含有高效價(jià)抗體的動(dòng)物血清制劑。包括抗菌血清、抗病毒血清、抗毒素、康復(fù)血清、高免蛋黃抗體等。三、人工被動(dòng)免疫將免疫血清或自然發(fā)病后康復(fù)動(dòng)物的血清人工輸入未免疫的動(dòng)物,使其獲得對(duì)某種病原的抵抗力,這種免疫接種方法稱為人工被動(dòng)免疫(ArtificialPassiveImmunity)。采用人工被動(dòng)免疫注射免疫血清可使抗體立即發(fā)揮作用,無誘導(dǎo)期,免疫力出現(xiàn)快。但免疫力維持時(shí)間短,一般維持1～4周。免疫血清可用同種動(dòng)物或異種動(dòng)物制備,用同種動(dòng)物制備的血清稱為同種血清,而用異種動(dòng)物制備的血清稱為異種血清。除了用免疫血清進(jìn)行人工被動(dòng)免疫外,在家禽還常用卵黃抗體制劑進(jìn)行人工接種,進(jìn)行緊急防治。(雞傳染性法氏囊病(IBD)雛鴨病毒性肝炎)抗毒素血清類毒素免疫動(dòng)物,獲取含高效價(jià)抗毒素的血清,用飽和硫酸銨(48％)處理,使抗毒素球蛋白部分得到濃縮和提純。用破傷風(fēng)毒素進(jìn)行攻擊天竺鼠來測(cè)定抗毒素的保護(hù)劑量,并與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)制劑進(jìn)行對(duì)照。一個(gè)破傷風(fēng)抗毒素的國(guó)際單位(I.U.)是指0.03384mg國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的破傷風(fēng)抗毒素所含的特異性中和活性。四、人工主動(dòng)免疫給動(dòng)物接種抗原物質(zhì),刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)生應(yīng)答反應(yīng),產(chǎn)生特異性免疫力。有一定的誘導(dǎo)或潛伏期,出現(xiàn)免疫力的時(shí)間與抗原種類有關(guān),在免疫防治中應(yīng)著重考慮到這一特點(diǎn)。人工主動(dòng)免疫產(chǎn)生的免疫力持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),免疫期可達(dá)數(shù)月甚至數(shù)年,而且有回憶反應(yīng),某些抗原免疫后,可產(chǎn)生終生免疫(如布氏流產(chǎn)桿菌19號(hào)菌株)。(一)群體免疫力

是指在動(dòng)物群體中,由于存在著一定比例的免疫動(dòng)物,使整個(gè)動(dòng)物群體具有對(duì)某種疾病的抵抗力。(二)疫苗的種類活苗、死苗、代謝產(chǎn)物和亞單位疫苗,以及生物技術(shù)疫苗。生物技術(shù)疫苗包括基因工程亞單位疫苗、合成肽疫苗、抗獨(dú)特型疫苗,基因工程活疫苗以及DNA疫苗等。人工自動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫常規(guī)疫苗新型疫苗疫苗（活疫苗、死疫苗）類毒素自身疫苗亞單位疫苗化學(xué)疫苗多肽疫苗基因工程疫苗基因疫苗抗抗體疫苗特異性免疫治療劑免疫調(diào)節(jié)劑抗毒素抗病毒血清抗菌血清免疫球蛋白制劑免疫核糖核酸轉(zhuǎn)移因子白細(xì)胞介素胸腺素等1、活苗有強(qiáng)毒苗、弱毒苗和異源苗三種強(qiáng)毒苗是應(yīng)用最早的疫苗種類。使用強(qiáng)毒進(jìn)行免疫有較大的危險(xiǎn),所以應(yīng)摒棄,但在有些特殊情況下,使用強(qiáng)毒活苗也能取得較好的防治效果(雞傳染性喉氣管炎泄殖腔刷種),可在一定程度上控制疫情,但應(yīng)強(qiáng)調(diào)免疫的過程也是散毒的過程,因而使用時(shí)應(yīng)慎重。弱毒苗毒力已經(jīng)致弱,但仍然保持著原有的抗原性,并能在體內(nèi)繁殖,因而可用較少的免疫劑量誘導(dǎo)產(chǎn)生堅(jiān)實(shí)的免疫力,而且不須使用佐劑,免疫期長(zhǎng)。不影響動(dòng)物產(chǎn)品(肉類)的品質(zhì)。有些弱毒苗可刺激機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生干擾素,對(duì)抵抗其它野毒的感染也是有益的。貯存與運(yùn)輸?shù)牟槐?而且保存期較短,將其制成凍干苗可延長(zhǎng)保存期.大多數(shù)弱毒苗是通過人工致弱強(qiáng)毒面制成的,致弱方法是使強(qiáng)毒株在異常的條件下生長(zhǎng)繁殖,使其毒力減弱或喪失(炭疽芽胞苗/禽霍亂疫苗)。病毒疫苗弱毒株通常是用雞胚、細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物接種傳代制成的。例如我國(guó)培養(yǎng)成功的豬瘟免化弱毒苗,毒力極弱,免疫原性優(yōu)良,被多個(gè)國(guó)家引進(jìn)使用。將哺乳動(dòng)物的病毒接種于鴨胚也是使毒力致弱的常用方法,將病毒在不適應(yīng)的細(xì)胞中培養(yǎng)也可致弱病毒毒力。致弱后的疫苗株應(yīng)毒力穩(wěn)定,嚴(yán)防毒力返強(qiáng),因此多用高代次的疫苗株制苗,例如:牛瘟兔化苗400代以后,豬瘟兔化弱毒苗370代以后,而且在多次傳代后仍維持原有的免疫原性。異源苗是用具有共同保護(hù)性抗原的不同種病毒制備成的疫苗?；痣u皰疹病毒(HVT)雞馬立克氏病病毒鴿痘病毒雞痘病毒。麻疹牛瘟犬瘟熱病毒;牛病毒性腹瀉病毒豬瘟病毒;火雞瘧疾病毒馬立克氏病病毒;牛瘟兔化毒雞新城疫病毒?；蠲鐣?huì)出現(xiàn)異種微生物或同種強(qiáng)毒污染的危險(xiǎn),經(jīng)接種途徑人為地傳播疾病。2.死苗概念病原微生物經(jīng)理化方法滅活后,仍然保持免疫原性,接種后使動(dòng)物產(chǎn)生特異性抵抗力,這種疫苗稱為死苗或滅活苗。使用接種劑量較大,免疫期較短,需加入適當(dāng)?shù)淖魟┮栽鰪?qiáng)免疫效果。死苗的優(yōu)點(diǎn)是研制周期短、使用安全和易于保存。組織滅活苗油佐劑滅活苗氫氧化鋁膠滅活苗

