儀分實(shí)驗(yàn)-熒光法測定維生素B2藥物中核黃素含量課件

2023/7/312023/7/31實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ê唵危?、實(shí)驗(yàn)原理（詳細(xì)）3、試劑儀器（簡單）4、實(shí)驗(yàn)步驟（簡單）5、數(shù)據(jù)處理（詳細(xì)，表格，圖）6、結(jié)果討論（重點(diǎn)）①、回答思考題的問題②、討論引入誤差的原因③、實(shí)驗(yàn)操作中的注意事項(xiàng)及減小誤差的方法實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ê唵危晒夥y定維生素B2藥物中核黃素含量實(shí)驗(yàn)二熒光法測定維生素B2藥物中核黃素含量實(shí)驗(yàn)二維生素B22023/7/31維生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有機(jī)溶劑，在中性或酸性溶液中穩(wěn)定，光照易分解，對熱穩(wěn)定。稀釋后有強(qiáng)烈熒光，維生素B2溶液在430～440nm藍(lán)光的照射下，發(fā)出綠色熒光，其峰值波長為525nm。維生素B22023/7/31維生素B2易溶于水而不溶于乙醚等一、實(shí)驗(yàn)原理

2023/7/31（1）定量依據(jù)：維生素B2在水中是強(qiáng)的熒光物質(zhì)，并且在低濃度時(shí)，熒光強(qiáng)度與維生素B2濃度呈正比：If=kc（2）定量方法（標(biāo)準(zhǔn)曲線法）：測定一系列已如濃度的維生素B2的熒光強(qiáng)度，然后以熒光強(qiáng)度對維生素B2濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，再測定未知濃度維生素B2的熒光強(qiáng)度，把它代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求出其濃度。一、實(shí)驗(yàn)原理

2023/7/31（1）定量依據(jù)：維生素B2If=kc熒光強(qiáng)度vs.濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線熒光強(qiáng)度核黃素濃度樣本If=kc熒光強(qiáng)度vs.濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線熒光二、實(shí)驗(yàn)儀器2023/7/31

測量熒光的儀器主要由四個(gè)部分組成：激發(fā)光源、樣品池、雙單色器系統(tǒng)、檢測器。

特殊點(diǎn)：有兩個(gè)單色器，光源與檢測器通常成直角。二、實(shí)驗(yàn)儀器2023/7/31測量熒光的儀器主要由四三、實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)吸量管的使用，溶液轉(zhuǎn)移，定容同樣條件下測定讀取熒光數(shù)據(jù)熒光儀的操作，發(fā)射光譜和激發(fā)光譜繪制If對濃度C擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線4.數(shù)據(jù)處理2.標(biāo)準(zhǔn)溶液熒光測定3.未知樣品熒光測定1.配制標(biāo)準(zhǔn)溶液三、實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)吸量管的使用，溶液轉(zhuǎn)移，定容同樣條件下移液管的使用常見移液管：標(biāo)有溫度和容量(注意是否標(biāo)有吹)用途：準(zhǔn)確移取一定體積的液體操作：洗滌(蒸餾水)、潤洗(3次)、移液、洗滌干凈注意事項(xiàng)：1、整個(gè)操作過程中，保持移液管的垂直；2、讀數(shù)時(shí)視線與凹液面平齊溶液下端1-2cm移液管的使用常見移液管：標(biāo)有溫度和容量(注意是否標(biāo)有吹)注意1.打開氙燈，再打開主機(jī)，然后打開計(jì)算機(jī)啟動(dòng)工作站并初始化儀器。2.儀器初始化完畢后，在工作界面上選擇測量項(xiàng)目，設(shè)置適當(dāng)?shù)膬x器參數(shù)：確定激發(fā)波長和發(fā)射波長。3.樣品測定。4.退出主程序，關(guān)閉計(jì)算機(jī)，先關(guān)主機(jī)，最后關(guān)氙燈。基本操作1.打開氙燈，再打開主機(jī)，然后打開計(jì)算機(jī)啟動(dòng)工作站并初始化四、數(shù)據(jù)處理

2023/7/31濃度（10-1

μg.mL-1）012345X熒光強(qiáng)度扣除空白1.原始數(shù)據(jù)2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制和未知樣品的濃度計(jì)算四、數(shù)據(jù)處理

2023/7/31濃度（10-1μg.mL-五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1.實(shí)驗(yàn)過程中，注意使用石英比色池時(shí)必須保持四面干凈，拿穩(wěn)棱角注意不要摔落;2.實(shí)驗(yàn)完畢，注意檢查儀器是否運(yùn)行正常，關(guān)閉程序是否正確。3.試劑取后，得放回原處，保持試驗(yàn)臺(tái)整潔。2023/7/31五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1.實(shí)驗(yàn)過程中，注意使用石英比色池時(shí)必須保1.為什么熒光光度法較吸收光度法靈敏度高？2.維生素B2在pH=6~7時(shí)熒光最強(qiáng)，本實(shí)驗(yàn)為何在酸性溶液中測定？3.如何繪制激