ms的免疫病理機(jī)制及免疫干預(yù)治療課件

ms的免疫病理機(jī)制及免疫干預(yù)治療ms的免疫病理機(jī)制及免疫干預(yù)治療ms的免疫病理機(jī)制及免疫干預(yù)治療多發(fā)性硬化(MultipleSclerosis,MS)

的病理特征中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病變多發(fā)性病灶，反復(fù)發(fā)作，慢性進(jìn)行性過(guò)程病變常侵犯腦室周?chē)踪|(zhì)、視神經(jīng)、脊髓傳導(dǎo)束、腦干、小腦臨床表型復(fù)雜：良性型、亞臨床無(wú)癥狀型、復(fù)發(fā)緩解型、慢性進(jìn)展型2020/11/42多發(fā)性硬化(MultipleSclerosis,MS)

的病理特征中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病變多發(fā)性病灶，反復(fù)發(fā)作，慢性進(jìn)行性過(guò)程病變常侵犯腦室周?chē)踪|(zhì)、視神經(jīng)、脊髓傳導(dǎo)束、腦干、小腦臨床表型復(fù)雜：良性型、亞臨床無(wú)癥狀型、復(fù)發(fā)緩解型、慢性進(jìn)展型2020/11/42MS免疫學(xué)異常的基本特征病變神經(jīng)組織T細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生外周血及CNS中存在MBP(髓磷脂堿性蛋白)特異性T細(xì)胞的活化外周血淋巴細(xì)胞中Th1/Th2比例異常，顯示Th1優(yōu)勢(shì)可分離出自身反應(yīng)性致病性T細(xì)胞，即MBP特異性T細(xì)胞，體外培養(yǎng)可形成克隆化，并能轉(zhuǎn)移致病性(動(dòng)物實(shí)驗(yàn))，屬Th1細(xì)胞用MBP免疫動(dòng)物可復(fù)制疾病模型IL-2、IFN-γ、TNF、IL-12等Th1型細(xì)胞因子可加重病情，而IL-4、IL-10等Th2型細(xì)胞因子能緩解病情緩解的病人及模型動(dòng)物體內(nèi)能分離出Th2型的抑制性T細(xì)胞克隆2020/11/43MS發(fā)病的微生物感染引起

交叉免疫和分子模擬假說(shuō)MS病人血清、腦脊液中存在高頻率、高滴度的HHV-6抗體MS腦組織中能通過(guò)PCR法擴(kuò)增到HHV-6基因組DNA————MS發(fā)病與HHV-6有關(guān)HHV-6病毒蛋白可通過(guò)分子模擬機(jī)制激活MBP特異性自身反應(yīng)性T細(xì)胞？80%MS患者腦組織MS斑中的少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或斑周?chē)窠?jīng)白質(zhì)處含有HHV-6病毒蛋白101K或p41，而非MS者無(wú)一例陽(yáng)性2020/11/44美國(guó)貝勒醫(yī)學(xué)院中國(guó)學(xué)者

秦瑩、藏敬伍教授夫婦重組HHV-6B101K蛋白及其29KD免疫優(yōu)勢(shì)片段：具有觸發(fā)復(fù)發(fā)緩解型MS(RR-MS)患者T細(xì)胞對(duì)HHV-6應(yīng)答的免疫原性。MS病人識(shí)別HHV-6的T細(xì)胞以較高的前質(zhì)頻率出，HHV-6對(duì)T細(xì)胞的致敏作用可能與RR-MS的臨床發(fā)作有關(guān)對(duì)從MS患者體內(nèi)獲得的HHV-6特異性T細(xì)胞株和從健康對(duì)照建株的T細(xì)胞進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)二者對(duì)HHV-6優(yōu)勢(shì)片段的反應(yīng)性不同2020/11/45MS患者HHV-6

