硫代葡萄糖苷的檢測

硫代葡萄糖苷的檢測1硫代葡萄糖苷的簡介硫代葡萄糖昔（以下簡稱硫昔）是主要分布于十字花科和刺山柑植物中的含硫次生代謝產(chǎn)物。由8-D-硫葡萄糖基、硫化肟基團(tuán)和來源于氨基酸的可變側(cè)鏈R組成。其生物合成途徑分為三部分：前體氨基酸側(cè)鏈延伸、核心結(jié)構(gòu)形成及次級側(cè)鏈的修飾。硫昔以穩(wěn)定化合物的形式分布于植物營養(yǎng)器官和生殖器官中，當(dāng)植物組織受到破壞時，分布于細(xì)胞質(zhì)的黑芥子酶將液泡中的硫昔分解成腈、異硫氤酸酯、硫氤酸酯、惡唑烷酮等多種降解產(chǎn)物，反應(yīng)產(chǎn)物因硫昔種類、金屬離子、pH值等而不同，其過程十分復(fù)雜。2硫苷生理功能2.1增強(qiáng)植物抗逆性硫昔及其降解產(chǎn)物具有抵御草食動物、抗病蟲及抗病原微生物能力，在植物的防衛(wèi)反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用。硫昔降解產(chǎn)物烯丙基異硫氤酸酯、2-苯乙基異硫氤酸酯、n-丁基異硫氤酸酯及1-氤基-2-苯乙烷對蕓苔屬專食性昆蟲卵具有致死作用。其中2-苯乙基異硫氤酸酯致死劑量最低，烯丙基異硫氤酸酯、n-丁基異硫氤酸酯次之，1-氤基-2-苯乙烷最高。較適應(yīng)寄主植物中異硫氤酸酯含量比適應(yīng)寄主植物高，因而可推測硫昔組成及濃度對專食性昆蟲有影響。異硫氤酸酯對土傳病蟲害防治效果因其含量、病蟲對其敏感性，在土壤中的釋放速率及殘留時間等而不同。當(dāng)植株中2-苯乙基硫昔含量增加時，蚜蟲數(shù)量減少，植株抗蟲性增強(qiáng)。2.2誘蟲作用硫昔是黃曲條跳甲進(jìn)行寄主選擇的主要因素，同一蔬菜品種中硫昔含量與其選擇性呈顯著相關(guān)。除此之外，硫昔還能刺激小菜蛾產(chǎn)卵，其產(chǎn)卵量與硫昔含量變化趨勢基本相符。因而，硫昔具有誘蟲作用。2.3致甲狀腺腫大硫昔是菜籽餅中最主要的抗?fàn)I養(yǎng)因子，其降解產(chǎn)物異硫酸氤鹽及惡唑烷酮能夠引起畜禽甲狀腺腫大，并且甲狀腺受損存在種間差異。2.4抗癌吲哚族硫昔降解產(chǎn)物對S180小鼠具有抗腫瘤作用。葡萄糖萊菔子昔（硫昔中一種）降解產(chǎn)物蘿卜硫素是蔬菜抗癌效果最好的植物活性物質(zhì)，誘導(dǎo)人或動物體內(nèi)Phase酶II（如谷光昔肽-S-轉(zhuǎn)移酶、苯醌還原酶和UDP-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶）數(shù)量的增加，抑制Pha-seI酶的產(chǎn)生，從而阻斷致癌物產(chǎn)生的代謝途徑，抑制癌細(xì)胞分裂和生長。3檢測方法：原子吸收法本法可測定umol/g量的硫代荀萄糖普。重量法、容量法、側(cè)葡萄糖法、氯化肥法氣相色譜法和液相色譜法.這些方法有的操作繁復(fù)，費時，所需樣品量大，再現(xiàn)性差，有的需要昂貴的酶試劑，而各種方法的結(jié)果又難以比較，正如Uppstrom[”在1985年國際油菜分析化學(xué)討論會上指出的有關(guān)硫普總量的測定，需要解決的問題很多.將欲測的有機(jī)物直接（或?qū)⑵滢D(zhuǎn)化為某種化合物后）與金屬離子反應(yīng)，再用原子吸收法測定反應(yīng)產(chǎn)物中（或未反應(yīng)的）過量金屬離子，即可求得有機(jī)物的含量.這種方法既可擴(kuò)大原子吸收法的應(yīng)用范圍，又可解決一些有機(jī)分析方法要用純有機(jī)化合物做標(biāo)準(zhǔn)的困難.本文用這種方法測定了油菜籽中硫代葡萄搪普（以下簡稱硫普）.硫普分子雖然復(fù)雜，但經(jīng)酶解后，均能無例外地定量產(chǎn)生等摩爾的H2SO4,而測定so4-目前一般被認(rèn)為是較可靠的方法，因此若用巳知量的鋇離子溶液與其反應(yīng)，然后用原子吸收法測量過量的鋇離子，即可間接求得硫普的含量。