需氧和兼性厭氧性球菌鑒定-葡萄球菌的鑒定（微生物檢驗課件）

需氧和兼性厭氧球菌對人有致病性的球菌主要引起化膿性炎癥,又稱化膿性球菌。G+：葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌G-:腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布蘭漢菌葡萄球菌屬

(Staphylococcus)分布廣泛，多為非致病菌。模式種：金黃色葡萄球菌（S.aureus）。（一）形態(tài)與染色

G+，球形，無鞭毛、無芽孢，呈葡萄串狀排列。一、生物學(xué)特性（二）培養(yǎng)特性營養(yǎng)：要求不高，某些菌株耐鹽(10-15%)。普通瓊脂平板、血液瓊脂平板生長特點不同。

液體：均勻渾濁生長。金黃色葡萄球菌：高鹽甘露醇平板為淡橙黃色菌落；羊血瓊脂平板為金黃色菌落。

金黃色葡萄球菌菌落特征（高鹽甘露醇平板）金黃色葡萄球菌菌落特征（血平板）中等大，突起，有色素，S型菌落。葡萄球菌菌落形態(tài)（普通瓊脂平板）金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌金黃色葡萄球菌有透明溶血環(huán)。表皮葡萄球菌無溶血環(huán)。（三）生化反應(yīng)

活潑，分解多種糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸。(如：葡萄糖，麥芽糖，蔗糖，甘露醇）

分解甘露醇、產(chǎn)生血漿凝固酶、耐熱核酸酶陽性是致病菌的主要特征。

觸酶（＋）（區(qū)別于鏈球菌屬）血漿凝固酶試驗［原理］致病性葡萄球菌能產(chǎn)生２種血漿凝固酶：一種為結(jié)合型凝固酶，細(xì)菌表面的纖維蛋白原受體與血漿中的纖維蛋白原結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)菌凝集。另一種為游離型凝固酶，可被人或兔血漿中的協(xié)同因子激活，成為凝血酶樣物質(zhì)，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，從而使血漿凝固。

［檢測方法］結(jié)合型凝固酶：玻片法游離型凝固酶：試管法玻片法操作：（1）準(zhǔn)備玻片（2）金葡白葡（3）滴加兔血漿（4）觀察結(jié)果試管法操作：耐熱核酸酶試驗液體培養(yǎng)物煮沸15min

37℃3h甲苯胺藍(lán)核酸瓊脂（四）抗原構(gòu)造１、蛋白抗原（staphylococcalproteinA,ＳＰＡ）只存在于金黃色葡萄球菌表面。２、多糖抗原

金黃色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸（檢測磷壁酸Ａｂ有助于金葡菌感染診斷）凝固酶（－）葡萄球菌：甘油磷壁酸葡萄球菌A蛋白（SPA）的意義：（1）降低抗體的調(diào)理作用，抗吞噬（2）協(xié)同凝集試驗:輔助診斷疾病。SPA的檢測模式示意圖致病性葡萄球菌（SPA)兔抗羊紅細(xì)胞Ab（IgGFc）SRBC致敏羊紅細(xì)胞（五）分類:３5個種及亞種１、按色素分類：金、白、檸２、按凝固酶分類：凝固酶陰性、凝固酶陽性葡萄球菌３、按噬菌體分類：

4、據(jù)色素、生化反應(yīng)分：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性葡萄球菌（六）抵抗力無芽胞菌中最強，耐熱、耐干燥、耐高鹽，對石炭酸、升汞、龍膽紫敏感。易產(chǎn)生耐藥性變異，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillinresistantstaphylococcus,MRSA）。MRSA常呈多重耐藥，成為醫(yī)院感染的常見菌。

長期住院、反復(fù)使用各種廣譜抗菌藥物、燒傷或有傷口的病人及與MRSA定植或感染的病人接觸都是造成院內(nèi)MRSA流行的危險因素。MRSA定植或感染的人員及院內(nèi)環(huán)境污染是引起院內(nèi)流行的主要來源。

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）MRSA對所有頭孢菌素類、青霉素類、碳青霉烯類和內(nèi)酰胺酶抑制劑類等抗生素耐藥，對氨基糖甙類和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素常協(xié)同耐藥。體外頭孢藥敏試驗敏感也不宜報告。目前敏感藥物：萬古霉素、替考拉寧、氟喹諾酮類的環(huán)丙沙星以及利福平和復(fù)方磺胺甲噁唑。二、致病性和免疫性(一)致病物質(zhì)金黃色葡萄球菌產(chǎn)生多種侵襲性酶與外毒素。

1．血漿凝固酶（coagulase)：結(jié)合型凝固酶、游離型凝固酶。

鑒別金黃色葡萄球菌的重要指標(biāo)。3．殺白細(xì)胞素4．腸毒素：（A、B、C1、C2、C3、D、E、G、H9個血清型）5．表皮剝脫毒素6.毒性休克綜合征毒素1（toxicshocksyndrometoxin1,TSST1）2．葡萄球菌溶血素（二）所致疾病

金黃色葡萄球菌

1．侵襲性疾?。海?）皮膚軟組織感染

特點：病灶局限且膿汁粘稠

（2）內(nèi)臟器官感染（3）全身感染（4）尿路感染2．毒素性疾?。?）食物中毒（2）燙傷樣皮膚綜合征由表皮剝脫毒素引起。（3）葡萄球菌性腸炎人類凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最為常見。

