流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用

流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用第1頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月FACSCalibur特點(diǎn)：光路調(diào)節(jié)系統(tǒng)固定自動(dòng)化程度高操作簡便使用壽命長配備1-2根激光主要用于細(xì)胞分析臨床型（臺式機(jī)）第2頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月BDLSR特點(diǎn)：配置三種激光器488/UV/633最多可檢測六種熒光和兩個(gè)側(cè)向參數(shù)可與下面FACSVantage連用.高效分選細(xì)胞第3頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月FACSVantageDiVa科研型（大型機(jī)）

BDBiosciences

特點(diǎn)：多數(shù)字化適用用各類細(xì)胞分選4路分選分選10,000cells/secondormore

第4頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月FACSAria科研型特點(diǎn)：分辨率高選配多種波長和類型激光器可把感興趣細(xì)胞分選到特定培養(yǎng)孔或板上（4路和24孔板）適用于高速分選和多色分析第5頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月常用的臨床型流式細(xì)胞儀主機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)第6頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展史1934年細(xì)胞在顯微鏡載物臺的毛細(xì)管中流過。1949年流動(dòng)的懸浮粒子計(jì)數(shù)方法—Coulter效應(yīng)。1967年發(fā)展了一種液流束、照明光軸、檢測系統(tǒng)三者垂直的流式細(xì)胞儀。80年代出現(xiàn)了完善的流式細(xì)胞儀。第7頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月顯微鏡的發(fā)展史?J.PaulRobinson第8頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月顯微鏡的發(fā)展史?J.PaulRobinson第9頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞術(shù)的奠基人LouHerzenberg-1969-sorterbasedonfluorescence(arclamp)builtafterworkingwithoneofKamentsky’sRCSsystemswheretheybuiltaninstrumenttheycalledtheFluorescenceActivatedCellSorter(FACS)第10頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月1970年的流式細(xì)胞儀Kamentsky-Bio/PhysicsSystems-1970commercialcytometer-the“Cytograph”He-Nelasersystemat633nmforscatter(andextinction)-supposedlythefirstcommercialinstrumentincorporatingalaser.ItcouldseparateliveanddeadcellsbyuptakeofTrypanblue.Afluorescenceversioncalledthe“Cytofluorograph”followedusinganaircooledargonlaserat488nmexcitation1970CytographpresentlyatthePurdueUniversityCytometryLaboratories第11頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月1975年的流式細(xì)胞儀CoulterElectronicsmanufacturedtheTPS-1(Twoparametersorter)in1975whichcouldmeasureforwardscatterandfluorescenceusinga35mWargonlaser.Photo?2000–J.P.Robinson第12頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月1977年的流式細(xì)胞儀1977-78developedtheEpicsseriesofinstrumentswhichwereessentially5wattargonionlaserinstruments,completewithamultiparameterdataanalysissystem,floppydriveandgraphicsprinter.Photo?2000–J.P.Robinson第13頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月Actin-Rhodamine-phalloidinAntibodytoT.cruzi-FITCDNA-DapiImagedusinganMRC1000ConfocalMicroscope,40x1.3NAFluor第14頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月Actin-Rhodamine-phalloidinAntibodytoT.cruzi-FITCDNA-DapiImagedusinganMRC1000ConfocalMicroscope,40x1.3NAFluor第15頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月Actin-Rhodamine-phalloidinAntibodytoT.cruzi-FITCDNA-DapiImagedusinganMRC1000ConfocalMicroscope,40x1.3NAFluor第16頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月Actin-Rhodamine-phalloidinAntibodytoT.cruzi-FITCDNA-DapiImagedusinganMRC1000ConfocalMicroscope,40x1.3NAFluor第17頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月Actin-Rhodamine-phalloidinAntibodytoT.cruzi-FITCDNA-DapiImagedusinganMRC1000ConfocalMicroscope,40x1.3NAFluor第18頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第19頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月

流式細(xì)胞儀概述

流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry,FCM）是一種自動(dòng)分析細(xì)胞的高技術(shù)，其原理是懸浮在液體中的分散細(xì)胞一個(gè)個(gè)地依次通過測量區(qū)，當(dāng)每一個(gè)細(xì)胞通過測量區(qū)時(shí)產(chǎn)生電信號，這些信號可以代表熒光、光散射，光吸收或細(xì)胞的阻抗等。這些信號可以被測量、存貯、顯示，于是細(xì)胞的一系列重要的物理特性和生化特性就被快速地、大量地測定。第20頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月

