流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理培訓(xùn)課件

目錄1淋巴細(xì)胞的分類(lèi)2淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)方法3淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)原理4淋巴細(xì)胞亞群的免疫功能5淋巴細(xì)胞亞群的臨床意義7/25/20231流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理T淋巴細(xì)胞細(xì)胞免疫B淋巴細(xì)胞體液免疫NK細(xì)胞固有免疫淋巴細(xì)胞的分類(lèi)淋巴細(xì)胞占外周血白細(xì)胞總數(shù)的20%-40%7/25/20232流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理檢測(cè)方法采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）是以流式細(xì)胞儀為檢測(cè)手段的一項(xiàng)能快速、精確的對(duì)單個(gè)細(xì)胞(或生物學(xué)顆粒)的理化特性進(jìn)行多參數(shù)定量分析和分選的技術(shù)7/25/20233流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理FCM檢測(cè)對(duì)象：?jiǎn)渭?xì)胞懸液或生物顆粒；檢測(cè)參數(shù)：多參數(shù)；檢測(cè)特點(diǎn)：?jiǎn)渭?xì)胞水平分析；檢測(cè)速度：高速，最高達(dá)上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞/秒；檢測(cè)結(jié)果：精度高、準(zhǔn)確性好；可對(duì)目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行分選；7/25/20234流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理熒光抗體直接標(biāo)記第一抗體熒光二抗間接標(biāo)記免疫熒光染色主要有兩種方法。間接標(biāo)記的方法難以進(jìn)行多色標(biāo)記，而且操作復(fù)雜，所以一般首選直接熒光染色檢測(cè)原理7/25/20235流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理常用熒光素<499nm藍(lán)色熒光（Blue）