特異性T細(xì)胞的反應(yīng)頻率2020/11/46MS與趨化因子的異常表達(dá)CNS組織病灶中大量浸潤(rùn)C(jī)D4+T細(xì)胞異常的T細(xì)胞遷徙是MS發(fā)病的重要因素CD4+T細(xì)胞如何進(jìn)入CNS？焦點(diǎn)：趨化因子及其受體的作用2020/11/471、RANTES(C-C趨化因子家庭成員)具有很強(qiáng)的趨化T細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞的能力優(yōu)勢(shì)趨化的T細(xì)胞主要是分泌IFN-γ的T細(xì)胞，而對(duì)其趨化作用不敏感的T細(xì)胞主要分泌IL-10(RANTES主要促進(jìn)Th1/Th0細(xì)胞遷徙？)MS患者對(duì)外周T細(xì)胞表現(xiàn)較高的自發(fā)遷移能力，在RANTES或MIP-1α刺激下呈劑量依賴(lài)性增高，所需濃度0.1～1ng/ml，與MS患者血漿和腦脊液中測(cè)得的濃度一致免疫組化法證實(shí)RANTES在CNS主要由星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)，活動(dòng)性患者的表達(dá)水平高于正常人2倍，也高于穩(wěn)定期患者Th1型細(xì)胞因子及IL-1β、TNF-α在體外均可刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞RANTES表達(dá)增強(qiáng)Glatirameracetate:抑制IL-1β誘導(dǎo)RANTES表達(dá)，對(duì)MS起治療作用RANTES～Th1之間的正反饋相互調(diào)節(jié)：互為促進(jìn)，參與MS發(fā)病2020/11/482、CCR5(RANTES的主要受體)CCR5在外周血T細(xì)胞上主要表達(dá)于Th1細(xì)胞免疫組化發(fā)現(xiàn)：★CCR5主要表達(dá)于MS炎癥損傷灶的T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞★MS中樞病灶中T細(xì)胞CCR5表達(dá)水平顯著高于外周血T細(xì)胞復(fù)發(fā)期炎性病灶中含量明顯升高，緩解期則降低用抗CCR5單抗封閉，可部分抑制RANTES引起的T細(xì)胞遷移有些MS患者CCR5基因兩端缺失，只能編碼中間一段的CCR5(無(wú)功能)，此類(lèi)患者表現(xiàn)出較長(zhǎng)的疾病緩解期，病灶中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少——RANTES—CCR5參與MS發(fā)病中的T細(xì)胞遷移，但還有其他趨化因子及其受體參與，如RANTES還可以通過(guò)CCR1、CCR3遷移CCR5高表達(dá)是病因，還是繼發(fā)因素、炎癥刺激的結(jié)果？HHV-6的U12基因的ORF可編碼RANTES的功能性受體——HHV-6感染或再活化使CCR5高表達(dá)，或病毒基因產(chǎn)物模擬CCR5功能？2020/11/493、MIP-1MS患者CNS中MIP-1α/-1β含量明顯高于正常對(duì)照，尤以MIP-1β顯著主要分布于血管周?chē)?、腦實(shí)質(zhì)的巨噬細(xì)胞和髓鞘降解產(chǎn)物在動(dòng)物模型EAE，用MIP-1基因與一段重復(fù)的免疫刺激序列重組后對(duì)EAE小鼠作基因免疫接種，使小鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗MIP-1抗體，可抑制MIP-1的趨化作用，使模型小鼠發(fā)病變緩、癥狀變輕、對(duì)EAE的抵抗力增強(qiáng)其他：MCP、MIG、IP-10、MMP、CXCR3、CCR1、CCR2等———趨化因子的級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)？2020/11/410粘附分子與MS：VCAM-1慢性活動(dòng)性MS病灶中VCAM-1/VLA-4水平升高，急性期則升高不明顯RR-MS、SP(二次發(fā)作)的外周血中，單核細(xì)胞和T細(xì)胞上VLA-4高于正常1.5倍，腦脊液中高出3倍腦脊液中sVCAM-1濃度明顯升高，復(fù)發(fā)期升高，緩解期回落，但血清濃度與對(duì)照一致，不隨病情變化——VCAM-1/VLA-4在MS復(fù)發(fā)時(shí)表達(dá)增高，尤其在CNS

腦脊液中sVCAM-1可作為反映MS病情活動(dòng)的指標(biāo)2020/11/411TNF-α與sVCAM-1抗TNF-α抗體治療：加速疾病的活化矛TNF-α基因缺失小鼠，EAE模型病情更嚴(yán)重盾？TNF-α刺激人腦皮質(zhì)內(nèi)皮細(xì)胞(HCEC)：＊可使其顯著高表達(dá)VCAM-1,72小時(shí)達(dá)高峰＊144小時(shí)，培養(yǎng)上清sVCAM-1顯著增多，膜表面VCAM-1顯著減少＊sVCAM-1來(lái)源于膜表面的VCAM-1的脫落sVCAM-1達(dá)100ng/ml可阻斷VCAM-1的作用，阻止PBMCs與HCEC的粘附炎癥因素：TNF-α分泌→VCAM-1表達(dá)增高→病情惡化IFN-β→

sVCAM-1大量形成→病情緩解2020/11/412IFN-β對(duì)MS的治療作用與TNF-α協(xié)調(diào)作用→HCEC：sVCAM-1大量增加IFN-β單獨(dú)刺激無(wú)效sVCAM-1直接注射MS病人：緩解病情，治療作用