病變組織滅活苗是用患傳染病的病死動(dòng)物的典型病變組織,經(jīng)碾磨、過濾、按一定比例稀釋并加入滅活劑滅活后制備而成的。雞胚組織滅活苗是用病原接種雞胚后,經(jīng)一定孵育時(shí)間收獲除卵黃外的所有胚組織、經(jīng)碾磨、過濾、滅活后制備而成。油佐劑滅活苗是以礦物油為佐劑與經(jīng)滅活的抗原液混合乳化制成的。吐溫-80司本-80硬脂酸鋁氫氧化鋁膠滅活苗(鋁膠苗)是將滅活后的抗原液加入氫氧化鋁膠制成的。滅活的機(jī)理及方法實(shí)際生產(chǎn)中最常用的滅活劑為甲醛溶液,滅活機(jī)制是作用于蛋白質(zhì)的氨基和酰胺基以及核酸中嘌呤和嘧啶上的非氫鍵氨基基團(tuán),形成交聯(lián),使其結(jié)構(gòu)固定并喪失活力。丙酮和乙醇是使蛋白質(zhì)變性較溫和的滅活劑,在制備羊跳躍病疫苗(Louping-illvaccine)時(shí),用乙醇滅活該病病毒可增加疫苗的抗原性,其作用機(jī)理尚不清楚。烷化劑也是常用的滅活劑,其作用機(jī)理是通過使核酸交聯(lián),殺死微生物,由于在滅活過程中不改變微生物的表面蛋白成分,所以其抗原性不受影響。另外,用于動(dòng)物疫苗的滅活劑還包括氧化乙烯、乙烯亞胺、乙酸乙烯亞胺及β-丙酮內(nèi)脂等。

3.代謝產(chǎn)物和亞單位疫苗細(xì)菌的代謝產(chǎn)物如毒素、酶等都可制成疫苗,破傷風(fēng)毒素、白喉毒素、肉毒毒素經(jīng)甲醛滅活后制成的類毒素有良好的免疫原性,可作成主動(dòng)免疫制劑。另外,致病性大腸桿菌腸毒素,多殺性巴氏桿菌的攻擊素和鏈球菌的擴(kuò)散因子等都可用作代謝產(chǎn)物疫苗。亞單位疫苗是將病毒的衣殼蛋白與核酸分開、除去核酸用提純的蛋白質(zhì)衣殼制成的疫苗。無不良反應(yīng),使用安全,效果較好。制備困難,價(jià)格昂貴。豬口蹄疫、偽狂犬病、狂犬病、水泡性口炎、流感等亞單位疫苗。致病性大腸桿菌K88疫苗用于口服,可阻止致病性大腸桿菌在腸粘膜表面的附著作用,對(duì)大腸桿菌病的防制有一定作用。4.生物技術(shù)疫苗類型基因工程亞單位疫苗合成肽疫苗抗獨(dú)特型疫苗基因工程活疫苗DNA疫苗(1)基因工程亞單位疫苗是用DNA重組技術(shù),將編碼病原微生物保護(hù)性抗原的基因?qū)耸荏w菌(如大腸桿菌)或細(xì)胞,使其在受體細(xì)胞中高效表達(dá),分泌保護(hù)性抗原肽鏈。提取保護(hù)性抗原肽鏈,加入佐劑即制成基因工程亞單位疫苗。(2)合成肽疫苗是用化學(xué)合成法人工合成病原微生物的保護(hù)性多肽并將其連接到大分子載體上,再加入佐劑制成的疫苗。(3)抗獨(dú)特型疫苗(4)基因工程活疫苗