上述特性可以是細(xì)胞的大小、活性，核酸的數(shù)量、酶、抗原等等。儀器還可以根據(jù)所規(guī)定的參量把指定的細(xì)胞亞群從整個(gè)細(xì)胞群體中分選出來。流式細(xì)胞術(shù)在當(dāng)前的細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、血液學(xué)、遺傳學(xué)、病理學(xué)、臨床檢驗(yàn)學(xué)等各領(lǐng)域有著十分廣泛的用途。

流式細(xì)胞儀概述第21頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月

流式細(xì)胞術(shù)是對懸液中的細(xì)胞或細(xì)胞器進(jìn)行快速可達(dá)每秒鐘數(shù)千個(gè)乃至上萬個(gè)細(xì)胞。顯微鏡術(shù)可以研究組織的結(jié)構(gòu)、細(xì)胞定位和熒光在細(xì)胞中的分布。流式細(xì)胞術(shù)是一種零分辨率的儀器，它只能測量一個(gè)細(xì)胞的總核酸，總蛋白等，這是它的不足之處。流式細(xì)胞儀概述第22頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月FluorescenceMicroscopewith

ColorVideo(CCD) 35mmCamera第23頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月熒光顯微鏡的細(xì)胞熒光定量第24頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第25頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第26頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞儀概述現(xiàn)代熒光技術(shù)和多參數(shù)相關(guān)測量技術(shù)的發(fā)展，流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞群體或組成群體的亞群進(jìn)行定量分析時(shí)，具有其他手段無法比擬的優(yōu)越性。

第27頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)一.流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng);二.激光光源及光束成形系統(tǒng);三.光學(xué)系統(tǒng);四.信號檢測與存貯、顯示、分析系統(tǒng);五.細(xì)胞分選系統(tǒng)。第28頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞流動(dòng)室細(xì)胞流動(dòng)室是FCM的心臟，它是根據(jù)流體力學(xué)中的層流鞘液原理設(shè)計(jì)而成，其結(jié)構(gòu)包括石英小室形成的鞘液腔及插入其中的樣品管。細(xì)胞呈單個(gè)排列通過流動(dòng)室。FlowCellFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid第29頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞儀的液流系統(tǒng)示意圖第30頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月激光光源與光束形成系統(tǒng)激光(Laser,lightamplificationbystimulatedemissionofradiation)是一種相干光源，它能提供單一波長、高強(qiáng)度及穩(wěn)定性高的光照激光波長:488nm,635nm及UV第31頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月激光器常用激光器：氫離子激光器488nm蘭色激光氬離子激光器氪離子激光器第32頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月聚光系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)透鏡、小孔、多種濾片檢測器、放大器將光信號變成電脈沖信號第33頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月計(jì)算機(jī)信號變成數(shù)據(jù)文件存儲、分析。第34頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月

流式細(xì)胞儀的工作原理

待測細(xì)胞被制備成單個(gè)細(xì)胞的懸液，經(jīng)特異性熒光染料染色后放入樣品管中，在氣體的壓力下進(jìn)入流動(dòng)室。流動(dòng)室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的約束下，細(xì)胞排成單列由流動(dòng)室的噴嘴噴出，成為細(xì)胞液柱。液柱與入射的激光束垂直相交，相交點(diǎn)稱為測量區(qū)。第35頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞儀的工作原理

通過測量區(qū)的細(xì)胞被激發(fā)產(chǎn)生熒光。在與入射光束和液柱垂直的方向放置光學(xué)系統(tǒng)（透鏡、光闌、濾片和檢測器等）用以收集熒光信號。阻斷濾片用于阻擋激發(fā)光，二色性反射鏡用于選擇被測熒光波長，熒光檢測器是光電倍增管（PMT），散射光檢測器是光電二極管，用來收集前向角散射光（FSC）。第36頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞儀的原理第37頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月光學(xué)系統(tǒng)