CNS主要引起以下幾種感染：泌尿系感染，細(xì)菌性心內(nèi)膜炎，敗血癥等，其中大多為醫(yī)院內(nèi)感染。此外，心臟起搏器安裝、置換人工心臟瓣膜、長期腹膜透析、靜脈滴注等亦可造成凝固酶陰性葡萄球菌的感染。凝固酶陰性葡萄球菌的致病性三、微生物學(xué)檢驗（一）標(biāo)本采集（二）檢驗程序（三）檢驗方法三、微生物學(xué)檢驗（一）標(biāo)本采集：根據(jù)病情采集標(biāo)本種類：膿液、傷口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、腦脊液、糞便等。注意：無菌操作，避免污染。（二）葡萄球菌檢驗程序膿液、咽拭子、穿刺液尿液、痰液腦脊液血液糞便、嘔吐物直接涂片染色增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)（血平板）分離培養(yǎng)（高鹽甘露醇平板）取可疑菌落鑒定試驗藥敏試驗涂片染色血漿凝固酶耐熱核酸酶其他鑒定試驗報告初報（三）檢驗方法

1、直接涂片重要價值：正常情況下無菌的標(biāo)本（如腦脊液）伴有炎癥細(xì)胞的其他體液標(biāo)本、膿液等初步報告：

“查見革蘭陽性葡萄狀排列球菌，疑為葡萄球菌”或：“查見類似葡萄球菌的革蘭陽性球菌”

2、分離培養(yǎng)

50ml葡萄糖肉湯（增菌）

渾濁無菌（7天）報告：無菌生長腦脊液、膿液、穿刺液、咽拭、尿液血平板血液標(biāo)本5ml糞便、嘔吐物高鹽甘露醇平板（三）檢驗方法3、鑒定試驗（1）血漿凝固酶試驗：金黃色葡萄球菌（+）（2）甘露醇發(fā)酵試驗：金黃色葡萄球菌（+）（3）耐熱核酸酶試驗：金黃色葡萄球菌（+）（４）腸毒素測定：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生（5）SPA檢測：金黃色葡萄球菌（6）凝固酶陽性和凝固酶陰性的葡萄球菌鑒定（7）葡萄球菌鑒定試劑盒腸毒素測定病人嘔吐物、糞便、剩余食物高鹽肉湯37℃24h分離培養(yǎng)肉湯煮沸30min，離心，取上清夜幼貓觀察癥狀（4h出現(xiàn)）幾種常見葡萄球菌的鑒別細(xì)菌菌落顏色溶血觸酶凝固酶甘露醇新生霉素

金黃色金黃色β+++S葡萄球菌表皮葡萄白色γ+--S球菌溶血葡萄白色β+--S/R球菌腐生葡萄檸檬黃γ+--R球菌Staphylococcusaures

（S）表皮葡萄球菌（S）腐生葡萄球菌(R)陰性結(jié)果>16mm（S）新生霉素耐藥試驗（四）結(jié)果評價和報告1、金黃色葡萄球菌：無論任何標(biāo)本中分離到均應(yīng)鑒定并報告臨床。2、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌：從輸液導(dǎo)管、人工植入組織中分離到，應(yīng)視為致病菌。3、尿培養(yǎng)計數(shù)：>103-104為陽性菌尿標(biāo)準(zhǔn)。4、其他凝固酶陰性葡萄球菌：引起感染流行或治療失敗時，應(yīng)鑒定到種。5、金黃色葡萄球菌（MRSA)：頭孢菌素類抗生素體外藥敏試驗為敏感時，不應(yīng)報告，因體內(nèi)試驗已證實MRSA對該類抗生素耐藥。病例男性，16歲，右下肢疼痛7天，發(fā)熱（最高39.4C）4天，呼吸困難3天。雙下肺可聞及少量濕羅音?；颊弋?dāng)日運動后出現(xiàn)右膝關(guān)節(jié)疼痛；次日劇烈活動后疼痛加重，出現(xiàn)右下肢腫脹，呈進行性脹痛，給予消炎鎮(zhèn)痛藥物無緩解。第三天出現(xiàn)發(fā)熱，寒戰(zhàn)，體溫39.8度，無咳嗽咳痰。第四天出現(xiàn)呼吸困難，給予左氧氟沙星治療后，癥狀無緩解。

病理診斷：金黃色葡萄球菌感染(Staphylococcus)概況：金黃色葡萄球菌可引起肺內(nèi)化膿性細(xì)菌性感染，主要為血源性或支氣管源性。其破壞組織能力很強，發(fā)展快，容易引起組織壞死。在肺部，組織壞死伴小支氣管活瓣阻塞，可引起氣腫，形成肺氣囊。臨床癥狀較重，高熱、胸痛、咳嗽、膿血痰等，并多伴全身癥狀。

CT表現(xiàn)：早期CT表現(xiàn)無特異性，可為雙側(cè)廣泛分布小斑片影，少數(shù)可為節(jié)段性或大片實變。本病特點為病變變化迅速，可從小片發(fā)展為大片，從單一病灶發(fā)展為多發(fā)病灶，短期內(nèi)出現(xiàn)肺膿腫，可有或無氣液平面，肺氣囊形成，常為兩肺多發(fā)。炎癥吸收，氣囊也消失?？砂橛心撔?。

病例分析：