蘆丁的定量分析方法概述

蘆丁的定量分析方法概述

氨基乙醇又名黃酮，是碳水化合物、維生素p和紫吡魯酯。廣泛分布于豆科植物槐、冬青植物、赤霉植物、蓼科植物、麥冬植物、麥冬植物等。它具有抗炎作用、抗旱性和類固醇類原酶的作用，能降低毛細血管的滲透性。臨床上用于預(yù)防和治療腦溢血、高血壓、結(jié)膜出血、紫薇、急性化膿性胃炎和慢性支氣管炎。許多中藥及其制劑皆以蘆丁為定量指標,本文對蘆丁的定量方法作一綜述。1檢測測定方法的確定李曉芳采用此方法測定了銀杏葉中蘆丁的含量。標準曲線的制備:精密吸取0.157mg/ml的蘆丁對照液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0ml分別置10ml容量瓶中,用30%乙醇稀釋至刻度,在250nm波長處作紫外檢測,建立回歸方程。樣品測定:取干燥的銀杏葉,60%丙酮提取,提取液減壓濃縮,離心除沉淀,上清液用有機溶媒萃取,萃取液濃縮干燥,精密稱取干燥品一定量,置10ml量瓶中,用30%乙醇稀釋至刻度,按標準曲線同樣條件作紫外檢測,計算蘆丁含量。平均回收率97.7%。宋寅生等建立了催化氧化—紫外分光光度法,不經(jīng)分離同時測定復(fù)方蘆丁片中維生素C和蘆丁的含量,平均回收率分別為97.3%,99.6%,樣品測定結(jié)果與標準方法一致。陳新國測定了降糖口服液中蘆丁的含量,表明此方法簡便、快速,重現(xiàn)性好。2蘆丁和槲皮素含量測定蘆丁是槲皮素3位上的羥基與蕓香糖脫水形成的苷,二者吸收光譜嚴重重疊,王麗琴等運用卡爾曼濾波對重疊的譜峰有較強的分辨能力,同時測定槐米中蘆丁和槲皮素的含量。吸光系數(shù)的確定:分別精密稱取2.0mg的蘆丁和槲皮素,分別用甲醇定容至25ml,再分別吸取一定體積,用甲醇-水(1∶4)定容至不同濃度的對照溶液,在230~300nm范圍內(nèi),每間隔2nm測其吸光度,數(shù)據(jù)進行線性回歸,求出各自的吸光系數(shù)。吸光系數(shù)矩陣為H36×2。樣品測定:模擬樣品,分別移取不同體積的蘆丁和槲皮素對照溶液于同一容量瓶中,以甲醇-水(1∶4)稀釋至刻度,在同樣的波長范圍測吸光度,上機濾波處理,求出其含量;對于實際樣品,準確稱取一定量樣品,甲醇溶解后,以上述相同方法測定含量。實驗證明樣品中蘆丁和槲皮素的回收率均達97%。3標準曲線及回收率薄層色譜條件:堿性硅膠GCMC-Na薄層板(含4%醋酸鈉),展開劑為醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(6-5-1-1),飽和15min,展距10cm,10%三氯化鋁乙醇液噴霧,晾干后顯色熒光定位后掃描測定。掃描條件:波長λS=275nm,λR=320nm。標準曲線:精密稱取蘆丁對照品10mg,用甲醇定容至10ml,薄層板上點樣2~6μl,按上述條件展開,顯色,掃描測定,繪制標準曲線。樣品測定:取樣品內(nèi)容物粉末,精密稱取2g,加乙醚回流提取4h,棄乙醚液,加甲醇回流提取8h,揮盡甲醇,殘渣加乙醇定容于10ml容量瓶中,用定量點樣毛細管吸取5μl,對照品3μl分別點于同一薄層板上,按上述條件展開、顯色、掃描,計算含量,蘆丁回收率為98.26%。楊海燕等采用單波長聚酰胺薄層掃描法測定了小薊中蘆丁的含量,以乙醇-水(1∶9)為展開劑,樣品經(jīng)40%甲醇超聲提取,420nm反射鋸齒掃描測定。4工作曲線的制備馬志茹等利用單掃示波極譜法對樣品不經(jīng)分離,直接測定了槐米和蘆丁制劑中蘆丁的含量,蘆丁回收率達99%以上,方法準確可靠。儀器:JP3-1型示波極譜儀,三電極系統(tǒng):滴汞工作電極、飽和甘汞參比電極,鉑絲對電極;XJP-821型新極譜儀,303A型靜汞電極,3036型X-Y軸記錄儀。實驗條件:pH=3.5的0.1mol/LNaAc-Hac溶液為底液,掃描電位-1.10—-1.60V;工作曲線:取蘆丁對照品,用熱無水乙醇配成濃度為1.0×10-2mol/L的標準溶液,分別精密吸取不同量于10ml的容量瓶中,加支持電解質(zhì)至刻度,在極譜儀上單掃記錄導(dǎo)數(shù)還原波,制備工作曲線。樣品的測定:精密稱取干燥的樣品細粉0.3g,加適量乙醇回流提取2h,提取液轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中,用乙醇定容,取50μl上清液于10ml電解杯中,加入底液,按上述條件測定,計算樣品中蘆丁含量。5含量測定及方法張曉燕等采用此法測定了槐花散中蘆丁的含量。色譜條件:吉爾森GAD-E高效液相色譜儀,HypersilC18色譜柱,流動相為甲醇-水-冰醋酸(40-57.5-2.5),檢測波長為254nm,柱溫為室溫,流速為1ml/min。標準曲線的制備:精密稱取蘆丁對照品,用甲醇配成不同濃度的標準溶液,分別進樣記錄峰面積,計算回歸方程。樣品測定:取槐花散,加水煎煮,取濾液,精密量取100μl,精密加入醋酸乙酯6.00ml,振蕩提取,離心10min,精密量取上清液5.00ml,氮氣揮干,精密加入甲醇100μl,超聲振蕩溶解,離心,取上清液進樣,計算含量。梁潔怡、楊美華等、程小霞所用色譜條件基本與上述條件相同。李仲等所用色譜條件為:采用KEYSTONE-ODS(250mm×4.6mm)色譜柱,以甲醇∶水(48.5∶51.5)為流動相,檢測波長360nm;王福成等所用色譜條件為:以甲醇-1%冰醋酸(30∶70)為流動相,檢測波長359nm;朱麗華等所用色譜條件:ShimpackCLCC18,流動相為甲醇-0.4%磷酸水溶液梯度洗脫,檢測波長360nm。6樣品中蘆丁及其它組分含量的測定孫國祥等用毛細管區(qū)帶電泳疊加對比法對復(fù)方降壓片中5個組分進行了定量分析。電泳條件:紫外檢測波長246nm,靈敏度0.010AUFS,電流65uA,以50mmol/L硼酸溶液作背景電解質(zhì),重力進樣5~20s,檢測溫度24℃。實驗前用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液沖洗毛細管15min,再用去離子水沖洗5min,之后用背景電解質(zhì)沖洗10min,每兩次進樣前用背景電解質(zhì)加壓沖洗5min。樣品測定:取復(fù)方降壓片,研細,精密稱約10片重,置250ml量瓶中,用50%乙醇定容,超聲30min,濾過;再精密稱取蘆丁及各對照品一定量,用樣品溶液定容至50ml,超聲20min,得標準加入溶液;取樣品溶液和標準加入溶液按上述條件進樣,記錄峰面積,按標準加入法公式計算樣品溶液中蘆丁及其它各組分含量。孫蓮李向軍等亦采用此法對蘆丁進行了定