類型有缺失疫苗和活載體疫苗二類?；蛉笔б呙?/p>

概念

用基因工程技術(shù)將強(qiáng)毒株毒力相關(guān)基因切除構(gòu)建的活疫苗,該苗安全性好、不易返祖;

特性免疫接種與強(qiáng)毒感染相似,機(jī)體可對(duì)病毒的多種抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答;免疫力堅(jiān)實(shí),免疫期長(zhǎng),尤其是適于局部接種,誘導(dǎo)產(chǎn)生粘膜免疫力,因而是較理想的疫苗。活載體疫苗是用基因工程技術(shù)將保護(hù)性抗原基因(目的基因)轉(zhuǎn)移到載體中使之表達(dá)的活疫苗。目前有多種理想的病毒載體,如痘病毒,腺病毒和皰疹病毒等都可用于活載體疫苗的制備。國(guó)外已研制出以腺病毒為載體的乙肝疫苗、以皰疹病毒為載體的新城疫疫苗等。(5)DNA疫苗應(yīng)用基因工程技術(shù)把編碼保護(hù)性抗原的基因與能在真核細(xì)胞中表達(dá)的載體DNA重組,這種目的基因與表達(dá)載體的重組DNA可直接注射(接種)到動(dòng)物(如小鼠)體內(nèi),目的基因可在動(dòng)物體內(nèi)表達(dá),刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫。(三)多價(jià)苗與聯(lián)苗多價(jià)苗指將同一種細(xì)菌(或病毒)的不同血清型混合制成的疫苗。譬如巴氏桿菌多價(jià)苗,大腸桿菌多價(jià)苗等。

聯(lián)苗指由兩種或兩種以上的細(xì)菌(或病毒)聯(lián)合制成的疫苗。一次免疫可達(dá)到預(yù)防幾種疾病的目的。譬如豬瘟-豬丹毒-豬肺疫三聯(lián)苗,新城疫-減蛋綜合征(EDS-76)-傳染性法氏囊病三聯(lián)苗等。

五、疫苗的使用(一)免疫途徑滴鼻和點(diǎn)眼、刺種、注射、飲水和氣霧等,應(yīng)根據(jù)疫苗的類型、疫病特點(diǎn)及免疫程序來選擇每次免疫的接種途徑。滴鼻與點(diǎn)眼免疫效果較好,僅用于接種弱毒疫苗,苗毒可直接刺激眼底哈氏腺和結(jié)膜下彌散淋巴組織,另外還可刺激鼻、咽、口腔粘膜和扁桃體等飲水免疫適用于大型雞群,飲水免疫只有當(dāng)苗毒接觸到鼻咽部粘膜時(shí),才引起免疫反應(yīng),進(jìn)入腺胃的苗毒在較酸的環(huán)境中很快死亡,失去作用。飲水免疫的免疫效果很差。不適于初次免疫。刺種與注射適于某些弱毒苗如雞瘟與馬立克氏病免疫。另外滅活苗的免疫也必須用注射的方法進(jìn)行。刺種與注射方法免疫確實(shí),效果好。氣霧免疫在新城疫免疫中,氣霧免疫效果較好,不僅可誘導(dǎo)產(chǎn)生循環(huán)抗體,而且也可產(chǎn)生局部免疫力,但氣霧免疫會(huì)造成一定程度的應(yīng)激反應(yīng),容易引起呼吸道感染。氣霧引起的應(yīng)激反應(yīng)程度與霧粒的大小成反比。因此在有呼吸道病史的雞場(chǎng),更適于采用較大霧滴的氣霧免疫。（二）、免疫程序

