檢測方法驗證和確認程序范文

檢測方法驗證和確認程序目標PURPOSE

本規(guī)程要求了XXXXXXX藥業(yè)有限企業(yè)檢測方法驗證和確認程序、格式和要求。范圍SCOPE本規(guī)程適適用于XXXXXXXX藥業(yè)有限企業(yè)QC試驗室檢測方法確實認。本規(guī)程適適用于美國藥典/國家處方集、歐洲藥典或其它藥典中記載檢測方法，和來自于企業(yè)內(nèi)部或外部已經(jīng)驗證檢測方法。本規(guī)程重視在判別、純度和含量檢測方法。本規(guī)程將作為2.3提及檢測方法驗證常規(guī)指導(dǎo)，也適適用于最常見檢測方法驗證，如：判別測試關(guān)于物質(zhì)和降解產(chǎn)物含量定量測試?？刂脐P(guān)于物質(zhì)和降解產(chǎn)物程度測試。原料藥、起始物料、中間體及其它物料含量測定。微生物和生物檢測方法不在本規(guī)程范圍內(nèi)。參考REFERENCEICHQ2(R1)分析方法驗證文本及方法學(xué)現(xiàn)行美國藥典<1225>藥典方法驗證現(xiàn)行美國藥典<1226>藥典方法確實認ICHQ7原料藥良好質(zhì)量管理規(guī)范（11月）FDA行業(yè)指南“分析方法和方法驗證”（8月）職責RESPONSIBILITIESQC責任人或指定人員負責參加本規(guī)程起草、審閱、修訂和更新。QA責任人或指定人員負責本規(guī)程審核和確保其被正確地、準確地執(zhí)行。QC負責市售產(chǎn)品檢測方法驗證，確認這些方法在實際條件下適適用于本試驗室測試。QC責任人或指定人員負責審核確認方案和確認匯報QC負責正確地統(tǒng)計試驗數(shù)據(jù)。QC負責歸納數(shù)據(jù)、撰寫匯報并遞交給QC責任人或指定人員審閱。QC、QA責任人或其指定人員負責審核并審計全部試驗室相關(guān)文件及規(guī)程以確保其準確和有效。質(zhì)量部負責同意本規(guī)程及驗證、確認方案和驗證、確認匯報。定義DEFINITION檢測方法使用者

使用檢測方法部門、試驗室或人員。系統(tǒng)適用性

它是用來驗證系統(tǒng)能滿足預(yù)期分析測試。當適用時，系統(tǒng)適用性應(yīng)在方法用于檢測或分析樣品之前執(zhí)行。指定數(shù)據(jù)，比如響應(yīng)值和保留時間相對標準偏差（RSD）、拖尾因子、分離度和理論塔板等，將從重復(fù)進樣得到。檢測方法

指進行檢測方式，應(yīng)詳細描述進行每個檢測試驗所必須步驟。它能夠包含：試劑、對照品及樣品溶液配制，儀器參數(shù)、標準曲線繪制、計算公式利用、可接收標準等。檢測方法驗證

為了證實所使用檢測方法（新或改進過）與其預(yù)期目標相適應(yīng)而進行一系列試驗。對照品和樣品溶液穩(wěn)定性

用來評價對照品和供試品穩(wěn)定性而進行檢測。原料藥

任何用于藥品生產(chǎn)物質(zhì)或混合物，并在藥品生產(chǎn)過程中成為藥品活性成份。這類物質(zhì)提供藥品活性或其它直接效應(yīng)應(yīng)用于診療、治療、緩解、處理或預(yù)防疾病、或影響身體機結(jié)構(gòu)或功效。判別測試

判別試驗意在確認樣品中一個被測物特征。通常將樣品性質(zhì)（如光譜、色譜行為、化學(xué)反應(yīng)等）與參比對照品性質(zhì)進行比對。雜質(zhì)檢驗