500-549nm，綠色熒光（Green）550-584nm，黃色熒光（Yellow）

585-615nm，橙色熒光（Orange）616-700nm，紅色熒光（Red）

≥700nm，遠(yuǎn)紅外熒光（Far-Red）7/25/20236流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理常用熒光素?zé)晒馑胤肿蛹ぐl(fā)光波長(zhǎng)（nm）發(fā)射光波長(zhǎng)（nm）中文名FITC488525異硫氰酸熒光素PE488575藻紅蛋白PerCP490675多甲藻葉綠素蛋白APC633660別藻青蛋白PE-Cy5488670藻紅蛋白-花青素5PE-Cy7488755藻紅蛋白-花青素77/25/20237流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理免疫熒光染色FCM可檢測(cè)下列細(xì)胞成分：表面標(biāo)記物胞漿標(biāo)記物核內(nèi)標(biāo)記物可溶性成分7/25/20238流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理聯(lián)合CD45的四色方案第一種是用CD45/CD3/CD4/CD8做四色標(biāo)記，主要可以檢測(cè)T3細(xì)胞、T4細(xì)胞、T8細(xì)胞這三種不同的亞群CD45-FITCCD4-RD1CD8-ECDCD3-PC57/25/20239流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理聯(lián)合CD45的四色方案第二種是用CD45/CD3/CD19/CD16和（或）CD56做第二管的標(biāo)記，用于檢測(cè)T3細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞CD45-FITCCD56-RD1CD19-ECDCD3-PC57/25/202310流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理檢測(cè)目的相互協(xié)作共同參與123功能比例數(shù)量7/25/202311流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理T、B細(xì)胞相互作用7/25/202312流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理7/25/202313流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理主要檢測(cè)項(xiàng)目淋巴細(xì)胞總T細(xì)胞T4細(xì)胞T8細(xì)胞NK細(xì)胞B細(xì)胞7/25/202314流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理總T淋巴細(xì)胞CD3+T4細(xì)胞CD3+CD4+CD8-T8細(xì)胞CD3+CD8+CD4-B細(xì)胞CD3-CD19+NK細(xì)胞CD3-CD（16+56）+淋巴細(xì)胞的免疫標(biāo)志7/25/202315流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理總T細(xì)胞增高提示體內(nèi)的T細(xì)胞免疫功能增強(qiáng)見(jiàn)于臨床某些自身免疫性疾病（如SLE）、重癥肌無(wú)力、慢性活動(dòng)性肝炎、甲狀腺功能亢進(jìn)、淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎、器官移植排斥反應(yīng)、T細(xì)胞性白血病等7/25/202316流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理總T細(xì)胞降低提示體內(nèi)的T細(xì)胞免疫功能減弱見(jiàn)于某些白血病、應(yīng)用免疫抑制劑藥、放療過(guò)程中、先天性細(xì)胞免疫缺陷、艾滋病、多發(fā)性骨髓瘤、傳染性單核細(xì)胞增多癥，以及過(guò)勞等造成機(jī)體免疫功能處于相對(duì)較低的其他一些情況7/25/202317流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理7/25/202318流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理7/25/202319流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理T4細(xì)胞增高提示體內(nèi)存在細(xì)菌等病原微生物感染，主要見(jiàn)于臨床各種細(xì)菌性感染性疾病。器官移植發(fā)生排斥反應(yīng)支氣管哮喘SLE活動(dòng)期某些免疫增強(qiáng)藥物的有效結(jié)果注意:晝夜變化（傍晚的峰值可為上午的兩倍）7/25/202320流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理T4細(xì)胞降低提示體內(nèi)存在病毒等病原微生物，主要見(jiàn)于臨床各種病毒感染性疾病，以HIV感染時(shí)減少最為明顯T4細(xì)胞減少也可見(jiàn)于γ免疫球蛋白缺乏癥、胸腺發(fā)育不良、嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病、嚴(yán)重創(chuàng)傷、大手術(shù)等7/25/202321流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理T8細(xì)胞主要功能：特異性直接殺傷靶細(xì)胞兩條途徑：一是分泌穿孔素、顆粒酶及淋巴毒素等直接殺傷靶細(xì)胞二是通過(guò)Fas/FasL途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。7/25/202322流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理7/25/202323流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理殺傷特點(diǎn)：連續(xù)性殺傷特異性殺傷MHC限制性7/25/202324流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理T8細(xì)胞增高提示體內(nèi)存在病毒或胞內(nèi)寄生菌等病原微生物感染主要見(jiàn)于HIV、HBV、CMV、EB等病毒感染也可見(jiàn)于結(jié)核桿菌感染等7/25/202325流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理T8細(xì)胞降低移植排斥反應(yīng)可見(jiàn)于γ免疫球蛋白缺乏癥胸腺發(fā)育不良嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病糖尿病等7/25/202326流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理T4/T8細(xì)胞比值增高是T4淋巴細(xì)胞增高或T8淋巴細(xì)胞減少所致見(jiàn)于某些自身免疫性疾病，如SLE、多發(fā)性硬化、器官移植排斥反應(yīng)、自身免疫性溶血性貧血等7/25/202327流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理T4/T8細(xì)胞比值降低是T4細(xì)胞減少或T8細(xì)胞增高所致見(jiàn)于艾滋病、再生障礙性貧血、某些白血病、傳染性單核細(xì)胞增多癥、免疫缺陷綜合征、某些病毒感染、惡性腫瘤、結(jié)核病等一般來(lái)說(shuō)，導(dǎo)致T4/T8比值倒置，以全身性、侵襲和破壞機(jī)體免疫系統(tǒng)的感染引起的倒置變化幅度最大臨床抗感染治療有效時(shí)，可以觀察T4/T8細(xì)胞比值的逐步恢復(fù)7/25/202328流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理T4/T8細(xì)胞比值臨床意義器官移植受者免疫功能監(jiān)測(cè)個(gè)體化免疫治療療效判斷受者需要的是一種恰當(dāng)?shù)拿庖咭种疲瑢⒚庖吖δ芸刂圃谳^低的一個(gè)范圍內(nèi)。需要經(jīng)常性監(jiān)測(cè)受者的免疫功能，T4/T8細(xì)胞比值是非常好的一個(gè)監(jiān)測(cè)指標(biāo)當(dāng)受者T4/T8細(xì)胞比值出現(xiàn)小于0.2的情況時(shí)，必須立即停用免疫抑制藥，等待免疫功能的適當(dāng)恢復(fù)7/25/202329流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理T4/T8細(xì)胞比值與腫瘤惡性腫瘤患者術(shù)前T4/T8細(xì)胞比值低，手術(shù)后比值恢復(fù)正常當(dāng)發(fā)生癌轉(zhuǎn)移時(shí),T3、T4細(xì)胞數(shù)明顯減少的同時(shí)T8細(xì)胞數(shù)明顯增多T4/T8比值明顯降低,提示惡性腫瘤患者晚期細(xì)胞免疫功能更低,預(yù)后更差7/25/202330流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理產(chǎn)生抗體提呈抗原③免疫調(diào)節(jié)

