醫(yī)療器械無(wú)菌試驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南(2023年版)

醫(yī)療器械無(wú)菌試驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南(2023—2——2—醫(yī)療器械無(wú)菌試驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南〔2023版〕無(wú)菌檢驗(yàn)是無(wú)菌醫(yī)療器械產(chǎn)品生產(chǎn)把握過(guò)程中的一項(xiàng)重要內(nèi)容。其檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果判定及檢驗(yàn)人員業(yè)務(wù)力氣等因素直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量和的生疏，指導(dǎo)和標(biāo)準(zhǔn)全市醫(yī)療器械生產(chǎn)監(jiān)管人員對(duì)醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)無(wú)菌檢驗(yàn)過(guò)程把握水平的監(jiān)視檢查工作，同時(shí)，為醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)〔以下簡(jiǎn)稱(chēng)生產(chǎn)企業(yè)〕在無(wú)菌檢驗(yàn)的過(guò)程治理要求供給參考和依據(jù)。一、適用范圍業(yè)許可證》核發(fā)、變更、換證等現(xiàn)場(chǎng)檢查、醫(yī)療器械質(zhì)量治理體系考核、醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量治理標(biāo)準(zhǔn)檢查、醫(yī)療器械生產(chǎn)日常監(jiān)視等各項(xiàng)涉無(wú)菌檢驗(yàn)的檢查。二、檢查內(nèi)容驗(yàn)過(guò)程的把握水平進(jìn)展客觀的檢查和評(píng)價(jià)。關(guān)記錄：查法包括直接接種法和薄膜過(guò)濾法。當(dāng)建立產(chǎn)品的無(wú)菌檢查方法時(shí)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)進(jìn)展方法的驗(yàn)證，以證明所承受的方法能夠給出正確的結(jié)果。假設(shè)該產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生轉(zhuǎn)變時(shí)，檢查方法應(yīng)重驗(yàn)證。驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)按供試品無(wú)菌檢查的規(guī)定及有關(guān)要求進(jìn)展操作。對(duì)藥典規(guī)定的每一試驗(yàn)菌—3——4—4—2℃～25℃、避光的環(huán)境，假設(shè)保存于非密閉容器中，一般在3周內(nèi)使用；假設(shè)保存于密閉容器中，一般可在1年內(nèi)使用?；臒o(wú)菌性檢查及靈敏度檢查的要求。檢查可在供試品的無(wú)菌檢查前或與供試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)展。供試品的無(wú)菌檢查承受薄膜過(guò)濾法。供試品無(wú)菌檢查所承受的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與驗(yàn)證的方法一樣。無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程中，假設(shè)需使用外表活性劑、滅活劑、中和劑等試劑，應(yīng)證明其有效性，且對(duì)微生物無(wú)毒性。供試品容器內(nèi)有確定的真空度，可用適宜的無(wú)菌器材〔如帶有除菌過(guò)濾器的針頭〕向容器內(nèi)導(dǎo)入無(wú)菌空氣，再按無(wú)菌操作起開(kāi)容器取出內(nèi)容物。培育及觀看含培育基的容器按規(guī)定的溫度培育14天。培育期間應(yīng)逐日觀看并記錄是否有菌生長(zhǎng)。如在參與供試品后、或在培育過(guò)程中，培育基消滅渾濁，培育14天后，不能從外觀上推斷有無(wú)微生物生長(zhǎng)，可取該培育液適量轉(zhuǎn)種至同種穎培育基中，細(xì)菌培育2天、真菌培育3天，觀看接種的同種穎培育基是否再消滅渾濁；或取培育液涂片，染色，鏡檢，推斷是否有菌。在觀看試驗(yàn)結(jié)果的過(guò)程中，還應(yīng)考慮假陰性的影響。其中影響假陰性〔促生長(zhǎng)試驗(yàn)〔消退抑菌物質(zhì)處理到培育有確定的時(shí)間間隔〔確定滅菌后產(chǎn)品的儲(chǔ)存條件及儲(chǔ)存時(shí)間。結(jié)果推斷生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)依據(jù)如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)展推斷：規(guī)定；②假設(shè)供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。