生物實驗室操作規(guī)范安全手冊

實驗室操作規(guī)范本規(guī)程中列出了最基本的實驗室操作和程序，他們是微生物學(xué)操作技術(shù)規(guī)范的基礎(chǔ)。在規(guī)劃實驗室和國家級實驗室項目時，可以根據(jù)這些規(guī)程來制訂實驗室安全操作的書面程序。每個實驗室都應(yīng)該采用“安全手冊”或“操作手冊”，其中定義了已知的和潛在的危害，并規(guī)定了特殊的操作程序來避免或盡量減小這種危害。規(guī)范的微生物學(xué)操作技術(shù)是實驗室安全的基礎(chǔ)，而專門的實驗設(shè)備僅僅是一種補充，絕不能替代正確的操作規(guī)范。下面列出了一些最重要的概念。進入規(guī)定1、在處理危險度2級或更高危險度級別的微生物時，在實驗室門上應(yīng)標有國際通用的生物危害警告標志（圖1）。2、只有經(jīng)批準的人員方可進入實驗室工作區(qū)域。3、實驗室的門應(yīng)保持關(guān)閉。4、兒童不應(yīng)被批準或允許進入實驗室工作區(qū)域。5、進入動物房應(yīng)當(dāng)經(jīng)過特別批準。6、與實驗室工作無關(guān)的動物不得帶入實驗室。人員防護1、在實驗室工作時，任何時候都必須穿著連體衣、隔離服或工作服。2、在進行可能直接或意外接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動物的操作時，應(yīng)戴上合適的手套。手套用完后，應(yīng)先消毒再摘除，隨后必須洗手。3、在處理完感染性實驗材料和動物后，以及在離開實驗室工作區(qū)域前，都必須洗手。4、為了防止眼睛或面部受到潑濺物、碰撞物或人工紫外線輻射的傷害，必須戴安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護設(shè)備。5、嚴禁穿著實驗室防護服離開實驗室，（如去餐廳、咖啡廳、辦公室、圖書館、員工休息室和衛(wèi)生間）。6、不得在實驗室內(nèi)穿露腳趾的鞋子。7、禁止在實驗室工作區(qū)域進食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。8、禁止在實驗室工作區(qū)域儲存食品和飲料。9、在實驗室內(nèi)用過的防護服不得和日常服裝放在同一柜子內(nèi)。操作規(guī)范1、嚴禁用口吸移液管。2、嚴禁將實驗材料置于口內(nèi)。嚴禁舔標簽。3、所有的技術(shù)操作要按盡量減少氣溶膠和微小液滴形成的方式來進行。4、應(yīng)限制使用皮下注射針頭和注射器。除了進行腸道外注射或抽取實驗動物體液，皮下注射針頭和注射器不能用于替代移液管或用作其他用途。5、出現(xiàn)溢出、事故以及明顯或可能暴露于感染性物質(zhì)時，必須向?qū)嶒炇抑鞴軋蟾?。實驗室?yīng)保存這些事件或事故的書面報告。6、必須制訂關(guān)于如何處理溢出物的書面操作程序，并予以遵守執(zhí)行。7、污染的液體在排放到生活污水管道以前必須清除污染（采用化學(xué)或物理學(xué)方法）。根據(jù)所處理的微生物因子的危險度評估結(jié)果，可能需要準備污水處理系統(tǒng)。8、需要帶出實驗室的手寫文件必須保證在實驗室內(nèi)沒有受到污染。實驗室中標本的安全操作實驗室標本的收集、運輸和處理不當(dāng)，會帶來使相關(guān)人員感染的危險。標本容器標本容器可以是玻璃的，但最好使用塑料制品。