柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君湯對(duì)肝郁脾虛證模型大鼠表觀效應(yīng)群的影響

柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君湯對(duì)肝郁脾虛證模型大鼠表觀效應(yīng)群的影響

“方證相關(guān)性”不僅是中醫(yī)辨證論治原則的核心，也是方劑科學(xué)的邏輯基礎(chǔ)。本研究以肝郁脾虛證及其相關(guān)方藥為切入,在復(fù)制肝郁脾虛證大鼠模型的基礎(chǔ)上,從“同證異方”的角度,比較觀察了具有疏肝、健脾、疏肝健脾不同功用的柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君湯3方對(duì)該模型大鼠外觀表征的影響。1材料表面1.1fp/vaf模型健康SD大鼠,雌雄各半,體重(240±10)g,級(jí)別SPF/VAF,動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK(京)2007-0001,由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。所有動(dòng)物提前1周購入,實(shí)驗(yàn)室常規(guī)飼養(yǎng)。1.2香加味劑g人參、白術(shù)、茯苓、柴胡、陳皮、川芎、香附、枳殼、芍藥、炙甘草由北京同仁堂藥業(yè)股份有限公司提供,經(jīng)鑒定均為正品。柴胡疏肝散、四君子湯按全國統(tǒng)編五版教材《方劑學(xué)》中的組成和用量,其中柴胡疏肝散組成為柴胡6g,陳皮6g,川芎4.5g,香附4.5g,枳殼4.5g,芍藥4.5g,炙甘草1.5g;四君子湯組為人參10g,白術(shù)9g,茯苓9g,炙甘草6g;柴疏四君湯為柴胡疏肝散和四君子湯的合方:柴胡4g,陳皮4g,川芎3g,香附3g,枳殼3g,芍藥3g,人參4g,白術(shù)3g,茯苓3g,炙甘草2g。3方按水提醇沉法分別制成顆粒(0.52g柴疏四君湯顆粒相當(dāng)于1g生藥材,0.55g四君子湯顆粒相當(dāng)于1g生藥材,0.46g柴胡疏肝散顆粒相當(dāng)于1g生藥材),濃度配制為:柴胡疏肝散28.2%、四君子湯33.41%和柴疏四君湯29.12%。1.3產(chǎn)品有限公司筆式電子體溫計(jì),北京中西化玻儀器有限公司;電子天平,北京北方首衡電子產(chǎn)品有限公司;束縛器為有機(jī)玻璃制成的圓筒狀結(jié)構(gòu),主筒長(zhǎng)25cm,筒口外經(jīng)7cm,內(nèi)徑5cm,前端置有一直徑小于主筒的、可以前后調(diào)節(jié)的帶有透氣孔、便于大鼠頭伸進(jìn)的有機(jī)玻璃前罩,后端為前后間距可調(diào)的開關(guān)閘門。2方法2.1游泳時(shí)間及限制采用慢性束縛應(yīng)激+過度疲勞+飲食失節(jié)的方法。實(shí)驗(yàn)前全部動(dòng)物進(jìn)行預(yù)游泳,剔除游泳時(shí)間少于10min、大于20min的大鼠。合格造模大鼠于每天8:00am置于束縛器中限制3h,2:00pm置于盛有溫水(22±1)℃的大塑料桶中游泳10min。隔日喂食(隔日禁食,隔日足量給食),連續(xù)28d。2.2動(dòng)物分組及給藥量大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、肝郁脾虛模型組(以下簡(jiǎn)稱模型組)、柴疏四君湯組、柴胡疏肝散組、四君子湯組共5組,每組10只。后4組動(dòng)物按上述制模方法處理,連續(xù)28d;正常對(duì)照組不加任何刺激,自然飼養(yǎng)。