陽(yáng)性比照管應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性比照管不得有菌生長(zhǎng)，否則試驗(yàn)無(wú)效。所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求；②回憶無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程，覺(jué)察有可能引起微生物污染的因素；③供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和〔或〕無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。假設(shè)無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；假設(shè)有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。6、查閱試驗(yàn)記錄。完整的試驗(yàn)記錄應(yīng)明確包含以下幾類(lèi)信息：批號(hào)、取樣地點(diǎn)、取樣方式、取樣人、原始試驗(yàn)記錄序號(hào)。滅菌物品制作記錄①培育基：培育基名稱(chēng)、培育基批號(hào)、培育基用量〔g、蒸餾水用量〔m制作人、培育基存放地點(diǎn)和有效期等。滅菌時(shí)間、制作人、器具存放地點(diǎn)、有效期等。原始試驗(yàn)記錄，至少應(yīng)包括：記錄名稱(chēng)、記錄序號(hào)、樣品名稱(chēng)、樣品唯一性標(biāo)識(shí)〔例如：樣品號(hào)、樣品規(guī)格、樣品批號(hào)、滅菌批號(hào)、樣品、試驗(yàn)結(jié)論、檢測(cè)人、復(fù)核人等?！补腆w、液體、廢棄物數(shù)量、滅菌時(shí)間和壓力、經(jīng)辦人、處理日期等。三、其它應(yīng)留意的問(wèn)題1表加工過(guò)程和條件的批中選擇。選擇樣品是隨機(jī)的。試驗(yàn)樣品的選擇和處試驗(yàn)樣品可以選擇制造過(guò)程中的不合格產(chǎn)品，它們應(yīng)當(dāng)代表這個(gè)生產(chǎn)批的加工程序和條件。用于試驗(yàn)的不合格產(chǎn)品應(yīng)不會(huì)影響無(wú)菌測(cè)試的有效性。2尤其是只有一層包裝的樣品。進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室的樣品假設(shè)有兩層〔或兩層以上〕包裝的，需將外包裝在傳遞窗〔或緩沖間〕撤除后，傳入試驗(yàn)室。被燙死。對(duì)不同種類(lèi)和不同批次的產(chǎn)品，在拆包裝及夾取樣品時(shí)，應(yīng)更換試驗(yàn)用具〔如：剪刀、鑷子。法進(jìn)展消毒處理〔如：紫外燈照耀不少于30分鐘121℃高壓30的全過(guò)程，對(duì)于在試驗(yàn)過(guò)程中消滅的各種狀況，均應(yīng)在記錄中客觀反映。參考資料一：常見(jiàn)的名詞解釋110-6及以下。動(dòng)物和病毒。染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施，其中包括無(wú)菌環(huán)境設(shè)施、無(wú)菌試驗(yàn)器材以及無(wú)菌操作。檢驗(yàn)的過(guò)程中，能防止微生物污染與干擾的一種常規(guī)操作方法。方式的組合。6、需氧菌：在代謝中，有氧條件下才能生存的微生物。7、厭氧菌：在代謝中，沒(méi)有氧的條件下才能生存的微生物。8、抑細(xì)菌/抑霉菌試驗(yàn)：用選定的微生物來(lái)演示某些物質(zhì)的存在能夠抑制這些微生物的生殖。910、假陰性：實(shí)際陽(yáng)性的無(wú)菌試驗(yàn)結(jié)果被變成了陰性。11、假陽(yáng)性：實(shí)際陰性的無(wú)菌試驗(yàn)結(jié)果被變成了陽(yáng)性。檢驗(yàn)器材。13在一個(gè)或多個(gè)預(yù)定工藝參數(shù)上顯示變化的指示器材。14、無(wú)菌保證水平〔SAL〕:滅菌后產(chǎn)品上存在單個(gè)活微生物的概率。參考資料二：無(wú)菌室空氣中菌落數(shù)的檢查無(wú)菌室在消毒處理完畢后，應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)。方法如下：取直徑約90mm20mL35℃培育483只培育皿在無(wú)菌室操作臺(tái)或超凈工作臺(tái)平均位置翻開(kāi)上蓋，暴露30分鐘后蓋好，置30℃～35℃培育48小時(shí)后取出檢查，3只雙碟上生長(zhǎng)的菌落數(shù)平均不得超過(guò)1個(gè)。無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)，方法同上。在試驗(yàn)開(kāi)頭進(jìn)展時(shí)翻開(kāi)平皿蓋，至試驗(yàn)完畢蓋好照上法培育，應(yīng)符合上述要求。參考資料三：供試品數(shù)量的選擇檢驗(yàn)數(shù)量是指一次試驗(yàn)所用供試品最小包裝容器的數(shù)量。除另有規(guī)定B中表123規(guī)定。表1、表2、表3中最少檢驗(yàn)數(shù)量不包括陽(yáng)性比照試驗(yàn)的供試品用量。