2020/11/413ICAM-1與MST細(xì)胞分泌的IFN-γ、TNF-α可促使腦內(nèi)皮質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的ICAM-1的表達(dá)呈增高在MS患者的腦脊液中，sICAM-1也升高，且也有抑制白細(xì)胞游走的功能2020/11/414Fas-FasL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與MS在MS中，F(xiàn)as-FasL系統(tǒng)在三方面起作用1、外周T細(xì)胞凋亡2、CNST細(xì)胞凋亡3、其它非T細(xì)胞凋亡2020/11/415MS中Fas-FasL介導(dǎo)的T細(xì)胞凋亡在MS動(dòng)物模型EAE中：①M(fèi)BP特異的自身反應(yīng)性T細(xì)胞轉(zhuǎn)移給gld小鼠(FasL缺陷)：產(chǎn)生EAE遷徙型臨床癥狀②在Fas和FasL都缺乏的小鼠：急性期較少看到T細(xì)胞凋亡③急性期80%CD4+T細(xì)胞和50%巨噬細(xì)胞表達(dá)Fas和FasL，同時(shí)有20%的CD4+T細(xì)胞凋亡；一些星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元也表達(dá)Fas、FasL，但不凋亡④Fas缺乏的EAE易感小鼠，經(jīng)抗原誘導(dǎo)EAE后，CNS中有大量CD4+T細(xì)胞浸潤(rùn)，但不凋亡，出現(xiàn)嚴(yán)重的神經(jīng)麻痹癥狀，死亡率高?！狤AE的臨床類(lèi)型與轉(zhuǎn)歸與Fas-FasL介導(dǎo)的T細(xì)胞凋亡有關(guān)：缺乏Fas系統(tǒng)的作用，自身反應(yīng)性T細(xì)胞凋亡不良，可導(dǎo)致CNS損傷2020/11/416在MS病人體內(nèi)將病人腦脊液中大量的MBP特異的T細(xì)胞分離出來(lái)，體外培養(yǎng)，用FasL抗體阻斷MBP-T的凋亡，發(fā)現(xiàn)MBP-T明顯增多，提示MS病人體內(nèi)的MBP-T對(duì)FasL介導(dǎo)的凋亡非常敏感，然而病人體內(nèi)凋亡不良不凋亡的MBP-T能選擇性識(shí)別MBP的特定肽段，并呈現(xiàn)Th2細(xì)胞因子分泌格局，提示MBP-T細(xì)胞發(fā)生了由Th1→Th2的轉(zhuǎn)變MS病人外周血中多克隆T細(xì)胞凋亡不足，sFAS水平增高，抑制了多克隆T細(xì)胞的凋亡2020/11/417Fas-FasL介導(dǎo)非T細(xì)胞的凋亡MS病人腦損傷部位Fas、FasL表達(dá)量比正常部位高——Fas-FasL介導(dǎo)了腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞的損傷？小膠質(zhì)細(xì)胞和T細(xì)胞表達(dá)FasL，少突膠質(zhì)細(xì)胞高表達(dá)Fas——小膠質(zhì)細(xì)胞和T細(xì)胞可引起MS中少突膠質(zhì)細(xì)胞損傷體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)：少突膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)FasL誘導(dǎo)的凋亡敏感巨噬細(xì)胞死亡，也表達(dá)Fas——巨噬細(xì)胞的死亡也是由Fas-FasL介導(dǎo)2020/11/418DowlingPetal.1997.JNeurolsci免疫組化定位MSFas-FasL表達(dá)細(xì)胞及MS損傷部分凋亡，發(fā)現(xiàn)：

＊

MS病人腦白質(zhì)損傷部位多種細(xì)胞(主要是小膠質(zhì)細(xì)胞，也包括巨噬細(xì)胞)表達(dá)FasL，同時(shí)這些細(xì)胞也高表達(dá)Fas形態(tài)學(xué)和DNA梯度電泳證實(shí)：

＊MS損傷部位的細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致少突膠質(zhì)細(xì)胞死亡的主要原因2020/11/419Fas-FasL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡對(duì)MS的意義Adouble-edgedsword:介導(dǎo)了CNS局部病灶中的組織損傷參與局部與外周淋巴細(xì)胞的清除及極化格局的轉(zhuǎn)換治療原則：促進(jìn)自身反應(yīng)性T細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)向Th2轉(zhuǎn)換保護(hù)CNS中局部組織細(xì)胞，免受Fas-FasL介導(dǎo)的凋亡