免疫程序應(yīng)根據(jù)疫病在本地區(qū)的流行情況及規(guī)律、畜禽的用途(種用、肉用或蛋用)、年齡、母源抗體水平和飼養(yǎng)條件，以及使用疫苗的種類、性質(zhì)、免疫途徑等方面的因素制定，不宜作統(tǒng)一規(guī)定。免疫程序應(yīng)隨情況的變化而作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，不存在普遍適用的最佳免疫程序。動(dòng)物的抗體監(jiān)測(cè)是重要的參考依據(jù)。在制訂免疫程序時(shí)應(yīng)考慮到本地區(qū)的疫病流行情況,畜禽種類、年齡,飼養(yǎng)管理水平,母源抗體干擾,疫苗的性質(zhì)、類型、免疫途徑等各方面的因素。以新城疫與傳染性法氏囊的免疫為例：新城疫首免日齡的確定,要考慮到母源抗體的干擾,用血凝抑制(HI)試驗(yàn)測(cè)定1日齡雛雞的母源抗體水平,以此推算首免同齡,雛雞體內(nèi)的HI抗體的半衰期為4.5天,首免日齡可推算如下:ND首免日齡=4.5(1日齡HI抗體以2為底的對(duì)數(shù)值—4)＋5。例如雛雞1日齡的HI抗體平均滴度為32,那么log232＝5,根據(jù)公式計(jì)算首免日齡為4.5(5-4)＋5=9.5(日齡),如果1日齡雛雞的HI抗體滴度低于16,1日齡就應(yīng)首免。以蛋雞為例首免(7～10日齡)用IV系或克隆-30進(jìn)行滴鼻、點(diǎn)眼接種二免(25～30日齡)用Ⅳ系或克隆-30進(jìn)行肌肉注射接種,同時(shí)注射半劑量(0.25ml)的油佐劑滅活苗。110～120日齡注射0.5ml油佐劑滅活苗。2.傳染性法氏囊病(IBD)IBD免疫的首免日齡非常重要,一般通過測(cè)定1日齡雛雞的母源抗體水平來確定。如果1日齡雞群的母源抗體瓊擴(kuò)陽性率達(dá)不到80％,則應(yīng)在10～17日齡進(jìn)行首免;若陽性率在80％以上,應(yīng)在7～10日齡采血再進(jìn)行一次檢測(cè),若此次陽性率低于50％則應(yīng)在14～21日齡首免,如果超過50％,則在17～24日齡接種。首免后2～3周進(jìn)行二免(與首免相同都以弱毒苗進(jìn)行飲水免疫)。如果是種雞,還應(yīng)在18～20周齡及40～42周齡進(jìn)行兩次油佐劑滅活苗接種,以保護(hù)仔代防止早期感染,若是商品用蛋雞則可省去滅活苗免疫過程。六、免疫失敗免疫失敗的因素1、遺傳因素動(dòng)物機(jī)體對(duì)接種抗原的免疫應(yīng)答在一定程度上是受遺傳控制的,因此不同品種,甚至同一品種不同個(gè)體的動(dòng)物,對(duì)同一種抗原的免疫反應(yīng)強(qiáng)弱也有差異。2、營(yíng)養(yǎng)狀況動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)狀況也是影響免疫應(yīng)答的因素之一。維生素、微量元素及氨基酸的缺乏都會(huì)使機(jī)體的免疫功能下降。3、環(huán)境因素環(huán)境因素包括動(dòng)物生長(zhǎng)環(huán)境的溫度、濕度、通風(fēng)狀況,環(huán)境衛(wèi)生及消毒等。4、疫苗方面疫苗是預(yù)防疫病的重要武器,動(dòng)物的特異性免疫力與疫苗有直接關(guān)系。5、血清型針對(duì)多血清型的疾病應(yīng)考慮使用多價(jià)苗。6、疾病對(duì)免疫的影響有些疾病嚴(yán)重影響疫苗的免疫效果,引起免疫抑制。7、母源抗體弱毒苗在免疫動(dòng)物時(shí),如果動(dòng)物存在較高水平的母源抗體,會(huì)極大地影響疫苗的免疫效果。8、

病原微生物之間的干擾作用同時(shí)免疫兩種或多種弱毒苗往往會(huì)產(chǎn)生干擾現(xiàn)象,例如傳染性支氣管炎病毒(IBV)對(duì)新城疫疫苗的免疫有干擾作用。免疫失敗的疫苗因素1.疫苗的質(zhì)量

弱毒苗接種后在體內(nèi)有個(gè)繁殖過程,因而接種的疫苗中必須含有足夠量的有活力的病原,否則會(huì)影響免疫效果。滅活苗接種后沒有繁殖過程,因而必須有足夠的抗原量作保證,才能刺激機(jī)體產(chǎn)生堅(jiān)實(shí)的免疫力。油佐劑滅活苗的性狀必須穩(wěn)定,良好的油佐劑滅活苗是均勻的乳白色,粘稠度適中,若出現(xiàn)油水分層現(xiàn)象時(shí),應(yīng)廢棄,否則影響免疫效果。2.疫苗的保存與運(yùn)輸