指樣品中雜貨定量檢測或程度檢測，兩種檢測均是為了準確反應(yīng)樣品純度。定量試驗所需驗證項目與程度試驗相比是不一樣。含量測定

指測定樣品中被分析物含量。專屬性

指在可能存在一些干擾組分（如雜質(zhì)、降解物、基質(zhì)等）時，對被分析物準確可靠測定能力。精密度

指在要求條件下對均質(zhì)樣品數(shù)次取樣進行一系列檢測，檢測結(jié)果靠近程度（離散程度）。重復(fù)性

指在一樣操作條件下，較短時間間隔內(nèi)精密度。中間精密度

指試驗室內(nèi)部條件改變，如：不一樣日期、不一樣分析者、不一樣儀器等情況下精密度。重現(xiàn)性

指不一樣試驗室之間精密度（合作研究，通常見于方法學(xué)標準化）。檢測限（LOD）

指樣品中被分析物能夠被檢測到最低量，但無須要準確定量。定量限（LOQ）

指在適當準確性和精密度下，能夠定量測定樣品中被分析物最低量。線性

指在給定范圍內(nèi)檢測結(jié)果與樣品中被分析物濃度（量）成百分比關(guān)系能力。準確度

指真實值或認可參考值與測量值之間相近程度。準確度有時也稱真實度。范圍

指樣品中被分析物濃度（量）上限和濃度（量）下限之間一個區(qū)間，并已證實在此區(qū)間內(nèi)，該檢測方法具備適當精密度、準確性和線性。耐用性

指在試驗參數(shù)被有意地發(fā)生細小改變時，檢測不受影響能力，用以說明所驗證方法在正常使用時可靠性。加標

向標準品、樣品或空白劑中加入已知量已知物質(zhì)，用于確定檢測方法性能或進行儀器校驗。響應(yīng)因子

分析物產(chǎn)生信號與產(chǎn)生該信號分析物量比值。可接收標準

測試結(jié)果可接收數(shù)值程度、范圍或其它適宜度量標準。相關(guān)系數(shù)（R）

研究變量之間\o"線性相關(guān)"線性相關(guān)程度量。信噪比（S/N）糾正與預(yù)防方法（CAPA）程序RROCEDURE檢測方法使用者應(yīng)該經(jīng)過培訓(xùn)，具備對應(yīng)經(jīng)驗和知識，以了解檢測方法并能夠執(zhí)行它。確認應(yīng)該由使用者執(zhí)行，其結(jié)果將為檢測方法能像預(yù)期那樣地執(zhí)行增加信心。檢測方法確認和驗證目標是說明該方法適適用于其確定用途，它包含試驗過程中計劃、系統(tǒng)和統(tǒng)計數(shù)據(jù)，以證實方法能滿足其確定分析用途要求。于藥典檢測方法，假如確認不成功，而且經(jīng)藥典人員幫助也未能處理問題，則可斷定此方法不適合在該試驗室用于該樣品。然后，可能有必要按照藥典或相關(guān)法規(guī)開發(fā)和驗證一個代替方法。確認要求應(yīng)該基于方法復(fù)雜性和應(yīng)用此法物質(zhì)復(fù)雜性兩方面來進行評定。只有那些適合特定方法確實認特征才需要做評定。確認程序程度與層次取決于使用者培訓(xùn)經(jīng)歷及經(jīng)驗水平、方法種類和與其相關(guān)設(shè)備/儀器、詳細方法步驟、和/或被測物質(zhì)。除非有跡象表明基本藥典方法不適合檢測該樣品，日常執(zhí)行基本藥典檢測方法無需確認?；舅幍錂z測方法例子包含但不限于，干燥失重、熾灼殘渣、多個濕化學(xué)方法比如酸度、簡單儀器方法比如pH值測定等。檢測方法驗證進行程度應(yīng)能反應(yīng)檢測目標和生產(chǎn)工藝所處階段。非藥典檢測方法建立和現(xiàn)行方法改變必須進行驗證。SOP-QC-025/A01顯示了檢測方法驗證流程。在檢測臨床試驗批次樣品時，即使檢測方法可能還未驗證，但檢測方法須具備科學(xué)性。并應(yīng)顯示檢測方法適用性。應(yīng)提供驗證結(jié)果表格概要（比如：專屬性、線性、范圍、準確度、精密度、LOD和LOQ結(jié)果或數(shù)值）。此時不需要提供完整驗證匯報，可在放行檢測同時進行分析方法驗證。檢測方法確認和驗證方案在確認或驗證工作開展前需有已經(jīng)同意確實認或驗證方案。方案內(nèi)容應(yīng)包含但不限于以下項目：目標PURPOSE