1/2的最小檢驗(yàn)數(shù)量作陽(yáng)性比照用；假設(shè)承受直接接種法，應(yīng)增加供試品1〔或瓶〕作陽(yáng)性比照用。執(zhí)行GB/T14233.2的供試品數(shù)量應(yīng)滿(mǎn)足同一批號(hào)3～11個(gè)單位供試品。檢驗(yàn)量是指一次試驗(yàn)所用的供試品總量〔gml份培育基接種的供試品量按表2、表3規(guī)定。假設(shè)每支〔瓶〕供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩份培育基，則應(yīng)分別接種硫乙醇酸鹽流體培育基和改進(jìn)馬丁培育基。承受薄膜過(guò)濾法時(shí)，檢驗(yàn)量應(yīng)不少于直接接種法的總接種量，只要供試品特性允許，應(yīng)將全部容器內(nèi)的全部?jī)?nèi)容物過(guò)濾。表1供試品批產(chǎn)量N(個(gè))每種培育基最少檢驗(yàn)數(shù)量注射劑≤100100＜N≤50010%或4個(gè)(取較多者)10個(gè)大體積注射劑(＞＞5002%或20個(gè)(取較少者)2%或10個(gè)(取較少者)100ml)眼用及其他非注射產(chǎn)品≤200＞2005%或2個(gè)(取較多者)10個(gè)桶裝固體原料≤4每個(gè)容器4＜N≤50＞5020%或4個(gè)容器(取較多者)2%或10個(gè)容器(取較多者)醫(yī)療器具10≤10010%或4〔取較多者〕100＜N≤500＞500102%或20〔取較少者〕注:假設(shè)每個(gè)容器中的裝量缺乏接種兩種培育基,那么表中的檢—10—10—驗(yàn)數(shù)量應(yīng)加倍2上市抽驗(yàn)樣品(液體制劑)的最少檢驗(yàn)量供試品量V(ml)每支樣品接入每管培養(yǎng)基的最少樣品量最少檢驗(yàn)數(shù)量(瓶或支)≤1全量20①1＜V＜5半量105≤V＜202ml1020≤V＜505ml1050≤V＜10010ml1050≤V＜100(靜脈給藥)半量10100≤V≤500半量6V＞500500ml6103上市抽驗(yàn)樣品(固體制劑)的最少檢驗(yàn)量供試品裝量M(瓶或支)每支樣品接入每管培育基的最少樣品量最少檢驗(yàn)數(shù)量(瓶或支)M＜50mg全量20①50mg≤M＜300mg半量10300mg≤M＜5g150mg10M≥5g500mg10一次性使用含藥產(chǎn)品整個(gè)產(chǎn)品10104參考資料四：培育基的制備30～35℃1423～28℃14制造方法、潛在的微生物污染來(lái)源、可能遇到的微生物種類(lèi)。硫乙醇酸鹽流體培育基必需在煮沸后，再進(jìn)展分裝、滅菌。1、硫乙醇酸鹽流體培育基酪胨(胰酶水解)15.0g、酵母浸出粉5.0g、葡萄糖5.0g、氯化鈉2.5g、L-胱氨酸0.5g、配制的0.1%刃天青溶液1.0ml、硫乙醇酸鈉0.5g0.3ml)、瓊脂0.75g、水1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)整pH弱堿性，煮沸，濾清，參與葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)整pH7.1±0.2培育完畢后培育基氧化層〔粉紅色〕不超過(guò)培育基深度的1/2。滅菌。在1/5須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消逝〔不超過(guò)20分鐘，快速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。30℃～35℃培育。2、改進(jìn)馬丁培育基5.0g1.0g2.0g0.5g、葡萄糖20.0g1000mlpH值約為6.8，煮沸，參與葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)整pH值使滅菌后為6.4±0.2，分裝，滅菌。23℃～28℃培育。3、選擇性培育基基滅菌或使用前參與適宜的中和劑、滅活劑或外表活性劑，其用量同驗(yàn)證試驗(yàn)。4、養(yǎng)分肉湯培育基10.0g、氯化鈉5.0g、牛肉浸出粉3.0g1000mlpHpH7.2±0.2，分裝，滅菌。5、養(yǎng)分瓊脂培育基按上述養(yǎng)分肉湯培育基的處方及制法，參與14.0g瓊脂，調(diào)整pH值7.2±0.2，分裝，滅菌。6、改進(jìn)馬丁瓊脂培育基按改進(jìn)馬丁培育基的處方及制法，參與14.0g瓊脂，調(diào)整pH值使滅6.4±0.2，分裝，滅菌。參考資料五：培育基的適用性檢查支〔瓶14菌生長(zhǎng)。2、靈敏度檢查5〔從菌種保存中心獲得的冷凍枯燥菌種為第代，試驗(yàn)用菌種應(yīng)承受適宜的菌種保存技術(shù)進(jìn)展保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC(B)26003〕銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)〔CMCC(B)10104〕枯草芽孢桿菌〔Bacillussubtilis〔CMCC〔〕63501〕生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)〔CMCC(B)64941〕白色念珠菌(Candidaalbicans)〔CMCC(F)98001〕黑曲霉(Aspergillusniger)〔CMCC(F)98003〕3、菌液制備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的穎培育物至養(yǎng)分肉湯培育基中或養(yǎng)分瓊脂培育基上，接種生孢梭菌的穎培育物至硫乙醇酸鹽流體培育基中，30℃～35℃培育18小時(shí)～24小時(shí)；接種白色念珠菌的穎培育物至改進(jìn)馬丁培育基中或改進(jìn)馬丁瓊脂培育基上，23～28℃培育24～48小時(shí)，上述培育物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml于100cfu〔菌落形成單位〕的菌懸液。