濕苗應(yīng)低溫凍結(jié)保存,弱毒凍干苗應(yīng)保存于2℃～8℃

,馬立克細(xì)胞結(jié)合毒疫苗應(yīng)在液氮中保存。滅活苗應(yīng)貯存于2℃

～8℃,嚴(yán)防凍結(jié)3.疫苗的使用在疫苗的使用過程中,有很多因素影響免疫效果,例如疫苗稀釋方法,水質(zhì),霧粒大小(氣霧免疫)、接種途徑,免疫程序等都是影響免疫效果的重要因素,各環(huán)節(jié)都應(yīng)給予足夠的重視。第三節(jié)佐劑免疫增強(qiáng)劑是指單獨(dú)使用即能引起機(jī)體出現(xiàn)短暫的免疫增強(qiáng)作用,這與佐劑是不同的。然而有些物質(zhì)具有雙重作用。免疫增強(qiáng)劑的種類繁多,按性質(zhì)不同可分為生物性免疫增強(qiáng)劑、細(xì)菌性免疫增強(qiáng)劑、化學(xué)性免疫增強(qiáng)劑、中藥免疫增強(qiáng)劑等一、概論凡是可以增強(qiáng)抗原特異性免答的物質(zhì)均稱為佐劑。1、佐劑的定義(adjuvant）一詞來源于拉丁語，原為輔助之意。在免疫學(xué)和生物制品學(xué)上又稱為免疫佐劑（immunologicadjuvant）。傳統(tǒng)的概念為：當(dāng)一種物質(zhì)先于抗原或與抗原混合或同時(shí)注射于動(dòng)物體內(nèi)，能非特異性地改變或增強(qiáng)機(jī)體對(duì)該抗原的特異性免疫應(yīng)答，發(fā)揮其輔佐作用者，都稱之為佐劑。2、作用特點(diǎn)①能明顯增強(qiáng)多糖或多肽等抗原性微弱的物質(zhì)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答；②用最少量的抗原和最少的接種次數(shù)刺激機(jī)體可產(chǎn)生足夠的免疫應(yīng)答和高滴度的抗體，在血流或粘膜表面能維持較長(zhǎng)的時(shí)間，發(fā)揮持久的效果。3、佐劑的作用①改變正常免疫機(jī)能，吸引大量巨噬細(xì)胞以吞噬抗原；②改變抗原的構(gòu)型，使抗原物質(zhì)降解并加強(qiáng)其免疫原性；③延長(zhǎng)抗原在組織內(nèi)的貯存時(shí)間，使抗原緩慢降解和緩釋，并發(fā)揮免疫系統(tǒng)的細(xì)胞間協(xié)同作用（巨噬細(xì)胞與T細(xì)胞，T細(xì)胞與B細(xì)胞）。4、作用機(jī)理①抗原遞呈（antigenpresentation）指抗原分子遞呈給T細(xì)胞的方法。抗原遞呈的方法對(duì)免疫應(yīng)答的實(shí)質(zhì)和強(qiáng)度有重要影響。佐劑與疫苗的聯(lián)合使用，有助于抗原性物質(zhì)在胞內(nèi)被加工，被MHC分子特異性的結(jié)合、保護(hù)、運(yùn)輸并遞呈給效應(yīng)細(xì)胞。②抗原尋的（antigentargeting）指抗原傳遞給免疫系統(tǒng)中適當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞的效率。佐劑對(duì)于抗原尋的涉及到的一系列機(jī)制，包括吸引巨噬細(xì)胞到達(dá)組織部位、活化吞噬細(xì)胞、促進(jìn)抗原與細(xì)胞受體的結(jié)合等有重要作用。③免疫調(diào)節(jié)（immunemodulation）是指任何可以修飾的免疫效應(yīng)細(xì)胞對(duì)抗原或表位進(jìn)行加工的機(jī)制。通過這種機(jī)制，可以改變特異性免疫應(yīng)答的本質(zhì)或強(qiáng)度。T細(xì)胞有Th1和Th2兩個(gè)亞類。同一抗原和不同佐劑一起使用能夠引起不同的免疫反應(yīng)。因此，通過篩選特定的佐劑，可以達(dá)到誘導(dǎo)正確的免疫應(yīng)答的目的。二、佐劑分類

按佐劑物理性質(zhì)，分為顆粒型佐劑和非顆粒型佐劑；按佐劑的生物學(xué)性質(zhì)（即Ballanti分類法），可分為微生物及其組分與非微生物物質(zhì)；按佐劑在體內(nèi)存留的時(shí)間，則可分為貯存型佐劑（depottypeadjuvant）和非貯存型（non-depottypeadjuvant）。顆粒型佐劑多半屬于貯存型的，非顆粒型佐劑大多屬于非貯存型佐劑。（一）顆粒性佐劑

1．鹽類佐劑：包括氫氧化鋁膠、各種明礬、磷酸鋁等。2．油水乳劑佐劑：如弗氏完全佐劑（Freund’scompleteadjuvant,FCA）、弗氏不完全佐劑（Freund’sincompleteadjuvant,FIA）和礦物油白油佐劑。3．免疫刺激復(fù)合物（ISCOM）佐劑。4．蜂膠佐劑（propolis）。5．脂質(zhì)體佐劑（liposomes）。6．其他：MF59佐劑、微囊化佐劑（microencapsulation）、硬脂酰酪氨酸佐劑（slearyltyrosine）和γ－菊粉（gamma-inulin）等。（二）非顆粒性佐劑