FCM的光學(xué)系統(tǒng)是由若干組透鏡,濾波片,小孔組成第38頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月長通濾片第39頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月短通濾片第40頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月帶通濾片第41頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞儀的原理第42頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞儀的原理Signal第43頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月信號檢測與分析當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素標(biāo)記物,通過激光照射區(qū)時(shí),受激激發(fā),產(chǎn)生代表細(xì)胞內(nèi)不同物質(zhì)、不同波長的熒光信號,這些信號經(jīng)A/D轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號,送計(jì)算機(jī)進(jìn)行儲存、作圖、統(tǒng)計(jì)分析第44頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月激發(fā)光源與熒光標(biāo)記物第45頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月散射光信號前向角散射(FSC，F(xiàn)orwardScatter)：代表細(xì)胞體積的大小。側(cè)向角散射(SSC，SideScatter)：代表細(xì)胞內(nèi)的顆粒度。第46頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月熒光信號一種是細(xì)胞自身在激光照射下發(fā)出微弱的熒光信號，稱為細(xì)胞自發(fā)熒光另一種是經(jīng)過特異熒光素標(biāo)記細(xì)胞后，受激發(fā)射得到的熒光信號第47頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月自發(fā)熒光

用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞的特異性熒光染料的熒光時(shí)，這種自發(fā)熒光對所欲測定的特異性熒光是一種本底信號，自發(fā)熒光在多種情況下都會干擾特異性熒光信號，尤其是對低水平結(jié)合的熒光抗體它能減低染色的和未染色的細(xì)胞間的區(qū)別，使我們難以確定細(xì)胞中熒光信號的水平。第48頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月自發(fā)熒光的強(qiáng)弱與細(xì)胞的大小、細(xì)胞的類型、激發(fā)光的波長、發(fā)射光的檢測范圍等都有關(guān)系。產(chǎn)生自發(fā)熒光的分子可能是正常細(xì)胞的組成成分如核黃素、細(xì)胞色素等。這些成分在較大的細(xì)胞中含量較多，相應(yīng)的自發(fā)熒光也就強(qiáng)一些。自發(fā)熒光第49頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)的細(xì)胞中死細(xì)胞比活細(xì)胞的自發(fā)熒光要強(qiáng)，在某些細(xì)胞樣品如脾和骨髓中，除了含有淋巴細(xì)胞和其他低自發(fā)熒光的細(xì)胞外還可能會有一些占不同比例的亮細(xì)胞，它們會干擾用免疫熒光方法本應(yīng)能檢測出來的稀有的、細(xì)胞數(shù)目較少的亞群。

自發(fā)熒光第50頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月為減少自發(fā)熒光，應(yīng)選用較亮的熒光染料，還應(yīng)使用與熒光發(fā)射光譜相匹配的光學(xué)品質(zhì)優(yōu)良的濾片系統(tǒng)。利用較長波長的光線，如染料激光器的激光做為激發(fā)光源，也可減弱自發(fā)熒光。最后，對自發(fā)熒光還可用電子線路補(bǔ)償?shù)姆椒▽⒆园l(fā)熒光補(bǔ)償?shù)?。自發(fā)熒光第51頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月熒光信號線性測量和對數(shù)測量線性放大:即放大器的輸出與輸入是線性關(guān)系，細(xì)胞DNA含量、RNA含量、總蛋白質(zhì)含量等的測量一般選用線性放大測量對數(shù)放大:如果原來輸出是1，當(dāng)輸入增大到原來十倍時(shí)，輸出為2；當(dāng)輸入增大到原來一百倍時(shí)輸出為3等,通常使用在細(xì)胞膜表面抗原等的熒光檢測第52頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞分選（cellsorting）的工作原理

液滴形成信號的頻率約30KHz，此信號加在壓電晶體上使之產(chǎn)生同頻的機(jī)械振動(dòng)，流動(dòng)室也就隨之振動(dòng)。于是液柱斷裂成一連串均勻的液滴，其形成的速度為每秒3萬個(gè)。細(xì)胞通過噴嘴的速度大約每秒2000個(gè)以下，如以2000個(gè)計(jì)算則平均每15個(gè)液滴中有一個(gè)液滴包有細(xì)胞，而其他液滴無細(xì)胞。細(xì)胞的性質(zhì)是在進(jìn)入液滴以前已經(jīng)被測定了的。第53頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞分選（cellsorting）的工作原理

如果其特性與被選定要進(jìn)行分選的細(xì)胞特性相符，則儀器在這個(gè)被選定的細(xì)胞剛形成液滴時(shí)給整個(gè)液柱充以指定的電荷。這樣，當(dāng)被選定的細(xì)胞形成液滴時(shí)就帶有特定的電荷，未被選定的細(xì)胞形成的細(xì)胞液滴及不包含細(xì)胞的空白液滴不被充電，也不帶電荷。帶有電荷的液滴向下落入指定的收集器內(nèi)，從而完成了細(xì)胞分類收集的目的。第54頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞儀的分選原理第55頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月

