SDS-PAGE分離膠-濃縮膠配方

SDS分離膠-濃縮膠配方

-1、-:聚丙烯酰***凝膠電泳2、:丙烯酰***;配膠時(shí)用30%質(zhì)量比:=29:13、:甲叉雙丙烯酰***4、:超輕水5、:十二烷基硫酸磺酸鈉,陰離子去污劑配膠時(shí)用10%6、:過(guò)硫酸銨424配膠時(shí)用10%7、:四***乙二***,促凝劑8、-:3羥基氨基甲烷鹽酸緩沖液,配膠時(shí)分別膠=,濃縮膠=9、:二硫蘇糖醇,也經(jīng)常被用于蛋白質(zhì)中二硫鍵的還原,可用于阻擋蛋白質(zhì)中的半胱氨酸之間所形成的蛋白質(zhì)分子內(nèi)或分子間二硫鍵。

10、:碘乙酰***,碘代乙酰***用于有機(jī)合成,在蛋白組學(xué)中組氨酸和半胱氨酸的烷基化試劑,用于多肽測(cè)序以及酶抑制劑等,蛋白組學(xué)級(jí)試劑。

22,是和碘乙酸一樣,可通過(guò)下列反應(yīng)不行逆地抑制酶類的物質(zhì)。

5酣2030祝4506%%-,^%過(guò)謙酸霰501015**%%^15-￡.^194,-5^■￡**%2$=￡--3751001^5^**%*甌1123344-6376.9%-%^依據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度,再根據(jù)下面的表格配制-的分別膠即下層膠:時(shí)爭(zhēng)尸。

山加血血-^1勺鈾12^*4*嚀嗎叩叩1廳□『5::—、蛋白質(zhì)相內(nèi)分子重范圉:1^104話用的凝膠總濃度:2肥宀3謝二、蛋白質(zhì)相對(duì)分子里范圉:岡『71臚適用的凝膠總濃度:1弭宀2宓三、蛋白質(zhì)相對(duì)分子里范圍;加適用的凝臉總濃度:1吩一巧聰四蛋白質(zhì)相對(duì)分子重范圉:1和滬予材適用的凝臉總濃度;刖卄10%五、蛋白質(zhì)相對(duì)分子重范圉:^10^適用的凝膠總濃度:2^3%-分別膠濃度最佳分別范圍6%膠50-1508%膠30-9010%膠20-8012%膠12-6015%膠10-40成安排制不同體積-分別膠所需各成分的體積毫升6%%-29:,%%-分別膠所需各成分的體積毫升8%%-29:1,%%-分別膠所需各成分的體積毫升10%%-29:1,%%-分別膠所需各成分的體積毫升12%%-29:1,%%-分別膠所需各成分的體積毫升15%%-29:1,%%:假如配制非變性膠,參考上述配方,不加10%即可配制成非變性膠。

1根據(jù)如下表格配制-的濃縮膠也稱積累膠、積層膠或上層膠:成安排制不同體積-濃縮膠所需各成分的體積毫升5%%-29:1,%%:1抗體去除液每50抗體去除液中含:%10-!*陰機(jī)瞬膠硝戰(zhàn)纖堆索濾膜0峯扎性捲片3企:按■3濾紙陽(yáng)極爭(zhēng)孔性華片-電泳的基本原理:-聚丙烯酰***凝膠電泳,是在聚丙烯酰***凝膠系統(tǒng)中引進(jìn)十二烷基硫酸鈉,會(huì)與變性的多肽,并使蛋白帶負(fù)電荷,由于多肽結(jié)合的量幾乎總是與多肽的分子量成正比而與其序列無(wú)關(guān),因此多肽復(fù)合物在丙稀酰***凝膠電泳中的遷移率只與多肽的大小有關(guān),在達(dá)到飽和的狀態(tài)下,。

當(dāng)分子量在15到200之間時(shí),蛋白質(zhì)的遷移率和分子量的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系,符合下式:=-,式中:為分子量,為遷移率,、均為常數(shù),若將已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的遷移率對(duì)分子量對(duì)數(shù)作圖,可獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,未知蛋白質(zhì)在相同條件下進(jìn)行電泳,依據(jù)它的電泳遷移率即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得分子量。

聚丙烯酰***的作用:丙烯酰***與為蛋白質(zhì)電泳供應(yīng)載體,其凝固的好壞直接關(guān)系到電泳勝利與否,與促凝劑及環(huán)境親密相關(guān);制膠緩沖液:,,選擇—系統(tǒng),詳細(xì)作用后面介紹;與:促凝作用,加速聚丙烯酰***的凝固;中含有29的丙烯酰***和1的甲叉基聚丙烯酰***,能產(chǎn)生自由氧基,使丙烯酰