1．肽類佐劑（peptides）：如胞壁酰二肽（MDP）及其衍生物、去胞壁酰多肽（desmuramylpeptides）、脂肽（lipopeptides）和免疫調(diào)節(jié)多肽（immunomodulatorypeptides）等。2．表面活性分子類佐劑（surface-activemolecules）：如非離子阻斷共聚物表面活性劑（nonionicblockcopolymers）和海藻糖合成衍生物（TDM）等。3．核酸及其衍生物類佐劑（nucleicacidderivatives）：如合成核苷酸聚合體（syntheticolynucleotides）、次黃嘌呤衍生物（hypoxanthinederivatives）和免疫刺激序列DNA（CpGDNA或CpG寡聚脫氧核苷酸（CpG-ODN））等。4．含硫復(fù)合物類佐劑（suiphur-containingcompounds）：如左旋咪唑（levamisole）。5．碳水化合物高分子類佐劑（carbohydratepolymers）：如香菇多糖（lentinan）、硫酸多糖（sulfatedpolysaccharides）等其他一些多糖和DEAE-葡聚糖等。6．細(xì)胞因子類佐劑（cytokine）：如白介素-1（IL-1）、白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）和γ-干擾素（γ-IFN）等。7．脂質(zhì)分子類佐劑（lipidmolecules）：如脂多糖及其衍生物（lipopolysaccharidederivatives），一些脂溶性維生素（fat-solublevitamins）如維生素A和維生素E等。8．其他：包括一些蛋白毒素如霍亂毒素（CT）、百日咳毒素（PT）和破傷風(fēng)類毒素（TT）等；脂磷壁酸（LTA）；維生素B12等。常規(guī)佐劑和新型免疫佐劑目前，鋁鹽類佐劑、油水乳劑佐劑和蜂膠佐劑等比較常用，屬于常規(guī)佐劑。細(xì)胞因子類佐劑、CpGDNA、基因工程減毒素、免疫刺激復(fù)合物佐劑、脂質(zhì)體佐劑及MF59佐劑等是目前研究的熱點(diǎn)，其中有些也已經(jīng)開始用于生產(chǎn)實(shí)際，屬于新型免疫佐劑。三、常規(guī)免疫佐劑

（一）鋁鹽類佐劑該類佐劑在生物制品上應(yīng)用廣泛，對(duì)體液免疫作用很明顯，與抗原混合注射時(shí)，可通過抗原尋的過程顯著增高抗體滴度?？扇苄钥乖c此類佐劑混合后成為凝膠狀態(tài)，可建立一個(gè)短時(shí)的貯存顆粒，將可溶性抗原轉(zhuǎn)化為一種便于吞噬的形式，以利于巨噬細(xì)胞吸附。1．氫氧化鋁膠又稱鋁膠，其佐劑活性與質(zhì)量密切相關(guān)，質(zhì)優(yōu)的鋁膠分子細(xì)膩、膠體性良好、穩(wěn)定，吸附力強(qiáng)，保存兩年后其吸附力不變。鋁膠可用于制造多種獸用疫苗。各廠家采用不同的合成方法制備鋁膠，優(yōu)點(diǎn)各異。制法（1）用鋁粉加燒堿合成法：用量按下列反應(yīng)式計(jì)算：

2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3·18H2OA12(SO4)3·18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O（2）用明礬加碳酸鈉合成法：用量按下列反應(yīng)式計(jì)算：2KAl(SO4)2+3Na2CO3+3H2O→2Al(OH)3+3Na2SO4+3CO2↑。（3）用三氯化鋁與氫氧化鈉合成：A1C13+3NaOH→Al(OH)3↓+3NaCl。此法合成的鋁膠含量低，透明無沉淀，目前廣泛用于制備人用生物制品，認(rèn)為佐劑效果良好，注射部位無硬結(jié)反應(yīng)。配制時(shí)注意事項(xiàng)：①氫氧化鋁具有較強(qiáng)的吸附力，所以，制膠過程中一般用軟化水或去離子水洗滌。②氫氧化鋁膠為兩性化合物，過酸或過堿都會(huì)失去膠態(tài)。故要掌握好化合時(shí)的pH值。③貯存鋁膠應(yīng)放在耐酸搪瓷缸或耐酸池中，并嚴(yán)密封蓋，貯放期不超過3個(gè)月。④鋁膠室溫保存，以免破壞膠態(tài)。2．明礬（Alum）

有鉀明礬（KAl（SO4）2·12H2O）和銨明礬（AlNH2（SO4）2·12H2O）兩種。作為佐劑用于生物制品的主要是鉀明礬（即硫酸鋁鉀）。制造時(shí)，先將滅活菌液調(diào)至pH8.0土0.1，選精制明礬制成10％溶液，高壓滅菌后，冷至25℃以下備用。按菌液量加入明礬溶液1～2％，充分振蕩，然后沉淀。佐劑作用與氫氧化鋁膠近似，但該法較簡(jiǎn)便，應(yīng)用較廣，如破傷風(fēng)明礬沉淀類毒素和氣腫疽明礬滅活疫苗等。在美國(guó)只有明礬可在人體中應(yīng)用。3．磷酸三鈣在疫苗中加入氯化鈣和磷酸氫二鈉，使在疫苗中化合成磷酸三鈣，吸附抗原后沉淀，所制出的幾種疫苗免疫效果良好。此法簡(jiǎn)便，質(zhì)量穩(wěn)定。鋁鹽類佐劑成本低廉，使用方便，安全性較好，已被廣泛用于獸用疫苗，乙肝、白喉等重組疫苗的佐劑。缺點(diǎn)：①輕度局部反應(yīng)，可形成肉芽腫，個(gè)別形成局部無菌性膿腫；②鋁膠疫苗怕凍，凍后鋁膠易變性；③有可能對(duì)人、畜神經(jīng)系統(tǒng)有影響；④主要激活Th2免疫細(xì)胞，誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答。而誘導(dǎo)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答作用不明顯。只適用于以抗體為主要保護(hù)性免疫的疾病的疫苗，如白喉、破傷風(fēng)、乙肝、麻疹等。（二）油乳佐劑