應(yīng)包含：背景介紹和方法描述。范圍SCOPE參考REFERENE職責RESPONSIBILITIES定義DEFINITION方法學(xué)METHODOLOGY

程序部分應(yīng)列出確認特征。偏差DEVIATION附件ATTACHMENTS修訂歷史DOCUMENTREVISEHISTORY確認和驗證中全部原始統(tǒng)計和得到結(jié)果必須統(tǒng)計在執(zhí)行方案或已編號檢測統(tǒng)計本上，以方便與其它文件相互查詢。確認和驗證過程中若有偏差，需按偏差處理相關(guān)規(guī)程和調(diào)查方法相關(guān)規(guī)程執(zhí)行。檢測方法依照改變需決定是否要進行再次驗證，再次驗證也需依據(jù)本SOP執(zhí)行，包含方案和匯報同意。以下改變情況需進行再次驗證：相關(guān)指南改變，比如：ICH或藥典原料藥合成工藝改變檢測方法和/或設(shè)備改變檢測方法確認和驗證匯報TestMethodValidationandverificationReport確認和驗證方案完成后必須準備對應(yīng)方法確認和驗證匯報，并由質(zhì)量部同意生效。推薦方法驗證匯報中能夠包含以下內(nèi)容：總結(jié)SUMMARYOFRESULTS目標PURPOSE范圍SCOPE物料和設(shè)備MATERIALANDEQUIPMENT方法METHOD結(jié)果和討論RESULTSANDDISCUSSIONS

結(jié)果部分應(yīng)包含驗證項目、可接收標準和結(jié)果等。偏差DEVIATION

任何偏差均應(yīng)進行調(diào)查和匯報。結(jié)論CONCLUSTION提議RECOMMENDATIONS參考REFERENCE附件ATTACHMENTS

能夠包含全部參加人員資格或培訓(xùn)統(tǒng)計、儀器校驗證書、試劑檢驗匯報單、試驗統(tǒng)計，原始數(shù)據(jù)、圖譜和結(jié)果一覽表等。修訂歷史DOCUMENTREVISEHISTORY檢驗方法確認需確認特征

通常所要求確實認特征包含但不限于下表中提及。表1：進行檢測方法確認要求確認特征特征

Characteristics分析方法類型

Typeofanalyticalprocedures判別

Identification雜質(zhì)檢測

Testingforimpurities含量分析

Assay定量檢測

Quantitativetest程度檢測

Limittest含量/效價

Content/Potency準確度

Accuracy--②--②專屬性

Specificity①+-②-②-②重復(fù)性

Repeatability--②-+中間精密度

Intermediateprecision-+-+檢測限

LOD+-②+-定量限

LOQ--②--系統(tǒng)適用性

Systemsuitability--②-②-②注：-表明通常不需評定特征+表明通常需評定特征缺乏該項目標分析方法，應(yīng)由其它分析方法來補充表明有些情況下需要檢測方法驗證需驗證特征驗證程度取決于對應(yīng)驗證方案中要求檢測性質(zhì)及其用途。檢測方法驗證常見驗證特征包含但不限于表2內(nèi)容。表2：檢測方法驗證所需驗證特征特征Characteristics檢測方法類型

Typeoftestmethods判別Identification關(guān)于物質(zhì)和降解物測試Testingforrelatedcompoundsanddegradants含量（僅限測試）·Assay(measurementonly)定量測試Quantitativetest程度測試Limittests專屬性①

Specificity++++線性

Linearity-+-+范圍Range-+-+準確度Accuracy-+-+精密度Precision重復(fù)性Repeatability-+-+中間精密度Intermediateprecision-+②-+②重現(xiàn)性Reproducibility--③--③檢測限

LOD--③+-定量限

LOQ-+--耐用性

Robustness-③+④-+④系統(tǒng)適用性（如有）

SystemsSuitability(ifany)++++注：-表示該特征通常不需評定+表示該特征通常需評定①當一個檢測方法不能滿足專屬性要求時，可由其它輔助檢測方法作補充。②假如已經(jīng)評價了重現(xiàn)性，就不需要再評價中間精密度。③基于檢測性質(zhì)可能需要。④依據(jù)所研究方法類型，在開發(fā)階段考慮評定耐用性。下述6.8~6.17對詳細驗證特征進行逐一描述，以對每一個檢測方法各種驗證特征提供指導(dǎo)和/或提議。專屬性