標本容器應(yīng)當(dāng)堅固，正確地用蓋子或塞子蓋好后應(yīng)無泄漏。在容器外部不能有殘留物。容器上應(yīng)當(dāng)正確地粘貼標簽以便于識別。標本的要求或說明書不能夠卷在容器外面，而是要分開放置，最好放置在防水的袋子里。標本在設(shè)施內(nèi)的傳遞為了避免意外泄漏或溢出，應(yīng)當(dāng)使用盒子等二級容器，并將其固定在架子上使裝有標本的容器保持直立。二級容器可以是金屬或塑料制品，應(yīng)該可以耐高壓滅菌或耐受化學(xué)消毒劑的作用。密封口最好有一個墊圈，要定期清除污染。標本接收需要接收大量標本的實驗室應(yīng)當(dāng)安排專門的房間或空間。打開包裝接收和打開標本的人員應(yīng)當(dāng)了解標本對身體健康的潛在危害，并接受過如何采用標準防護方法[3]的培訓(xùn)，尤其是處理破碎或泄漏的容器時更應(yīng)如此。標本的內(nèi)層容器要在生物安全柜內(nèi)打開，并準備好消毒劑。移液管和移液輔助器的使用1、應(yīng)使用移液輔助器，嚴禁用口吸取。2、所有移液管應(yīng)帶有棉塞以減少移液器具的污染。3、不能向含有感染性物質(zhì)的溶液中吹入氣體。4、感染性物質(zhì)不能使用移液管反復(fù)吹吸混合。5、不能將液體從移液管內(nèi)用力吹出。6、刻度對應(yīng)（Mark-to-mark）移液管不需要排出最后一滴液體，因此最好使用這種移液管。7、污染的移液管應(yīng)該完全浸泡在盛有適當(dāng)消毒液的防碎容器中。移液管應(yīng)當(dāng)在消毒劑中浸泡適當(dāng)時間后再進行處理。8、盛放廢棄移液管的容器不能放在外面，應(yīng)當(dāng)放在生物安全柜內(nèi)。9、有固定皮下注射針頭的注射器不能夠用于移液。10、在打開隔膜封口的瓶子時，應(yīng)使用可以使用移液管的工具，而避免使用皮下注射針頭和注射器。11、為了避免感染性物質(zhì)從移液管中滴出而擴散，在工作臺面應(yīng)當(dāng)放置一塊浸有消毒液的布或吸有消毒液的紙，使用后將其按感染性廢棄物處理。避免感染性物質(zhì)的擴散1、為了避免被接種物灑落，微生物接種環(huán)的直徑應(yīng)為2～3mm并完全封閉，柄的長度應(yīng)小于6cm以減小抖動。2、使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)，能夠避免在本生燈的明火上加熱所引起的感染性物質(zhì)爆濺。最好使用不需要再進行消毒的一次性接種環(huán)。用于顯微鏡觀察的蓋玻片和涂片用于顯微鏡觀察的血液、唾液和糞便標本在固定和染色時，不必殺死涂片上的所有微生物和病毒。應(yīng)當(dāng)用鑷子拿取這些東西，妥善儲存，并經(jīng)清除污染和／或高壓滅菌后再丟棄。微生物實驗室應(yīng)急程序刺傷、切割傷或擦傷受傷人員應(yīng)當(dāng)脫下防護服，清洗雙手和受傷部位，使用適當(dāng)?shù)钠つw消毒劑，必要時進行醫(yī)學(xué)處理。要記錄受傷原因和相關(guān)的微生物，并應(yīng)保留完整適當(dāng)?shù)尼t(yī)療記錄。潛在感染性物質(zhì)的食入應(yīng)脫下受害人的防護服并進行醫(yī)學(xué)處理。要報告食入材料的鑒定和事故發(fā)生的細節(jié)，并保留完整適當(dāng)?shù)尼t(yī)療記錄。潛在危害性氣溶膠的釋放（在生物安全柜以外）所有人員必須立即撤離相關(guān)區(qū)域，任何暴露人員都應(yīng)接受醫(yī)學(xué)咨詢。