12種苯甲醛類化合物的結(jié)構(gòu)與其寒熱食性的關(guān)系

12種苯甲醛類化合物的結(jié)構(gòu)與其寒熱食性的關(guān)系

中醫(yī)藥效因素是中醫(yī)理論體系的重要組成部分。中醫(yī)熱效應(yīng)理論是中醫(yī)藥效應(yīng)理論的核心，對指導(dǎo)中醫(yī)的臨床應(yīng)用具有重要意義。除極少數(shù)單一成分為主的中藥外,大部分中藥都是由多種成分組成的混合物。它們的藥性很可能是由這些混合物中每個成分的藥性疊加而成。為了研究寒熱藥性與成分結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系,則需要分離中藥中的每個成分,并測定其含量。這樣將使成分結(jié)構(gòu)與寒熱藥性之間的研究變得特別復(fù)雜。如果從同類結(jié)構(gòu)化合物著手,則研究工作便于開展,而且構(gòu)效關(guān)系也容易獲取。傳統(tǒng)上中藥寒熱藥性是通過人體對臨床用藥的反應(yīng)總結(jié)獲得的。在中醫(yī)證本質(zhì)研究中用熱藥造熱證動物模型或寒藥造寒證模型的方法也可以用來評價(jià)藥物的寒熱屬性藥物、試劑和儀器CO苯甲醛、對羥基苯甲醛、2,4-二羥基苯甲醛、3,4-二羥基苯甲醛、3,4,5-三甲氧基苯甲醛、2,4,6-三甲氧基苯甲醛、間硝基苯甲醛、2-硝基苯甲醛、對氯苯甲醛、香草醛、鄰香草醛、異香草醛,均購自阿拉丁試劑公司,為分析純。HyClone改良型RPMI-1640培養(yǎng)液(賽默飛世爾生物化學(xué)制品北京有限公司),四季青無支原體胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司),二甲基亞砜(DMSO),磷酸緩沖液(PBS),MTT(Simga),0.25%胰蛋白酶(西安舟鼎國生物技術(shù)有限公司)。人肝癌細(xì)胞株HepG2,人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7均由空軍軍醫(yī)大學(xué)(第四軍醫(yī)大學(xué))提供。方法1.體外細(xì)胞密度檢測將HepG2細(xì)胞及MCF-7細(xì)胞消化于含有10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液(pH=7.0~7.4)中,在恒溫培養(yǎng)箱中37℃、5%CO分別取對數(shù)生長期HepG2細(xì)胞及MCF-7細(xì)胞,胰酶消化后調(diào)整細(xì)胞密度為5×104.統(tǒng)計(jì)方法化合物的寒性用MTT法分別考察了12種苯甲醛類化合物在一定濃度范圍內(nèi)對HepG2與MCF-7兩種細(xì)胞體外增殖的影響,結(jié)果見表1-表6。苯甲醛、對氯苯甲醛、2-硝基苯甲醛、間硝基苯甲醛在0.1~50μg/mL的濃度范圍內(nèi)對HepG2細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞的增殖都表現(xiàn)為抑制作用,對羥基苯甲醛、2,4-二羥基苯甲醛、3,4-二羥基苯甲醛、3,4,5-三甲氧基苯甲醛、2,4,6-三甲氧基苯甲醛、香草醛、鄰香草醛、異香草醛在0.1~50μg/mL的濃度范圍內(nèi)對HepG2細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞體外增殖的影響表現(xiàn)為低濃度促進(jìn),高濃度抑制,以抑制率對濃度作圖,所得曲線見圖1-圖2。從圖1-圖2中可以直觀地看到苯甲醛、對氯苯甲醛、2-硝基苯甲醛、間硝基苯甲醛對HepG2和MCF-7細(xì)胞體外增殖的抑制率在整個濃度范圍內(nèi)均為正值,說明這4種化合物在該濃度范圍內(nèi)均表現(xiàn)為抑制細(xì)胞生長,其抑制率與濃度變化趨勢大致相同,即隨著濃度的增大,抑制率逐漸增大,抑制作用增強(qiáng),因此說明這4種化合物為寒性。而對羥基苯甲醛、2,4-二羥基苯甲醛、3,4-二羥基苯甲醛、3,4,5-三甲氧基苯甲醛、2,4,6-三甲氧基苯甲醛、香草醛、鄰香草醛、異香草醛對HepG2和MCF-7細(xì)胞體外增殖的影響表現(xiàn)為在低濃度時抑制率為負(fù)值,隨著濃度的增大,抑制率轉(zhuǎn)為正值,且有濃度依賴關(guān)系,說明這8種化合物在低濃度時促進(jìn)細(xì)胞的生長增殖,而在高濃度時則抑制細(xì)胞的生長,故認(rèn)為它們?yōu)闊嵝浴Ｈ〈鸁嵝院蜔嵝员狙芯坑么饲氨菊n題組建立的細(xì)胞學(xué)方法評估了12種苯甲醛類化合物的寒熱藥性,總結(jié)了它們結(jié)構(gòu)與寒熱藥性之間的關(guān)系。結(jié)果顯示寒熱藥性是由化合物的結(jié)構(gòu)決定的。以苯甲醛為基本結(jié)構(gòu),它抑制細(xì)胞生長顯示寒性。吸電子的硝基和氯取代使其抑制作用更強(qiáng),寒性增強(qiáng)。取代位置對其寒性也有影響,間硝基取代比鄰硝基取代抑制作用強(qiáng),寒性更強(qiáng)。苯甲醛上羥基和甲氧基取代苯甲醛促進(jìn)細(xì)胞生長顯示熱性。羥基和甲氧基取代的位置和個數(shù)對于寒熱性影響很大。例如,3,4-二羥基苯甲醛比2,4-二羥基苯甲醛對細(xì)胞的促進(jìn)作用強(qiáng),熱性更強(qiáng);3,4,5-三甲氧基苯甲醛比2,4,6-三甲氧基苯甲醛熱性強(qiáng);異香草醛,香草醛和鄰香草醛熱性依次減弱。苯甲醛鄰位取代羥基或甲氧基,比非鄰位相應(yīng)的取代熱性弱。對于羥基和甲氧基取代的苯甲醛來說取代的位置比取代基的個數(shù)更重要。綜上所述,化合物的寒熱藥性取決于其結(jié)構(gòu)。1.儀器2.藥物和試劑3.dmso溶液的配制分別準(zhǔn)確稱取12種苯甲醛類化合物各5mg,溶于1mLDMSO中,超聲15min,使之充分溶解。逐級稀釋使藥物濃度分別為0