用于證實專屬性方式取決與檢測方法預(yù)期目標。通常一個檢測方法不太可能對某一特定被分析物具備專屬性（完全分辨）。在這種情況下，推薦使用兩種或多個檢測方法組合以達成所需分辨程度。判別專屬性試驗適宜判別測試應(yīng)能區(qū)分出可能存在結(jié)構(gòu)相同化合物。經(jīng)過對從含有被分析物樣品中得到正結(jié)果（能夠經(jīng)過與已知參比物比較），和對不含被分析物樣品中得到負結(jié)果來證實方法分辨能力。對與分析物結(jié)構(gòu)相同或相近物質(zhì)進行判別試驗，證實沒有得到正響應(yīng)。含量和雜質(zhì)檢驗專屬性試驗可取得關(guān)于物質(zhì)和降解物對含量測定來說，專屬性應(yīng)能分辨被分析物與關(guān)于物質(zhì)和降解產(chǎn)物。實際操作中能夠在純物質(zhì)中加入適當量關(guān)于物質(zhì)和降解物，與未加關(guān)于物質(zhì)和降解物樣品測定結(jié)果相比較，以證實其含量測定結(jié)果不受這些物質(zhì)影響。對關(guān)于物質(zhì)測試，能夠向原料藥中加入含有適當量關(guān)于物質(zhì)，經(jīng)過證實這些關(guān)于物質(zhì)之間能相互分離，并也能與樣品基質(zhì)中其它組分分離，以此來證實測試方法分辨能力。無法取得關(guān)于物質(zhì)和降解物假如關(guān)于物質(zhì)或降解物對照品不能得到，專屬性能夠經(jīng)過將含一定量關(guān)于物質(zhì)或降解產(chǎn)物樣品測定結(jié)果與另一個成熟方法測定結(jié)果比較，比如與藥典方法或已經(jīng)驗證其它方法（獨立方法）進行比較。必要時，應(yīng)包含對強力破壞試驗條件下（即光、熱、濕度、酸/堿破壞及氧化條件下）取得樣品測定。對于含量，需要比較兩種方法結(jié)果；對于雜質(zhì)檢驗，需要比較雜質(zhì)概況。峰純度試驗對顯示被測物色譜峰是單個還是多個成份是很有用（如二極管陣列）。對色譜方法，應(yīng)用經(jīng)典色譜圖來證實專屬性，并在圖上恰當?shù)貥顺雒恳粋€成份。其它分離技術(shù)也應(yīng)有類似考慮。在色譜方法中，應(yīng)在一定程度上考查臨界分離。對臨界分離，可用兩個洗脫程度最靠近化合物分離度來證實其專屬性。線性Linearity

測試線性目標是為了證實整個分析系統(tǒng)（包含檢測器和數(shù)據(jù)采集）有線性響應(yīng)和/或在對應(yīng)分析物濃度范圍內(nèi)直接成正比。線性關(guān)系是在檢測方法范圍內(nèi)（見第6.10節(jié)）對方法進行評價?？捎盟嶙h檢測方法，直接對原料藥（用標準貯備溶液稀釋）進行測定，以證實其線性。

對于低濃度溶液，可經(jīng)過稀釋貯備液配制。線性應(yīng)經(jīng)過目測一組信號與被分析物濃度或含量做圖關(guān)系來評價。假如有線性關(guān)系，可用適當統(tǒng)計方法對測試結(jié)果進行評定，如用最小二乘法計算回歸線。由線性回歸估算所測得數(shù)據(jù)本身有利于數(shù)學(xué)評價線性程度。一些檢測方法不論經(jīng)過何種轉(zhuǎn)換都不顯示線性。在這種情況下，分析響應(yīng)值應(yīng)用樣品中被分析物濃度（含量）適當函數(shù)來表示。應(yīng)提交回歸線相關(guān)系數(shù)、y軸上截距、回歸線斜率。還應(yīng)提交數(shù)據(jù)圖表。也可包含其它統(tǒng)計參數(shù)。另外，分析真值與回歸線偏差也有利于對線性作評價。為建立線性，提議最少用5個濃度。若用其它方法則應(yīng)證實其合理性。范圍特定范圍通常是從線性研究中得到，并由檢測方法期望應(yīng)用目決定。范圍是經(jīng)過檢測方法在指定范圍內(nèi)或在范圍極限時都達成可接收程度準確性、精密度來建立。應(yīng)考慮以下最小要求范圍：對原料藥含量測定：通常最少應(yīng)涵蓋測試濃度80%~120%內(nèi)；對于關(guān)于物質(zhì)測定：應(yīng)最少涵蓋關(guān)于物質(zhì)匯報限至標準120%。對已知有異常功效、有毒或有意外藥理作用關(guān)于物質(zhì)，其檢測限和定量限應(yīng)與該關(guān)于物質(zhì)必須被控制水平相對應(yīng)。