流式細(xì)胞儀原理示意圖第56頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月FCM測量數(shù)據(jù)的存儲、顯示與分析數(shù)據(jù)存儲:listmode數(shù)據(jù)顯示:直方圖(DistributionHistogram)二維點(diǎn)圖(DotPlot)等高線圖(ContourPlot)密度圖(Density)等第57頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月直方圖第58頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月二維點(diǎn)圖第59頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月等高圖密度圖第60頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞的參量和熒光探針

流式細(xì)胞術(shù)能夠測量細(xì)胞的很多參量?？煞譃閮深悾阂活愂莾?nèi)部參量，指不用任何熒光探針標(biāo)記就可測量的細(xì)胞參量；另一類是外部參量，指需要外加熒光探針標(biāo)記的細(xì)胞參量。同時(shí)又可將細(xì)胞參量分為結(jié)構(gòu)參量和功能參量，結(jié)構(gòu)參量描述細(xì)胞的形態(tài)特征和化學(xué)組成，功能參量描述細(xì)胞的理化特征。這被稱為細(xì)胞參量的二維分類。第61頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月測量細(xì)胞的外部參量必須用熒光探針進(jìn)行標(biāo)記。熒光探針（熒光染料）是探測細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的非常靈敏的工具。細(xì)胞的參量和熒光探針第62頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月各種熒光標(biāo)記的抗體第63頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月常用的熒光素FITC異硫氰酸基熒光素488PE藻紅蛋白545PI碘化丙啶490EB溴化乙啶480AO丫啶橙490TRITC四甲基若丹明554TexasRed德州紅355第64頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月參數(shù)

結(jié)構(gòu)

功能

內(nèi)部

細(xì)胞大小、形狀，細(xì)胞質(zhì)的顆粒

氧化還原狀態(tài)

性，色素量，蛋白熒光

外部DNA量、堿基比例，染色體結(jié)構(gòu)膜的完整性，通透性，

酶RNA量，總蛋白，堿性蛋白

活性，內(nèi)吞性，表面電荷，

表面糖類。

細(xì)胞內(nèi)受體，DNA合成，

膜的流動(dòng)性或微粘度，細(xì)

胞質(zhì)/線粒體膜

電位，膜結(jié)合

的鈣離子，細(xì)胞內(nèi)PH細(xì)胞的內(nèi)部參量和外部參量第65頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞術(shù)的標(biāo)本制備流式細(xì)胞術(shù)的標(biāo)本必需制備成單細(xì)胞懸液。測定組織標(biāo)本需用酶消化成單細(xì)胞或機(jī)械制備。流式細(xì)胞術(shù)需用新鮮的標(biāo)本，未固定的組織。第66頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月免疫樣本制備儀第67頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月組織標(biāo)本機(jī)械制備單細(xì)胞懸液第68頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞周期與DNA倍體分析第69頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月基本術(shù)語（一）倍體性（Ploidy）：反映細(xì)胞內(nèi)染色體的數(shù)量單倍體（Haploid）：生殖細(xì)胞或配子中僅含有正常體細(xì)胞一半的染色體二倍體（Diploid）：正常的體細(xì)胞均是二倍體細(xì)胞高二倍體（Hyperdiploid）：高于正常的二倍體染色體低二倍體（Hypodiploid）：低于正常的二倍體染色體高二倍體和低二倍體有時(shí)又稱為異倍體或非整倍體（Aneuploid）第70頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月基本術(shù)語（二）DNA指數(shù)（DNAIndex，DI）：指所檢測細(xì)胞的DNA含量與正常二倍體細(xì)胞的DNA含量的比值變異系數(shù)（CoefficientofVariation，CV）：指G0/G1細(xì)胞DNA含量標(biāo)準(zhǔn)差的比值

