植物生理學實驗指導-課件

植物生理學實驗指導1PPT課件植物生理學實驗指導1PPT課件試驗一小液流法測定植物組織水勢試驗目的了解測定植物組織水勢的方法原理將植物放在已知水勢的一系列溶液中，如果組織的水勢與溶液的水勢不相等，則組織吸水或失水或維持平衡，引起溶液的濃度、密度、電導率等參數(shù)發(fā)生變化。然后根據(jù)這些變化情況確定植物組織的水勢。2PPT課件試驗一小液流法測定植物組織水勢試驗目的了解測定植物組織水器材與試劑①實驗儀器：試管，移液管，毛細滴管，打孔器，鑷子；②實驗試劑：1.00mol.L-1蔗糖溶液，甲烯藍；③實驗材料：玉米、菠菜或其它植物葉片。實驗步驟①取8支試管，編號，配制0.1~0.8mol.L-1試驗一小液流法測定植物組織水勢3PPT課件器材與試劑試驗一小液流法測定植物組織水勢3PPT課件的溶液，加好塞子，作為對照組；②另取8支試管，對應于對照組編號，然后從對照組的試管中分別取4ml溶液移入對應編號的試驗組試管中，加塞；③用打孔器在葉片上打孔，隨機取樣，向試驗組的每一試管中放入20片，加塞，放置30分鐘，其間搖動數(shù)次。到時間后，用大頭針沾取少許甲烯藍粉末加入每一試驗試管。試驗一小液流法測定植物組織水勢4PPT課件的溶液，加好塞子，作為對照組；試驗一小液流法測定植物組織水④用8支毛細滴管從試驗組的各管中依次吸取少許著色的液體少許，緩慢插入對照組相應試管的中部，緩慢橫向放出一滴溶液，觀察藍色液滴的移動方向。液滴向上運動——說明？液滴向下運動——說明？液滴靜止不動——說明？

——蔗糖溶液的密度大于純水的密度！試驗一小液流法測定植物組織水勢5PPT課件④用8支毛細滴管從試驗組的各管中依次吸取試驗一小液流法測定⑤計算葉片細胞的水勢Фcell=Фout=-icRT;其中：Фcell為植物細胞水勢；Фout為外界溶液滲透式；i為解離系數(shù)，蔗糖為1；c為液體濃度（mol.L-1）；R為摩爾氣體常數(shù)，0.083×105L.Pa/mol.KT絕對溫度值，=t℃+273試驗一小液流法測定植物組織水勢6PPT課件⑤計算葉片細胞的水勢試驗一小液流法測定植物組織水勢6PPT實驗報告1、實驗的結(jié)果；2、產(chǎn)生誤差的原因。試驗一小液流法測定植物組織水勢7PPT課件實驗報告試驗一小液流法測定植物組織水勢7PPT課件試驗二葉綠素ab含量的測定實驗目的熟悉測定未經(jīng)分離的葉綠素ab的方法與計算；實驗原理葉綠素a和b分別在663nm和645nm處有吸收峰；

Ca=12.7OD663-2.69OD645Cb=22.9OD645-4.68OD663器材與試劑1、實驗儀器高級分光光度計，離心機，天平，剪刀、研缽，漏斗，移液管，20ml棕色容量瓶；8PPT課件試驗二葉綠素ab含量的測定實驗目的熟悉測定未經(jīng)分離的葉綠試驗二葉綠素ab含量的測定2、實驗試劑丙酮，碳酸鈣3、植物葉片：同一種植物的陰葉和陽葉；實驗步驟1、色素的提取取新鮮葉片0.5g，放入研缽，加入純丙酮5ml，少許碳酸鈣和石英砂，研磨成勻漿，再加入80%丙酮酸5ml，將勻漿移入離心管，并用適量80%丙酮清洗研缽。5000rpm離心5分鐘，取上清液用80%丙酮定容至20ml9PPT課件試驗二葉綠素ab含量的測定2、實驗試劑丙酮，碳酸鈣9P試驗二葉綠素ab含量的測定2、測定光密度取上述色素提取液1ml，加80%丙酮溶液4ml，轉(zhuǎn)入比色杯中中，以80%丙酮為對照，分別測定663和645nm時的吸收值；3、計算實驗報告1、比較陰陽葉葉綠素ab的含量比值的差異。10PPT課件試驗二葉綠素ab含量的測定2、測定光密度取上述色素實驗三改良半葉法植物光和強度測定實驗原理將植物對稱葉片的一部分遮光或取下置于暗處，另一部分則進行光合作用，過一定時間后，在這兩部分葉片的對應部位去同等面積，分別烘干稱重。開始時視為相等，照光后葉片重量超過暗中的重量，超過部分即為光合產(chǎn)物的產(chǎn)量，并通過一定的計算可得到光合作用強度。11PPT課件實驗三改良半葉法植物光和強度測定實驗原理將植物對實驗三改良半葉法植物光和強度測定器材與試劑1、儀器2、試劑三氯乙酸（10%）3、代表性植物葉片實驗步驟1、選擇測定樣品選擇光照條件好、葉齡一致的葉片20片，編號。2、葉基部處理用5%三氯乙酸處理葉柄基部。12PPT課件實驗三改良半葉法植物光和強度測定器材與試劑12PPT課實驗三改良半葉法植物光和強度測定注意：可見灼傷，但葉片姿勢保持不變。3、剪取樣品基部處理完成之后，剪取樣品，同時準確記錄取樣時間（精確到分鐘）；剪取時注意不要傷及主脈。樣品用濕紗布保存，置于4℃暗處保存。4、光和后取樣