指一類由油類物質(zhì)和乳化劑按一定比例混合形成的佐劑，如弗氏佐劑。該類佐劑主要在抗原尋的過程中起作用，使抗原在注射部位保持穩(wěn)定，為抗原在淋巴系統(tǒng)中轉(zhuǎn)運(yùn)提供載體，增加單核細(xì)胞的形成和積聚。油乳劑疫苗的免疫效力高低，直接與乳化作用的好壞和乳劑成分的質(zhì)量等有關(guān)。一種好的乳劑疫苗應(yīng)是油包水（水/油或W/O）或水包油（油/水或O/W）型，粘度低，顆粒均勻，穩(wěn)定性良好，呈乳白色。1．乳劑的概念“乳劑”是將一種溶液或干粉分散成細(xì)小的微粒，混懸于另一不相溶的液體中所成的分散體系。被分散的物質(zhì)稱為分散相（內(nèi)相），承受分散相的液體稱連續(xù)相（外相），兩相間的界面活性物質(zhì)稱為乳化劑。當(dāng)以水為分散相，以加有乳化劑的油為連續(xù)相時(shí)，制成的乳劑為W/O型，反之為O/W型。W/O型、O/W型乳劑比較制成什么樣的乳劑型，與乳化劑及乳化方法密切相關(guān)。通常W/O型乳劑較粘稠，在機(jī)體內(nèi)不易分散，佐劑活性較好，為生物制品所采用的主要?jiǎng)┬停籓/W型乳劑較稀薄，注入機(jī)體后易于分散，但其佐劑活性很低，生物制品一般不采用這種劑型。2．乳化劑

（1）乳化劑的種類天然乳化劑：來自動(dòng)植物，如阿拉伯膠、海藻酸鈉、蛋黃以及煉乳等。人工合成乳化劑，再分為離子型和非離子型。離子型乳化劑陰離子型：如堿肥皂、月桂酸鈉、十二烷基磺酸鈉和硬脂酸鋁等，多用于乳化一般生物制劑；陽離子型：陽離子類乳化劑有氯化苯甲烴銨、溴化十六烷三甲基和氯化十六烷銨代吡啶等，用于制備一般的水包油生物制劑。非離子型乳化劑多數(shù)是多元醇或聚合多元醇的脂肪酸脂類或醚類物質(zhì)，如月桂酸聚甘油脂、山梨醇脂和單油酸脂等。它們具有一定的親水性和親油性基團(tuán)，為制造醫(yī)藥或化妝品的乳化劑。制備注射用油乳劑滅活疫苗，最適用的乳化劑有去水山梨醇單油酸酯（其中，司本-80和Arlacel-A是同類產(chǎn)品）、聚氧乙烯去水山梨醇單油酸酯（商品名吐溫-80）和硬脂酸鋁等。（2）乳化劑的選擇通常可根據(jù)用途，依據(jù)乳化劑的HLB值（親水親油平衡值）進(jìn)行選擇。乳化劑的HLB值與其在水中的溶解度相關(guān)；親油性的在水中溶解度小，HLB值低，易形成油包水型油乳劑。HLB值為4～6的乳化劑適用于制造W/O型油乳劑；常用的司本-80，HLB值為4.3，在水中溶解度低，不易在水中分散，溶于多種有機(jī)溶劑，性質(zhì)穩(wěn)定，易形成W/O型油乳劑；親水性強(qiáng)的在水中溶解度大，HLB值高，容易形成水包油型油乳劑；HLB值在8～18的乳化劑適用于O/W型油乳劑。吐溫-80，其HLB值為15.0，易溶于水，易形成O/W型油乳劑。3．白油佐劑制苗用的白油應(yīng)無多環(huán)芳烴化合物、粘度低、無色、無味和無毒性。Drakocel-6VR、Marcol-52和Lipolul-4是國(guó)內(nèi)外常用的制苗用白油。我國(guó)目前選用杭州煉油廠的7號(hào)或10號(hào)白油和北京石油化工科學(xué)研究院的合成白油，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為：無色無味，50℃運(yùn)動(dòng)粘度7m2／s左右，紫外吸收值（250～350nm）＜0.1％，紫外消光系數(shù)＜12×108；單環(huán)芳烴與雙環(huán)芳烴含量低于0.5％，無多環(huán)芳烴；小鼠腹腔注射0.5ml或家免皮下注射2.0ml白油，觀察60d，表現(xiàn)正常。4．乳劑配方與乳化方法使用不同乳化劑和不同的配合比例及乳化方法，決定了制備乳劑的性狀和穩(wěn)定性。疫苗生產(chǎn)中主要有兩種基本方法。（1）劑在水中法：此法將乳化劑直接溶于水中，在激烈攪拌下將油加入，可直接生成O/W乳劑。若欲得W/O型，可繼續(xù)加入油，直到發(fā)生變型。該法通常用勻漿器或膠體磨，高速攪拌而得到較好的乳劑。（2）劑在油中法：此法將乳化劑溶于油相，將油相直接加入水相中得O/W，如水相直接加入油相，得到W/O型，如欲得O/W，繼續(xù)加入至變型。該法制成的乳劑，一般均勻顆粒直徑在0.5μm左右，比較穩(wěn)定。免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用的佐劑其配方按容量計(jì)為：礦物油（白油）75%~85％，乳化劑15％~25%，混合后經(jīng)除菌過濾而成為弗氏不完全佐劑（FIA）；如向其中加入0.5mg／m1死結(jié)核桿菌即為弗氏完全佐劑（FCA）。使用時(shí)，將含抗原的水相，與上述任一佐劑等量混合，用力振搖即可成為均勻的乳劑。也可用9份油和1份司本-80混合后加2％吐溫-80和1％~2%硬脂酸鋁，經(jīng)高壓滅菌后備用，注射前將配好的油佐劑與抗原水相1：1混合，強(qiáng)力振搖，可配制成性狀良好的乳劑疫苗。副作用弗氏佐劑具有高度佐劑活性，因而應(yīng)用廣泛。但因副作用強(qiáng)烈而限制其應(yīng)用。很少用于動(dòng)物免疫。①油通過肌膜層造成組織損傷，局部形成結(jié)節(jié)和無菌性膿腫。②加入了結(jié)核菌素，能使PPD試驗(yàn)陽性。③可能致癌；④過于粘稠，難以注射。大量生產(chǎn)可將94％白油與6％司本-80混合后加1%~2％硬脂酸鋁，滅菌后即為油相；將抗原液加2％~4%吐溫-80為水相。乳化時(shí)，將油相與水相按3：1~2：1比例配制，先緩速混合，再通過膠體磨充分乳化，可獲得穩(wěn)定的油包水乳劑苗。雙相乳劑疫苗：將粘稠的W/O乳劑疫苗，再加2％吐溫-80生理鹽水，通過攪拌或膠體磨乳化，可制成雙相乳劑疫苗（水-油-水乳劑或稱多型乳劑Multipleemulsionadjuvant）。優(yōu)點(diǎn)是：粘稠度低、在注射部位易分散、局部反應(yīng)輕微及佐劑效應(yīng)良好等。5．油乳劑檢驗(yàn)