應(yīng)當(dāng)立即通知實驗室負責(zé)人和生物安全官員。為了使氣溶膠排出和使較大的粒子沉降，在一定時間內(nèi)（例如1h內(nèi)）嚴禁人員入內(nèi)。如果實驗室沒有中央通風(fēng)系統(tǒng)，則應(yīng)推遲進入實驗室（例如24h）。應(yīng)張貼“禁止進入”的標志。過了相應(yīng)時間后，在生物安全官員的指導(dǎo)下來清除污染。應(yīng)穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o服和呼吸保護裝備。容器破碎及感染性物質(zhì)的溢出應(yīng)當(dāng)立即用布或紙巾覆蓋受感染性物質(zhì)污染或受感染性物質(zhì)溢灑的破碎物品。然后在上面倒上消毒劑，并使其作用適當(dāng)時間。然后將布、紙巾以及破碎物品清理掉；玻璃碎片應(yīng)用鑷子清理。然后再用消毒劑擦拭污染區(qū)域。如果用簸箕清理破碎物，應(yīng)當(dāng)對他們進行高壓滅菌或放在有效的消毒液內(nèi)浸泡。用于清理的布、紙巾和抹布等應(yīng)當(dāng)放在盛放污染性廢棄物的容器內(nèi)。在所有這些操作過程中都應(yīng)戴手套。如果實驗表格或其他打印或手寫材料被污染，應(yīng)將這些信息復(fù)制，并將原件置于盛放污染性廢棄物的容器內(nèi)。未裝可封閉離心桶的離心機內(nèi)盛有潛在感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂如果機器正在運行時發(fā)生破裂或懷疑發(fā)生破裂，應(yīng)關(guān)閉機器電源，讓機器密閉（例如30min）使氣溶膠沉積。如果機器停止后發(fā)現(xiàn)破裂，應(yīng)立即將蓋子蓋上，并密閉（例如30min）。發(fā)生這兩種情況時都應(yīng)通知生物安全官員。隨后的所有操作都應(yīng)戴結(jié)實的手套（如厚橡膠手套），必要時可在外面戴適當(dāng)?shù)囊淮涡允痔?。?dāng)清理玻璃碎片時應(yīng)當(dāng)使用鑷子，或用鑷子夾著的棉花來進行。所有破碎的離心管、玻璃碎片、離心桶、十字軸和轉(zhuǎn)子都應(yīng)放在無腐蝕性的、已知對相關(guān)微生物具有殺滅活性的消毒劑內(nèi)（見第14章）。未破損的帶蓋離心管應(yīng)放在另一個有消毒劑的容器中，然后回收。離心機內(nèi)腔應(yīng)用適當(dāng)濃度的同種消毒劑擦拭，并再次擦拭，然后用水沖洗并干燥。清理時所使用的全部材料都應(yīng)按感染性廢棄物處理。急救裝備必須配備以下緊急裝備：1、急救箱，包括常用的和特殊的解毒劑2、合適的滅火器和滅火毯建議配備以下設(shè)備，但可根據(jù)具體情況有所不同：1、全套防護服（連體防護服、手套和頭套——用于涉及危險度3級和4級微生物的事故）2、帶有能有效防護化學(xué)物質(zhì)和顆粒的濾毒罐的全面罩式防毒面具（full-facerespirator）3、房間消毒設(shè)備，如噴霧器和甲醛熏蒸器4、擔(dān)架5、工具，如錘子、斧子、扳手、螺絲刀、梯子和繩子6、劃分危險區(qū)域界限的器材和警告標示。清除局部環(huán)境的污染需要聯(lián)合應(yīng)用液體和氣體消毒劑來清除實驗室空間、用具和設(shè)備的污染。清除表面污染時可以使用次氯酸鈉（NaOCl）溶液；含有1％有效氯的溶液適于普通的環(huán)境衛(wèi)生設(shè)備，但是當(dāng)處理高危環(huán)境時，建議使用高濃度（5g/L）溶液。