第71頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞周期分析

一、細(xì)胞周期分析細(xì)胞周期分為DNA合成準(zhǔn)備期（G1）、DNA合成期（S期）、分裂準(zhǔn)備期（G2）以及分裂期（M期）。此外，如細(xì)胞停止增殖稱為靜止期（G0）期。由于DNA在各期中不同，可以確定G1/G0、S、G2/M各期的百分比。使用特定熒光染料如PI對細(xì)胞的DNA染色，用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞中DNA的含量。第72頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月溴脫氧脲嘧啶核苷替代胸腺嘧啶脫氧核苷參與DNA的合成，測定DNA的合成速率。異染性熒光染料AO，同染DNA、RNA識別G0/G1期。細(xì)胞周期分析第73頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞周期分析設(shè)一個(gè)指數(shù)生長的細(xì)胞群體全部細(xì)胞都處于增殖狀態(tài)，用細(xì)胞動(dòng)力學(xué)的語言說，就是增殖比是1。細(xì)胞群體經(jīng)染色后,由于每個(gè)細(xì)胞結(jié)合的染料與DNA含量成正比。由于G1期細(xì)胞的DNA含量為2C，G2和M期細(xì)胞DNA含量為4C，S期細(xì)胞的DNA含量在2C—4C之間。第74頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞周期分析從理論上說，這樣一個(gè)群體的DNA直方圖應(yīng)該是：即G1期細(xì)胞全體都在同一熒光道上63道，G2和M期細(xì)胞則位于2*63=126道處，S期細(xì)胞位于63—126道之間，由于DNA合成速率不是均一的，因而在這一段范圍內(nèi)不會是均勻分布。第75頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月典型的DNA直方圖G0-G1SG2-MFluorescenceIntensity#ofEvents第76頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月SideScatter腫瘤異倍體細(xì)胞正常二倍體乳腺癌異倍體細(xì)胞ForwardScatter第77頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月利用細(xì)胞倍體性檢測細(xì)胞凋亡凋亡細(xì)胞PI-Fluorescence#Events正常G0/G1細(xì)胞第78頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子第79頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月實(shí)驗(yàn)方法第80頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞表面標(biāo)記及抗原決定簇性質(zhì)第81頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞表面標(biāo)記及抗原決定簇性質(zhì)的研究流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞表面標(biāo)記，特別是腫瘤細(xì)胞表面標(biāo)記的研究中，以及在細(xì)胞分類和亞群的分析上，開始了一場細(xì)胞免疫學(xué)的革命。尤其在細(xì)胞表面標(biāo)記分析上，占有舉足輕重的地位。第82頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月CD34陽性細(xì)胞記數(shù)第83頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月血液系統(tǒng)細(xì)胞表面標(biāo)記的研究可用于白血病細(xì)胞的免疫分型和淋巴瘤的研究。細(xì)胞群體及細(xì)胞表面標(biāo)記變化的檢測可以發(fā)現(xiàn)體內(nèi)外細(xì)胞表型及細(xì)胞亞群的微小變化，有利于發(fā)現(xiàn)惡變的腫瘤細(xì)胞，或在免疫治療及宿主排異反應(yīng)中抗原決定簇發(fā)生改變的細(xì)胞群體。細(xì)胞表面標(biāo)記及抗原決定簇性質(zhì)的研究第84頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月各期血細(xì)胞抗原的表達(dá)第85頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月B淋巴細(xì)胞表面抗原表達(dá)順序第86頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月B淋巴細(xì)胞表面抗原表達(dá)順序第87頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月T淋巴細(xì)胞表面抗原表達(dá)順序第88頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月髓細(xì)胞表面抗原表達(dá)情況第89頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月淋巴細(xì)胞亞群分析第90頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月抗體組合CD45/CD14:用于設(shè)置淋巴細(xì)胞分析門（setlymphocytegate)免疫球蛋白對照抗體（IsotypeIgG）：用于設(shè)置陰性對照域值（setnegativethresholds）CD3/CD19：用于計(jì)數(shù)T和B淋巴細(xì)胞百分比或值CD3/CD4：用于計(jì)數(shù)CD4＋的T淋巴細(xì)胞CD3/CD8：用于計(jì)數(shù)CD8＋的T淋巴細(xì)胞CD3/CD16和/或CD56：用于計(jì)數(shù)NK細(xì)胞第91頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第92頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第93頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月正常骨髓細(xì)胞免疫表型第94頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第95頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月白血病/淋巴瘤免疫分型第96頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月白血病/淋巴瘤免疫分型的原則實(shí)際上并不存在對白血病和淋巴瘤特異性的抗原標(biāo)記，免疫分型采用的單克隆抗體均是正常細(xì)胞表面和/或細(xì)胞內(nèi)抗原的抗體區(qū)分正常細(xì)胞和白血病、淋巴瘤細(xì)胞是根據(jù)：（1）抗原表達(dá)強(qiáng)度的改變；（2）異?？乖谋磉_(dá)；（3）抗原表達(dá)與細(xì)胞分化程度不同步性第97頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性淋巴細(xì)胞性白血病第98頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性淋巴細(xì)胞性白血病，前體B淋巴細(xì)胞型第99頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月診斷：急性淋巴細(xì)胞性白血病，前體B淋巴細(xì)胞型（普通型）抗原表達(dá)特點(diǎn)：CD71,CD19,CD10,CD22,HLADR,CD34陽性kappa和lambda輕鏈陰性第100頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第101頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第102頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性淋巴細(xì)胞性白血病，T細(xì)胞型第103頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月診斷：急性淋巴細(xì)胞性白血病，T細(xì)胞型抗原表達(dá)特點(diǎn)：CD7,CD5,CD3,CD34,CD10陽性CD4,CD8部分陽性第104頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