醋酸纖維薄膜課件

一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)醋酸纖維薄膜電泳的操作了解電泳技術(shù)的一般原理

一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)醋酸纖維薄膜電泳的操作二、實驗原理

任何一種物質(zhì)的質(zhì)點，由于其本身在溶液中的解離或由于其表面對其他帶電質(zhì)點的吸附，會在電場中向一定的電極移動。如氨基酸、蛋白質(zhì)、酶、核酸等及其衍生物質(zhì)都具有許多可解離的酸性或堿性基團(tuán)，它們在溶液中會解離而帶電。二、實驗原理

任何一種物質(zhì)的質(zhì)點，由于其本身在溶

一般在堿性溶液中（即溶液的pH值大于等電點pI），分子帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動。而在酸性溶液中，分子帶正電荷，在電場中向負(fù)極移動。移動的速度取決于帶電的多少和分子的大小。

泳動度不同質(zhì)點在同一電場中的泳動速度不同，常用泳動度或遷移率來表示。泳動度指帶電質(zhì)點在單位電場強(qiáng)度下的泳動速度。

vd/tdlu=——=—=—（cm2.V-1.S-1)EV/lVt泳動度不同質(zhì)點在同一電場中的泳動速度不同影響泳動度因素帶電質(zhì)點的性質(zhì)

質(zhì)點所帶凈電荷的量、質(zhì)點的大小及質(zhì)點的形狀。一般說來質(zhì)點所帶凈電荷越多，質(zhì)點直徑越小，越接近球形，則在電場中的泳動速度越快；反之則越慢。影響泳動度因素帶電質(zhì)點的性質(zhì)溶液的粘度電場強(qiáng)度溶液的pH值溶液的離子強(qiáng)度固體支持物的電滲現(xiàn)象溶液的粘度本實驗用醋酸纖維薄膜，是纖維素的羥基乙酸化所形成的纖維纖維素醋酸酯。具有泡沫狀的結(jié)構(gòu)，厚度均為120um，有很強(qiáng)的滲透性，對分子移動阻力很小。本實驗用醋酸纖維薄膜，是纖維素的羥基乙酸化所形成的纖維纖維素三、器材與試劑三、器材與試劑醋酸纖維薄膜

2*8cm

常壓電泳儀點樣器：用蓋玻片代替。培養(yǎng)皿玻璃板粗濾紙電泳槽巴比妥緩沖液：pH8.6，離子強(qiáng)度0.07

巴比妥2.76g,巴比妥鈉15.45g，加水至1000ml。每個大組500ml

醋酸纖維薄膜2*8cm染色液

每個大組200ml氨基黑10B0.25g,甲醇50ml,冰醋酸10ml,水40ml（可重復(fù)使用）漂洗液每個組100ml

含甲醇或乙醇45ml、冰醋酸5ml、水50ml透明液每個組200ml

含無水乙醇：冰醋酸＝7：3，本實驗不做定量不用配。染色液每個大組200ml醋酸纖維薄膜課件醋酸纖維薄膜課件四、操作方法四、操作方法1、薄膜準(zhǔn)備：用鑷子取醋酸薄膜一張，放在綏沖液中浸泡20分鐘。（識別光澤面與無光澤面，并在有光澤面一角做記號）2、制造濾紙橋：剪取雙層合適尺寸濾紙橋附在電泳槽支架上，使其一端與支架的前沿對齊，另一端浸入電極槽的緩沖液中，用緩沖液潤濕并驅(qū)趕氣泡，使濾紙緊貼在支架上。如圖1、薄膜準(zhǔn)備：用鑷子取醋酸薄膜一張，放在綏沖液中浸泡20分鐘醋酸纖維薄膜課件醋酸纖維薄膜課件3、點樣：取出膜條，用雙層濾紙吸干多余的液體，平鋪在玻璃板上，無光澤面朝上，用點樣器蘸取血清在膜條的一端1.5cm處，均勻劃一條線。4、電泳：在兩電極槽內(nèi)加入等高的緩沖液，將膜條平懸于濾紙橋上（點樣端靠近負(fù)極），蓋嚴(yán)電泳室通電，電壓120V，電流0.4-0.7mA/cm膜寬，電泳60分鐘。3、點樣：取出膜條，用雙層濾紙吸干多余的液體，平鋪在玻璃板上5、染色：電泳完畢后，取膜條放在染色液中浸泡10分鐘左右。6、漂洗：漂洗數(shù)次至無蛋白區(qū)底色脫凈為止，可得色帶清晰的圖譜。保存。7、透明：將干燥的電泳圖譜放入透明液中浸泡2-3分鐘后取出貼于潔凈的玻璃板上，干后放在兩層濾紙中保存。8、計算：計算出每條蛋白的泳動度。5、染色：電泳完畢后，取膜條放在染色液中浸泡10分鐘左右。醋酸纖維薄膜課件注意事項手盡量不要接觸膜條。用點樣器點樣時不要點的太多