用于清除環(huán)境污染時，含有3％過氧化氫的溶液也可以作為漂白劑的代用品?？梢酝ㄟ^加熱多聚甲醛或煮沸福爾馬林所產(chǎn)生的甲醛蒸氣熏蒸來清除房間和儀器的污染。這是一項需要由專門培訓(xùn)的專業(yè)人員來進行的、非常危險的操作。產(chǎn)生甲醛蒸氣前，房間的所有開口（如門窗等）都應(yīng)用密封帶或類似物加以密封。熏蒸應(yīng)當(dāng)在室溫不低于21℃且相對濕度70%清除污染時氣體需要與物體表面至少接觸8h。熏蒸后，該區(qū)域必須徹底通風(fēng)后才能允許人員進入。在通風(fēng)之前需要進入房間時，必須戴適當(dāng)?shù)姆蓝久婢??？梢圆捎脷鈶B(tài)的碳酸氫銨來中和甲醛。采用過氧化氫溶液對小空間進行氣霧熏蒸同樣有效，但需要專門的蒸氣發(fā)生設(shè)備。清除生物安全柜的污染清除Ⅰ級和Ⅱ級生物安全柜的污染時，要使用能讓甲醛氣體獨立發(fā)生、循環(huán)和中和的設(shè)備。應(yīng)當(dāng)將適量的多聚甲醛（空氣中的終濃度達到0.8%）放在電熱板上面的長柄平鍋中（在生物安全柜外進行控制）。然后將含有比多聚甲醛多10%的碳酸氫銨置于另一個長柄平鍋中（在生物安全柜外進行控制）。在柜外將該平鍋放置到第二個加熱板上，在安全柜外將電熱板接上插頭通電，以便需要時在柜外通過開關(guān)電源插頭控制盤子的操作。如果相對濕度低于70％，在使用強力膠帶［如管道膠帶（ducttape）］密封前部封閉板前，還要在安全柜內(nèi)部放置一個開口的盛有熱水的容器。如果前部沒有封閉板，則可以用大塊塑料布粘貼覆蓋在前部開口和排氣口以保證氣體不會泄漏進入房間。同時供電線穿過前封閉板的穿透孔須用管道膠帶密封。將放有多聚甲醛平鍋的加熱板插上插頭接通電源。在多聚甲醛完全蒸發(fā)時拔掉插頭以斷電。使生物安全柜靜置至少6h。然后給放有第二個平鍋的加熱板插上插頭通電，使碳酸氫銨蒸發(fā)。然后拔掉電插頭，接通生物安全柜電源兩次，每次啟動約2秒鐘來讓碳酸氫銨氣體循環(huán)。在移去前封閉板（或塑料布）和排氣口罩單前，應(yīng)使生物安全柜靜置30min。使用前應(yīng)擦掉生物安全柜表面上的殘渣。洗手／清除手部污染處理生物危害性材料時，只要可能均必須戴合適的手套。但是這并不能代替實驗室人員需要經(jīng)常地、徹底地洗手。處理完生物危害性材料和動物后以及離開實驗室前均必須洗手。大多數(shù)情況下，用普通的肥皂和水徹底沖洗對于清除手部污染就足夠了。但在高度危險的情況下，建議使用殺菌肥皂。手要完全抹上肥皂，搓洗至少10秒鐘，用干凈水沖洗后再用干凈的紙巾或毛巾擦干（如果有條件，可以使用暖風(fēng)干手器）。推薦使用腳控或肘控的水龍頭。如果沒有安裝，應(yīng)使用紙巾或毛巾來關(guān)上水龍頭，以防止再度污染洗凈的手。如上所述，如果沒有條件徹底洗手或洗手不方便，應(yīng)該用酒精擦手來清除雙手的輕度污染。熱力消毒和滅菌加熱是最常用的清除病原體污染的物理手段?！案伞睙釠]有腐蝕性，可用來處理實驗器材中許多可耐受160℃或更高溫度2～4h煮沸并不一定能殺死所有的微生物或病原體，但如果其他方法（化學(xué)殺菌、清除污染、高壓滅菌）不可行或沒有條件時，也可以作為一種最起碼的消毒措施。滅菌后的物品必須小心操作并保存，以保證在使用之前不再被污染。高壓滅菌壓力飽和蒸汽滅菌（高壓滅菌）是對實驗材料進行滅菌的最有效和最可靠的方法。