接種黑曲霉的穎培育物至改進(jìn)馬丁瓊脂斜面培育基上，23～28℃培育5～7天，參與3～5ml含0.05％〔v/v〕聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05％〔v/v〕聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml于100cfu的孢子懸液。22～8℃可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2～8℃，在驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)使用。4、培育基接種取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培育基9支，分別接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2139ml的改進(jìn)馬丁培養(yǎng)基5支,分別接種小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白比照，培育5天。逐日觀看結(jié)果。5、結(jié)果判定空白比照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，假設(shè)加菌的培育基管均生長(zhǎng)良好，判該培育基的靈敏度檢查符合規(guī)定。參考資料六：方法驗(yàn)證試驗(yàn)1、菌種及菌液制備除大腸埃希菌〔Escherichiacoli〕[CMCC(B)44102〕外，金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培育基靈敏度檢查。大腸埃希菌的菌液制備同金黃色葡萄球菌。2、薄膜過(guò)濾法取每種培育基規(guī)定接種的供試品總量按薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，沖洗，在最終一次的沖洗液中參與小于100cfu的試驗(yàn)菌，過(guò)濾。取出濾膜接種至硫乙醇酸鹽流體培育基或改進(jìn)馬丁培育基中，或?qū)⑴嘤又翞V筒內(nèi)。另取一3～5天，各試驗(yàn)菌同法操作。3、直接接種法8接入小于100cfu的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2管，取符合直接接種法培育基用量要求的改進(jìn)馬丁培育基4管，分別接入小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入每支培育基規(guī)定量的供試品量，另1管作為比照，按置規(guī)定的溫度培育3～5天。4、結(jié)果推斷試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌作用或其抑菌作用可以無(wú)視不計(jì)，照此檢查方法和檢查條件進(jìn)展供試品的無(wú)菌檢查。如含供試品的任一容器中的試驗(yàn)菌生長(zhǎng)微弱、緩慢或不生長(zhǎng)，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用，可承受增加沖洗量、增加培育基的用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消退供試品的抑菌作用，并重進(jìn)展方法驗(yàn)證試驗(yàn)。參考資料七：供試品處理及接種培育基直接接種法：每個(gè)供試品按規(guī)定量分別接種至各含硫乙醇酸鹽流體培育基和改進(jìn)馬丁培育基的容器中。除另有規(guī)定外，每個(gè)容器中培育基的用10%，同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培育基每管裝量不少于15ml，改進(jìn)馬丁培育基每管裝量不少于10ml。薄膜過(guò)濾法：將供試液混勻，過(guò)濾。如供試品具有抑菌作用或含防腐劑，須用適量的沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)不得少于三次。沖洗后，如用封閉式薄膜過(guò)濾器，分別將100ml硫乙醇酸鹽流體培育基及改進(jìn)馬丁培育基參與相應(yīng)的濾筒內(nèi)。如承受一般薄膜過(guò)濾器，取出濾膜，將其剪成3等份，分別置于含50ml其中一份做陽(yáng)性比照用。無(wú)菌檢查用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μm50mm溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)?？股毓┰嚻窇?yīng)選擇低吸附的濾器及濾膜。濾器及濾膜使用前應(yīng)承受適宜的方法滅菌。使用