在研制階段進行雜質(zhì)檢驗方法驗證時，有必要依照提議（可能）程度來考慮范圍。假如用一個試驗同時進行含量測定和純度檢驗，且僅使用100%標準，線性范圍應(yīng)最少涵蓋從雜質(zhì)匯報水平至含量標準120%。準確度

應(yīng)在檢測方法要求范圍內(nèi)建立準確度。原料藥含量DrugSubstanceAssay

有多個方法可用于測定準確度：用該檢測方法去測定已知純度被分析物（比如：標準物質(zhì)）；將提議采取檢測方法結(jié)果與另一個成熟、準確度已經(jīng)確定和/或定義了檢測方法（獨立方法）結(jié)果相比較；準確度能夠在精密度、線性和專屬性建立后，推論而得。關(guān)于物質(zhì)（定量）準確度應(yīng)經(jīng)過分析加入了已知量關(guān)于物質(zhì)樣品方式來評價。在不能取得某種關(guān)于物質(zhì)和（或）降解產(chǎn)物樣品情況下，能夠考慮與另一個獨立方法測得結(jié)果相比較。應(yīng)明確單個或總關(guān)于物質(zhì)是怎樣測定，比如：在任何情況下，可用與主要被分析物所占重量百分比或面積百分比。提議數(shù)據(jù)準確度評價應(yīng)最少涵蓋所要求線性范圍3種濃度水平、不少于9次測定（比如：按完整檢測步驟對3種濃度分別測定3次）。加入已知量原料藥或關(guān)于物質(zhì)：回收率應(yīng)匯報百分回收率（與已知加入量結(jié)果進行比較）。用檢測方法分析已知純度樣品（標準物質(zhì)）：回收率應(yīng)匯報測得平均值與可接收真實值之間差異及其置信區(qū)間。將檢測方法與另一個已良好定性方法（參考方法）進行比較：回收率應(yīng)匯報測得平均值與用參考方法測得結(jié)果之間差異及其置信區(qū)間。精密度Precision

精密度包含重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。重復(fù)性Repeatability最少測試6份100%濃度樣品溶液或9份覆蓋方法要求范圍樣品溶液。推薦使用真實樣品，并對每個重復(fù)分析進行完全測試?？捎糜写硇詷悠愤M行含量重復(fù)性測試。假如是關(guān)于物質(zhì)測試，僅在無法得到含某種關(guān)于物質(zhì)樣品時可向樣品中加入關(guān)于物質(zhì)?；蛘?，可使用強制降解樣品或未加樣原料藥樣品。中間精密度應(yīng)確定隨機事件對檢測方法精密度影響。影響原因通常指不一樣日期、不一樣分析員、不一樣設(shè)備等，這些原因不需要進行單獨評定。中間精密度可在影響原因改變時重復(fù)測試得到。不需要單獨考慮這些影響。（比如：可經(jīng)過2名分析員在不一樣日期或用不一樣設(shè)備重復(fù)重復(fù)性或線性或準確度試驗，以得到精密度）。重現(xiàn)性

重現(xiàn)性經(jīng)過在不一樣試驗室間進行測試平均值進行評定。提議數(shù)據(jù)