實驗部分：1儀器與試劑zeeman原子吸收分光光度計，離心機(jī)，超級恒溫槽.0.01000mol/L鋇標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取l.9734gBaCo:溶于20mL2mol/L的HCI中，用水稀釋至IL，用時再稀釋為1.00mmol/L.0.0l000mol/LSO三一標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取1.4204gNa:50。溶于少量水中，再稀釋成1L,用時再稀釋成1.00mmo1/L.油菜籽:江蘇省農(nóng)科院經(jīng)作所提供.2工作條件用單純型方法選定的最佳測定條件如下.波長:553.6nm，狹縫:1.3nm，燈電流:20mA，燃燒器高度7mm，乙炔流量2.5L/min.3分析步驟將一定體積含so4近中性試樣溶液，移入已校正過的l0mL離心管中，加入2.00mLI.00mmol/L的Ba離子標(biāo)準(zhǔn)溶液，沸水浴5min，取出冷全室溫，用水稀釋至4.OmL，搖勻，在3500rPm.下離心lmin，用原子吸收法測定溶液中過量的Ba離子.4樣品分析4.1工作曲線往預(yù)先校正過的10mL離心試管中，分別加入1.00mol/L的so42-標(biāo)準(zhǔn)溶液。0.00、0.40、0.80、1.20、l.60mL，再分別加入2.00mL的l.00mmol/L的Ba離子標(biāo)準(zhǔn)溶液，搖勻、沸水浴5min，取出冷全室溫。用水稀釋至4.00mL，搖勻，在3500rPm下離心lmin.用原子吸收法測定溶液中過量的Ba離子.5結(jié)果和討論5.1酸度試驗結(jié)果表明，pH值為4一8時對測定無影響，故試樣的測定酸度為pH5、7。5.2加.熱時間為改善BaSO4的沉淀品形，.沉淀后，沸水浴加熱5、60min，對結(jié)果無影響，故加熱時間定為5、l0min.5.3離心時間與速度為使BaSO4?？焖俪两?，用不同的離心速度和時間進(jìn)行試驗，當(dāng)轉(zhuǎn)速為3500rPm時，離心lmin即可得到滿意的結(jié)果.由此可說明，在所述條件下，可不用分離BaSO4。，也能得到滿意的結(jié)果。甲醇回流提取法原理：采用甲醇法提取西蘭花中硫代葡萄糖苷，利用重量法測定其中硫代葡萄糖苷的含量，得出硫代葡萄糖苷最佳提取條件。1材料與設(shè)備1.1主要實驗材料新鮮西蘭花(市售)、定量濾紙(中速)、瓷坩蝸、牛津杯(內(nèi)徑6mm、外徑8mm、高10mm)、移液槍等。無水甲醇、醋酸鋇、氯化鋇、濃鹽酸、抗生素(硫酸鏈霉素)。金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、白葡萄球菌(whitestaphylococcus)、枯草芽孢桿菌(Bacil-lussubtilis)、大腸桿菌(Escherichiacoli)(以上菌種來自于哈爾濱醫(yī)科大學(xué))。1.2主要實驗設(shè)備粉碎機(jī)、馬福爐、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、微電腦控制生化培養(yǎng)箱、電熱恒溫培養(yǎng)箱、立式自動電熱壓力蒸汽滅菌器、高壓滅菌鍋、無菌操作臺。2實驗方法2.1工藝流程2.1.1硫代葡萄糖苷的提取工藝流程西蘭花一洗滌一切片一干燥一粉碎稱重(西蘭花蕾部位)一甲醇加熱回流一加入Pb(AC)2一靜止一離心一濾液(硫代葡萄糖苷的粗提物)。2.1.2硫代葡萄糖苷的測定工藝流程(采用重量法測定，參考吳謀成［6］、褚慶華［7］的測定方法，略有改動)：上述濾液一加入Ba(AC)2，過濾一除甲醇一加入BaCl2、HCl—沸水浴一靜止過夜一過濾一灰化至衡重一稱重一計算硫代葡萄糖苷含量(同時做空白)。操作要點如下：切片：切片厚度在