2020/11/420樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)在MS中的作用⒈DCs在MS中的致病作用：＊促進(jìn)T細(xì)胞活化、增殖和分化為T(mén)h1細(xì)胞＊釋放促炎癥因子，是致炎癥性細(xì)胞因子的重要來(lái)源＊激活自身反應(yīng)性T細(xì)胞⒉DCs在MS中的促進(jìn)恢復(fù)和病情緩解的作用＊誘導(dǎo)活化的致病性自身反應(yīng)性T細(xì)胞凋亡、清除＊誘導(dǎo)自身反應(yīng)性T細(xì)胞耐受性形成2020/11/421外周DCs在MS中的致病作用MS患者外周血中分泌IFN-γ、TNF-α和IL-6的循環(huán)性DCs含量增加，提示DCs是致炎癥性細(xì)胞因子的重要來(lái)源，在MS發(fā)病中起到促進(jìn)作用病毒、細(xì)菌感染→非特異性免疫途徑：激活DCs→俘獲交叉反應(yīng)性和/或隱蔽自身抗原→遷移到淋巴組織→激活自身反應(yīng)性T細(xì)胞→此T細(xì)胞獲得穿越血腦屏障的能力→進(jìn)入CNS：攻擊宿主細(xì)胞，引起炎癥，造成組織損傷2020/11/422中樞DCs在MS中的作用CNS中有可表達(dá)高水平炎癥因子IFN-γ、TNF-α、IL-12的DCs腦膠質(zhì)細(xì)胞可在GM-CSF培養(yǎng)系統(tǒng)中產(chǎn)生DCs樣細(xì)胞——DCs不但在外周起作用，還可以在CNS中募集并成熟，在局部起到刺激和維持自身免疫的作用，從而參與致病過(guò)程CNS中DCs的來(lái)源？起源于腦膠質(zhì)細(xì)胞？外周遷移到CNS？2020/11/423DCs促進(jìn)MS和EAE恢復(fù)的作用EAE恢復(fù)期的DCs：產(chǎn)生高水平NO，NO誘導(dǎo)DCs本身和自身反應(yīng)性T細(xì)胞凋亡——由DCs驅(qū)動(dòng)、NO介導(dǎo)的負(fù)反饋環(huán)路促進(jìn)了EAE的緩解MS病灶組織中CD8+DCs表達(dá)FasL，誘導(dǎo)表達(dá)Fas的CD4+T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞凋亡，消除或限制T細(xì)胞對(duì)其遞呈的抗原反應(yīng)——MS恢復(fù)期常常伴有炎性浸潤(rùn)細(xì)胞的缺失和凋亡2020/11/424多發(fā)性硬化中補(bǔ)體的作用MS：機(jī)體對(duì)自身CNS內(nèi)髓鞘脂成分及其產(chǎn)生的細(xì)胞少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答靶細(xì)胞：少突膠質(zhì)細(xì)胞靶抗原：MBP、MOG、PLP、CNP和MAG及少突膠質(zhì)細(xì)胞的特異性蛋白病人腦脊液中可檢出補(bǔ)體攻膜復(fù)合物C56789：除T細(xì)胞、細(xì)胞因子之外，Ig和補(bǔ)體也參與其免疫病理髓鞘特異性蛋白MOG：能結(jié)合C1q，其結(jié)合位點(diǎn)在IgG位點(diǎn)附近——MOG是CNS內(nèi)活化補(bǔ)體的特異蛋白？病人少突膠質(zhì)細(xì)胞上表達(dá)的CD59減少，但星形膠質(zhì)細(xì)胞仍能表達(dá)大量CD59——這是少突膠質(zhì)細(xì)胞易于受損而星形膠質(zhì)細(xì)胞不易受損的原因？2020/11/425MS的免疫干預(yù)防治1、IFN-β的應(yīng)用：＊

IFN-β1b或IFN-β1a，皮下注射＊用于復(fù)發(fā)-緩解型病人，早期應(yīng)用效果較好＊明顯降低疾病惡化率，減慢病殘進(jìn)展，阻止疾病復(fù)發(fā)機(jī)理：＊協(xié)同TNF-α促進(jìn)sVCAM-1大量增加，抑制炎性T細(xì)胞浸潤(rùn)＊直接抑制DCs分泌IL-12及T細(xì)胞分泌IFN-γ、IL-2，促進(jìn)單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-10，誘導(dǎo)DC2→Th2分化過(guò)程，抑制Th12020/11/426

2、T細(xì)胞疫苗/TCR疫苗/VβTCR疫苗的應(yīng)用＊以致病性T細(xì)胞或其TCR的Vβ獨(dú)特型決定簇刺激抗獨(dú)特型T細(xì)胞克隆的活化，從而抑制致病性T細(xì)胞的活化、增殖和致?。延糜谂R床試驗(yàn)＊可激發(fā)Th2細(xì)胞活化