在研究每一個精密度時，都應(yīng)匯報標準偏差、相對標準偏差（變異系數(shù)）和置信區(qū)間。檢測限和定量限檢測限測定是經(jīng)過對一系列已知濃度分析物樣品進行分析，并以能可靠地測得被分析物最小量來建立。定量限測定通常經(jīng)過對一系列含有已知濃度被分析物樣品分析，在準確度和精密度都符合要求情況下，來確定被分析物能被定量測得最小量。依照信噪比（S/N）測定該方法僅適適用于出現(xiàn)基線噪音檢測方法，比如色譜法。信噪比測定是經(jīng)過比較含有已知低濃度被分析物樣品與空白樣品測定信號，來建立檢測限和定量限。對于估量LOD，信噪比在3：1或2：1之間通常是可接收；對于估量LOQ，經(jīng)典信噪比為10：1。依照響應(yīng)值標準差和斜率該方法適適用于滴定、紫外和原子吸收光譜法等。檢測限和定量限判定方法以下：LOD=3.3σ/S

LOQ=10σ/S以上公式中，σ是響應(yīng)值標準差，S是校正曲線斜率。

斜率S可從被分析物校正曲線來估算，σ值可用下面方法估算：基于空白標準差，經(jīng)過分析適當數(shù)量空白樣品，然后計算其響應(yīng)值標準差，測出分析背景響應(yīng)值大小?；谛Ｕ€，研究含有檢測限或定量限范圍內(nèi)被分析物樣品以得到特定標準曲線，回歸線剩下標準差或回歸線y軸截距標準偏差都可作為標準偏差。提議數(shù)據(jù)必須提供檢測限/定量限和測定檢測限/定量限方法。假如檢測限是依照信噪比得來，應(yīng)提供相關(guān)色譜圖作為證實。假如是經(jīng)過計算或外推法得到檢測限估算值，可對一系列靠近或等于檢測程度樣品逐一檢測來論證這一估算值?？山?jīng)過分析適當數(shù)量，已知濃度靠近或等于定量限樣品來證實定量限。耐用性

需測試此參數(shù)方法包含含量和純度。依據(jù)所研究檢測方法類型，應(yīng)在開發(fā)檢測方法階段評定耐用性。與所描述方法比較，以一系列變動條件來分析對應(yīng)溶液進行評定。經(jīng)過分析一系列被處理過試液來評定。耐用性評定結(jié)果應(yīng)是建立一系列系統(tǒng)適用性參數(shù)（如分離度試驗），以確保在任何時候使用該檢測方法都是有效。應(yīng)展示經(jīng)典圖譜。對于液相色譜，經(jīng)典變量是流動相pH、溫度和流速、流動相組成、不一樣批號或不一樣供給商色譜柱等。對于氣相色譜，經(jīng)典變量是不一樣批號或不一樣供給商色譜柱、溫度和流速。假如樣品制備時需過濾，應(yīng)證實過濾前后樣品一致性。假如樣品需要超聲和/或混合時，應(yīng)評定樣品制備時超聲和/或混合時間。當溶液放置時間超出二十四小時或指定時間時，應(yīng)評定檢測方法分析物溶液穩(wěn)定性。穩(wěn)定性指示性質(zhì)在對穩(wěn)定性指示方法進行驗證時應(yīng)評定穩(wěn)定性指示方法（強制降解），應(yīng)包含表3中列出空白劑、活性成份和配方顆粒強迫降解條件。表3：穩(wěn)定性指示分析強降解條件處理

Treatment極端強降解條件

Extremestressedcondition酸

Acid樣品/2NHCl，回流4小時

Sample/2NHCl,reflux4hours堿

Base樣品/2NNaOH，回流4小時

Sample/2NNaOH,reflux4hours氧化劑

Oxidative樣品/3%H2O2/室溫，二十四小時

Sample/3%H2O2/roomtemperature,24hours熱

Thermal樣品/干燥/烘箱內(nèi)105℃加熱，5天

Sample/dry/heatinovenat105熱/濕度

Thermal/Humidity樣品/頂空濕度飽和（MSH）/烘箱內(nèi)90℃，48小時

Sample/MoistureSaturatedHeadspace/ovenat90濕度

Humidity樣品/干燥器內(nèi)加水/室溫，5天

Sample/desiccatorswithwater/roomtemperature,5days陽光測試

Suntest樣品/UV/5天

Sample/UV/5days光穩(wěn)定性

Photostability樣品/干燥/UV下5天

Sample/dry/underUV,5days樣品溶液/UV下，5天，無色燒瓶

Samplesolution/underUV,5days,clearflask樣品溶液/UV下，5天，棕色燒瓶

Samplesolution/underUV,5days,amberflask按照降解約為10%-20%來選擇條件。