第105頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性淋巴細(xì)胞性白血病免疫表型特點(diǎn)第106頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性髓細(xì)胞性白血病第107頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性粒細(xì)胞性白血病第108頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月診斷：急性髓細(xì)胞性白血病，M1型抗原表達(dá)特點(diǎn)：HLADR,CD13,CD34,CD38強(qiáng)表達(dá)，CD33,CD71弱陽性CD7,CD11b部分陽性第109頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第110頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第111頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性髓細(xì)胞性白血病，M2型第112頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月診斷：急性髓細(xì)胞性白血病，M2型抗原表達(dá)特點(diǎn)：CD71,CD33,HLADR,CD7,CD38,CD13陽性CD11b,CD15部分陽性第113頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第114頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性早幼粒細(xì)胞白血病第115頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月診斷：急性早幼粒細(xì)胞白血病（M3）抗原表達(dá)特點(diǎn)：CD71,CD33,CD9,CD13,MPO陽性CD34,HLA-DR一般陰性第116頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第117頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第118頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第119頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性單核細(xì)胞白血病第120頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月診斷：急性單核細(xì)胞白血?。∕5）抗原表達(dá)特點(diǎn)：CD33,HLADR,CD4,CD64,CD11b和CD15陽性CD4可能是單核細(xì)胞分化最敏感的標(biāo)記，但缺乏特異性CD64也可以作為單核細(xì)胞分化的標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)明確區(qū)分M4和M5是很困難的，一定要結(jié)合細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查第121頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第122頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第123頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性紅白血病第124頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月診斷：急性髓細(xì)胞性白血?。∕6）抗原表達(dá)特點(diǎn)：CD33,CD71,CD34,CD38,CD13陽性CD15部分陽性CD71弱陽性可能是紅細(xì)胞碎片，需注意區(qū)分第125頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第126頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第127頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性巨核細(xì)胞性白血病第128頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月診斷：急性巨核細(xì)胞性白血?。∕7）抗原表達(dá)特點(diǎn)：CD33,CD71,CD34,CD61陽性CD45的表達(dá)情況多變，可以陰性，也可以強(qiáng)陽性；CD34和CD7的表達(dá)也多變，但HLA-DR一般不表達(dá)有時(shí)血小板粘附在白細(xì)胞上也可以出現(xiàn)CD61陽性，需注意與M7鑒別第129頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第130頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第131頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性混合細(xì)胞白血?。ㄋ杓?xì)胞系和T淋巴細(xì)胞系）第132頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第133頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第134頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月診斷：急性混合細(xì)胞白血病（髓細(xì)胞系和T淋巴細(xì)胞系）抗原表達(dá)特點(diǎn)：同時(shí)表達(dá)T淋巴細(xì)胞系抗原（CD7,CD4,CD10,CD34,CD3）和髓細(xì)胞系抗原（CD33,DR,CD34,CD15和MPO）第135頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第136頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第137頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性混合細(xì)胞白血?。˙前體細(xì)胞系和髓細(xì)胞系）第138頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第139頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第140頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月診斷：急性混合細(xì)胞白血?。˙前體細(xì)胞系和髓細(xì)胞系）抗原表達(dá)特點(diǎn)：同時(shí)表達(dá)B前體細(xì)胞抗原（CD34,HLADR,CD19,CD10）和髓細(xì)胞抗原（CD33,CD13,CD117）第141頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第142頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第143頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第144頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第145頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第146頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月急性髓細(xì)胞性白血病免疫表型特點(diǎn)第147頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月淋巴瘤免疫分型第148頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月慢性淋巴細(xì)胞性白血病第149頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月診斷：慢性淋巴細(xì)胞性白血病（CLL）抗原表達(dá)特點(diǎn)：CD19,CD22,CD5,lambda,CD23陽性；CD20弱陽性第150頁，課件共177頁，創(chuàng)作于2023年2月第151頁，課件共177頁，