生產(chǎn)實(shí)際中以粘度測(cè)定和穩(wěn)定性測(cè)定為主。（1）粘度測(cè)定：最簡(jiǎn)易的方法是取內(nèi)口直徑為1.2mm的吸管，在室溫下吸滿lml乳劑，垂直放出0.4ml所需時(shí)間作為粘度單位，以0.4ml2～6S為合格，不得多于10～15S，否則注射時(shí)就比較困難。也可用Saybolt粘度計(jì)。（2）乳劑穩(wěn)定性測(cè)定：①加速老化法：疫苗于37℃貯存10～30d不破乳。②離心加速分層法：在一個(gè)半徑為10cm的離心器中裝油乳劑，3000rpm離心15min不分層，相當(dāng)于保存1年以上不破乳。（三）蜂膠佐劑1．蜂膠的理化特性與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)蜂膠（Propolis）是蜜蜂采自柳樹、楊樹、栗樹和其它植物幼芽分泌的樹脂，并混入蜜蜂上顎腺分泌物，以及蜂蠟、花粉及其它一些有機(jī)與無機(jī)物的一種天然物質(zhì)，含有多種黃酮類、酸類、醇類、酚類、脂類、烯烴和萜類等化合物及多種氨基酸、酶、多糖、脂肪酸、維生素及化學(xué)元素，是一種優(yōu)良的天然藥物。2．蜂膠的佐劑作用蜂膠具有廣泛的生物活性和藥理作用。具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、消炎、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能和促進(jìn)組織再生等作用。蜂膠具有良好的免疫增強(qiáng)作用。它能保持抗原特性，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，提高機(jī)體的特異性和非特異性免疫力。3．蜂膠佐劑疫苗制備方法（1）蜂膠的處理：用市售蜂膠，放4℃以下低溫貯存，用前在4～8℃下粉碎，過篩，按1：4（W/V）加95％的乙醇，室溫浸泡24～48h，冷卻，過濾或離心取上清，即得透明栗色純凈蜂膠浸液。除去干渣計(jì)算出浸液中含蜂膠量，浸液4℃以下保存?zhèn)溆?。?）蜂膠佐劑疫苗的制備（以禽霍亂蜂膠疫苗為例）：將純凈培養(yǎng)的雞多殺性巴氏桿菌液，經(jīng)甲醛滅活后，加入蜂膠乙醇浸液，使每毫升菌液中含蜂膠10mg，邊加邊搖蕩，迅即成為乳濁狀，即為蜂膠佐劑疫苗。四、細(xì)胞因子類佐劑

1979年第2屆國(guó)際淋巴因子會(huì)議命名第1個(gè)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素2（interleukin-2，IL-2）在機(jī)體免疫系統(tǒng)活動(dòng)過程中，有許多種體液性免疫分子和細(xì)胞因子參與。前者如免疫球蛋白、補(bǔ)體和胸腺肽類。后者作為免疫活性細(xì)胞間相互作用的介質(zhì)和強(qiáng)有力的蛋白性調(diào)節(jié)因子，可以調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、炎性反應(yīng)、