4~5小時候，取樣，方法同上13PPT課件實驗三改良半葉法植物光和強度測定注意：可見灼傷，但葉片實驗三改良半葉法植物光和強度測定5、稱重比較測定打孔器面積；每葉片打孔15片。分別置于不同的培養(yǎng)皿中。80℃烘干至恒重，稱重。6、計算結(jié)果A=干重增加數(shù)（mg）/(葉面積*光照時數(shù))14PPT課件實驗三改良半葉法植物光和強度測定5、稱重比較14PPT實驗四小籃子法測定呼吸強度【實驗原理】利用Ba(OH)2溶液吸收呼吸過程中釋放的CO2，試驗結(jié)束時，用草酸溶液滴定殘留的Ba(OH)2，從空白和樣品兩者消耗草酸溶液之差，計算出呼吸過程中釋放的CO2?！酒鞑呐c儀器】1.實驗儀器廣口瓶，溫度計，酸式滴定管，干燥管，尼龍網(wǎng)制小籃。15PPT課件實驗四小籃子法測定呼吸強度【實驗原理】15PPT課件實驗四小籃子法測定呼吸強度2.實驗試劑①0.05mol.L-1Ba(OH)2；②0.1%麝香草酚酞酒精溶液；③1/44mol.L-1草酸溶液。重結(jié)晶草酸2.8652g，蒸餾水定容至1000ml。3.實驗材料發(fā)芽的小麥種子或其它植物活體。16PPT課件實驗四小籃子法測定呼吸強度2.實驗試劑16PPT課件實驗四小籃子法測定呼吸強度【實驗步驟】1.實驗裝置17PPT課件實驗四小籃子法測定呼吸強度【實驗步驟】17PPT課件實驗四小籃子法測定呼吸強度2.稱取萌發(fā)的小麥種子15.00g，裝于小籃內(nèi)，然后將小藍掛于廣口瓶內(nèi)，同時加入25.0mlBa(OH)2溶液，立即塞緊瓶塞，并用融化的石蠟密封瓶口；每隔10分鐘，輕輕搖動廣口瓶。注意：勿讓小籃侵入溶液中?。。。。?！18PPT課件實驗四小籃子法測定呼吸強度2.稱取萌發(fā)的小麥種子15.實驗四小籃子法測定呼吸強度3.1h后，小心打開瓶塞，迅速取出小籃，加入2滴指示劑，立即重新塞緊瓶塞。然后拔出小橡皮塞，經(jīng)滴定管插入小孔中，用草酸滴定，直到藍綠色變成無色為止。記錄滴定所含用的草酸溶液的體積（ml）數(shù)。19PPT課件實驗四小籃子法測定呼吸強度3.1h后，小心打開瓶塞，迅實驗四小籃子法測定呼吸強度4.對照測定：材料為沸水煮死的種子，其余步驟同上；5.計算呼吸強度(CO2，mg/g.h)=(v1-v0)/{種子鮮重(g)×時間(h)}******本實驗應按照分析化學實驗的要求，對每個實驗步驟嚴格操作，才能有實驗結(jié)果！20PPT課件實驗四小籃子法測定呼吸強度4.對照測定：材料為沸水煮死實驗五蒽酮法測定可溶性糖【實驗原理】糖在濃硫酸作用下生成的糠醛或羥甲基糠醛與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的定量測定。由于反應液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖，因此，蒽酮法能測出溶液中全部可溶性碳水化合物總量。糖類與蒽酮反應生成的有色物質(zhì)在可見光區(qū)的吸收峰為620nm。21PPT課件實驗五蒽酮法測定可溶性糖【實驗原理】21PPT課件實驗五蒽酮法測定可溶性糖【實驗材料、試劑與儀器設(shè)備】（一）實驗材料任何植物鮮樣或干樣。（二）試劑