B細(xì)胞的功能7/25/202331流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理B細(xì)胞增高提示機(jī)體體液免疫功能被增強(qiáng)此時(shí)體內(nèi)高親和力抗體的產(chǎn)生也增加見(jiàn)于臨床各種細(xì)菌性感染B細(xì)胞增高也見(jiàn)于B細(xì)胞白血病7/25/202332流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理B細(xì)胞減少見(jiàn)于原發(fā)及繼發(fā)性免疫功能低下，臨床可出現(xiàn)反復(fù)發(fā)作的呼吸道及消化道感染見(jiàn)于嚴(yán)重病毒性感染、使用免疫抑制劑制藥等情況見(jiàn)于原發(fā)性B細(xì)胞缺陷?。ㄈ缧月?lián)無(wú)丙種球蛋白血癥）和重癥聯(lián)合免疫缺陷（T細(xì)胞同時(shí)缺如）體液免疫功能不良者則減少在生命垂危時(shí)可呈現(xiàn)極度減少

7/25/202333流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理自然殺傷細(xì)胞表面標(biāo)記CD3-、CD56+、CD16+表面受體（1）殺傷細(xì)胞活化受體（KAR）結(jié)合靶細(xì)胞表面糖類(lèi)配體，促使NK發(fā)揮殺傷作用。（2）殺傷細(xì)胞抑制受體（KIR）識(shí)別自身細(xì)胞表面MHC-I類(lèi)分子，產(chǎn)生抑制信號(hào)無(wú)須致敏即直接殺傷靶細(xì)胞,抗感染與抗腫瘤,免疫調(diào)節(jié)7/25/202334流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理NK細(xì)胞作用及效應(yīng)機(jī)制

抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）天然細(xì)胞毒性

NK細(xì)胞介導(dǎo)的凋亡NK細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子NK細(xì)胞受體7/25/202335流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理

NK細(xì)胞通過(guò)ADCC作用殺傷病毒感染的靶細(xì)胞7/25/202336流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞電鏡圖7/25/202337流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理NK細(xì)胞NK細(xì)胞是機(jī)體抗某些病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)、真菌感染的重要免疫因素，NK細(xì)胞異常在病毒感染時(shí)尤其突出。NK細(xì)胞減少見(jiàn)于薩科奇病毒、腦心肌炎病毒、流感病毒、EB病毒、HSV-Ⅰ型等感染。NK細(xì)胞也參與Ⅱ型超敏反應(yīng)和移植物抗宿主反應(yīng)，IL-2治療后外周血NK細(xì)胞數(shù)量增加。7/25/202338流式淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)技術(shù)原理NK細(xì)胞NK細(xì)胞與腫瘤性疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)一般而言，腫瘤患者NK細(xì)胞數(shù)量較正常人減少，且減少的程度與腫瘤病情的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，病情好轉(zhuǎn)，NK細(xì)胞數(shù)量回升因此，NK細(xì)胞數(shù)量是腫瘤臨床病情判斷、療效監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。7/25/202339