對于大多數(shù)目的，下列組合可以確保正確裝載的高壓滅菌器的滅菌效果：1、134℃、2、126℃、3、121℃、4、115℃、焚燒在處理那些經(jīng)過或事先未經(jīng)清除污染的動物尸體以及解剖組織或其他實驗室廢棄物時，焚燒是一種有效的方法（見第3章）。只有在實驗室可以控制焚燒爐的條件下，才能用焚燒代替高壓滅菌來處理感染性物質(zhì)。需要有效控制溫度，并配備二級焚燒室時才能實現(xiàn)徹底焚燒。許多焚燒爐，尤其是那些只有單個焚燒室的，不能滿足處理感染性物質(zhì)、動物尸體和塑料制品的要求。這些材料可能不能完全銷毀，微生物、有毒化學(xué)品和煙塵還可能通過煙囪排放而污染大氣。但也有許多結(jié)構(gòu)令人滿意的焚燒室。理想的是一級焚燒室的溫度至少應(yīng)達到800℃，二級焚燒室的溫度至少應(yīng)達到1000需要焚燒的材料（即使事先已清除污染）應(yīng)當(dāng)用袋子運送到焚燒室，最好使用塑料袋。負責(zé)焚燒的工作人員應(yīng)當(dāng)接受關(guān)于如何裝載和控制溫度等的正確指導(dǎo)。還需要注明的是，焚燒爐的操作是否有效主要取決于對需要處理的廢棄物中物品的正確混合。人們已經(jīng)關(guān)注到現(xiàn)有的或計劃制造中的焚燒爐可能對環(huán)境造成的負面影響，并正努力使焚燒爐對環(huán)境的影響更小，也更節(jié)約能源。廢棄物處理實驗室和醫(yī)學(xué)廢棄物的處理要遵守各個地區(qū)、國家和國際的規(guī)定，在設(shè)計和執(zhí)行關(guān)于生物危害性廢棄物處理、運輸和廢棄的規(guī)劃之前，必須參考最新版的相關(guān)文件。一般情況下，焚燒爐內(nèi)的灰燼可以作為普通家庭廢棄物處理并由地方有關(guān)部門運走。高壓滅菌過的廢棄物可以在其他地方焚燒后處理，或在指定垃圾場掩埋處理。化學(xué)品的儲存實驗室應(yīng)該只保存滿足日常使用量的化學(xué)品。大量的化學(xué)品應(yīng)儲存在專門指定的房間或建筑物內(nèi)。爆炸性化學(xué)品疊氮化物通常用作溶液中的抗菌劑，由于輕微碰撞就可能造成疊氮化銅的猛烈爆炸，因此疊氮化物不應(yīng)該與銅或鉛（如污水管以及管道設(shè)施）接觸。乙醚老化和干燥形成結(jié)晶后極不穩(wěn)定，可能會爆炸。高氯酸如果在木制品、砌磚或纖維性物質(zhì)上干燥時，一旦碰撞會發(fā)生爆炸并引起火災(zāi)?？辔端岷涂辔端猁}在加熱和撞擊時會發(fā)生爆炸?；瘜W(xué)品溢出實驗室化學(xué)品的大多數(shù)生產(chǎn)商都會發(fā)行描述化學(xué)品溢出處理的示意圖，溢出處理的示意圖和工具盒都能買到。應(yīng)該將適當(dāng)?shù)氖疽鈭D張貼在實驗室中顯著的位置，并應(yīng)配備下列物品：1、化學(xué)品溢出處理工具盒2、防護服，例如耐用橡膠手套、套鞋或橡膠靴、防毒面具3、鏟子和簸箕4、用于夾取碎玻璃的鑷子5、拖把、擦拭用的布和紙6、桶7、用于中和酸及腐蝕性化學(xué)品的蘇打（碳酸鈉，Na2CO3）或碳酸氫鈉（NaHCO3）8、沙子（用于覆蓋堿性溢出物）9、不可燃的清潔劑。當(dāng)發(fā)生大量化學(xué)品溢出時，應(yīng)該采取下列措施：1、通知有關(guān)的安全官員2、疏散現(xiàn)場的閑雜人員3、密切關(guān)注可能受到污染的人員4、如果溢出物是易燃性的，則應(yīng)熄滅所有明火，關(guān)閉該房間中以及相鄰