1.葡萄糖標準溶液（100μg/ml）：準確稱取100mg分析純無水葡萄糖，溶于蒸餾水并定容至100ml，使用時再稀釋10倍（100μg/mL）。22PPT課件實驗五蒽酮法測定可溶性糖【實驗材料、試劑與儀器設(shè)備】22P實驗五蒽酮法測定可溶性糖2．蒽酮試劑：稱取1.0g蒽酮，溶于80%濃硫酸（將98%濃硫酸稀釋，把濃硫酸緩緩加入到蒸餾水中）1000mL中，冷卻至室溫，貯于具塞棕色瓶內(nèi)，冰箱保存，可使用2～3周。（三）儀器設(shè)備分光光度計，分析天平，恒溫水浴，試管，三角瓶，移液管（5、1、0.5ml），剪刀，瓷盤，玻棒，水浴鍋，電爐，漏斗，濾紙,鑷子。23PPT課件實驗五蒽酮法測定可溶性糖2．蒽酮試劑實驗五蒽酮法測定可溶性糖【實驗步驟】

1樣品中可溶性糖的提取取新鮮植物葉片，摖凈表面污物，剪碎混勻，稱取新鮮樣品0.5～1.0g（或干樣粉末5～100mg），放入大試管中，加入15ml蒸餾水，在沸水浴中煮沸20min（為什么？），取出冷卻，過濾入100ml容量瓶中，用蒸餾水沖洗殘渣數(shù)次，定容至刻度。24PPT課件實驗五蒽酮法測定可溶性糖【實驗步驟】24PPT課件實驗五蒽酮法測定可溶性糖2標準曲線制作取6支大試管，從0~5分別編號，按下表加入各試劑?？瞻讓φ?5PPT課件實驗五蒽酮法測定可溶性糖2標準曲線制作取6支大試實驗五蒽酮法測定可溶性糖將各管快速搖動混勻后，在沸水浴中煮10min，取出冷卻，在620nm波長下，用空白調(diào)零測定光密度，以光密度為縱坐標，含葡萄糖量（μg）為橫坐標繪制標準曲線。26PPT課件實驗五蒽酮法測定可溶性糖將各管快速搖動混勻后，在沸水浴中煮27PPT課件27PPT課件實驗五蒽酮法測定可溶性糖3.樣品測定取待測樣品提取液1.0ml加蒽酮試劑5ml，同以上操作顯色測定光密度。重復3次。28PPT課件實驗五蒽酮法測定可溶性糖3.樣品測定取實驗五蒽酮法測定可溶性糖四、結(jié)果計算可溶性糖(μg/g)=(C×V1/V2)/W

式中：C——從標準曲線查得葡萄糖量，μg。

V1——樣品提取液總體積，ml。

V2——顯色時取樣品液量，ml。

W——樣品重（g）。29PPT課件實驗五蒽酮法測定可溶性糖四、結(jié)果計算29PPT課件實驗五蒽酮法測定可溶性糖【實驗報告】1、本法測定的可溶性糖包含哪些種類？提高試驗精確度要注意那些步驟？30PPT課件實驗五蒽酮法測定可溶性糖【實驗報告】30PPT課件實驗六丙二醛（MDA）的測定【實驗目的】熟悉測定MDA的常用方法；【實驗原理】植物遭遇逆境，丙二醛含量升高；丙二醛與硫代巴比妥酸（TBA）在酸性和高溫條件下呈紅色，在532nm處有吸收峰；加入低濃度的Fe3+，增加450nm的糖吸收；提取液C糖/（mmol/L）=11.71OD450提取液C醛/（μmol/L）=6.45OD532-0.560OD450

TBA與可溶性糖同樣能反應，在450nm處有吸收峰；31PPT課件實驗六丙二醛（MDA）的測定【實驗目的】熟悉測定MDA的常實驗六丙二醛（MDA）的測定實驗材料實驗步驟】MDA提?。喝∪~片1g，盡量剪碎，然后加入少量石英砂，2ml三氯乙酸（準確）；研