于造模第15d,中藥各組大鼠分別給予柴胡疏肝散4.2g·kg-1、四君子湯4.53g·kg-1、柴疏四君湯4.27g·kg-1ig,1次/d;模型組和對(duì)照組分別給予等量蒸餾水,連續(xù)14d。2.3外觀行為觀察觀察并記錄各組大鼠的活動(dòng)、睡眠、情緒、毛發(fā)色澤、飲食、大小便等外觀行為方面的變化。2.4體重和體溫的觀察每周測(cè)定各組大鼠的體重(周日2:00~2:30pm測(cè)定)和體溫1次(周日8:00~8:30am測(cè)定)。2.5數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理3結(jié)果3.1不同中藥對(duì)發(fā)揮第一大模型動(dòng)物情緒狀態(tài)的影響實(shí)驗(yàn)期間,正常組大鼠的外觀行為等未見異常。與正常組相比,造模2周時(shí),模型組大鼠即表現(xiàn)出活躍程度減弱、情緒不穩(wěn)定、飲食減少、易醒、大便干結(jié);造模4周后,模型動(dòng)物情緒由開始的易怒煩躁的激惹狀態(tài)轉(zhuǎn)為情緒低落、表情淡漠和爭(zhēng)斗減少,飲食減少,大便轉(zhuǎn)為稀溏,毛發(fā)變?yōu)榭輥y發(fā)黃,活動(dòng)漸少,扎堆甚至倦臥等。分別給予中藥3方治療2周后,柴胡疏肝散組大鼠在活躍程度和情緒狀態(tài)方面有所改善;四君子湯組大鼠在皮膚毛發(fā)、飲食狀態(tài)、大便狀態(tài)方面有所改善;柴疏四君湯組大鼠在皮膚毛發(fā)、活躍程度、情緒反應(yīng)、飲食睡眠、大便性狀等方面均見較為明顯的改善。3.2各組大鼠體重比較由表1可見,觀察時(shí)間范圍內(nèi)正常組大鼠體重呈逐漸增加。與正常組相比,模型組和3個(gè)方藥組大鼠體重在第1至第4周各點(diǎn)均明顯降低,差異均有顯著性意義(P<0.05)。與模型組相比,連續(xù)給藥2周后,3個(gè)方藥組大鼠體重在觀察各點(diǎn)均呈不同程度增加,其中柴疏四君湯組增加有顯著性意義(P<0.05)。3個(gè)方藥組間比較,各組大鼠體重之間均無明顯差異(P>0.05)。3.3各組大鼠進(jìn)行造模后各點(diǎn)體溫比較由表2可見,觀察時(shí)間范圍內(nèi)正常組大鼠體溫?zé)o明顯變化,模型組大鼠的體溫呈不斷降低的變化趨勢(shì),3個(gè)方藥組大鼠在未給藥前2周體溫不斷降低,開始給藥后2周內(nèi),大鼠體溫均呈不斷增加的趨勢(shì)。與正常組相比,模型組大鼠于造模2~4周的各點(diǎn)體溫均明顯降低(P<0.01);柴胡疏肝散組給藥后1~2周的體溫仍明顯低于正常組(P<0.05),而四君湯組和柴疏四君湯組大鼠體溫與正常組比無明顯差異(P>0.05),柴疏四君湯組給藥2周后大鼠體溫已達(dá)正常組水平。與模型組相比,3個(gè)方藥組大鼠體溫在藥后1~2周均呈不同程度升高,差異均有非常顯著性意義(P<0.01)。3個(gè)方藥組間比較,與柴胡疏肝散組相比,柴疏四君湯組大鼠體溫明顯升高,差異有顯著性意義(P<0.05);四君湯組大鼠體溫?zé)o明顯差異(P>0.05)。與四君湯組相比,柴疏四君湯組大鼠體溫?zé)o明顯差異(P>0.05)。4不同方對(duì)模型外觀行為的影響肝郁脾虛證是中醫(yī)肝郁與脾虛的復(fù)合證,一定程度上反映了肝郁與脾虛的加和內(nèi)涵。疏肝、健脾和疏肝健脾法則分別為肝郁、脾虛、肝郁脾虛證而設(shè)立,其中疏肝健脾法在內(nèi)涵上包括了疏肝解郁和益氣健脾兩法。柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君湯分別是中醫(yī)疏肝、健脾、疏肝健脾的代表方,其中柴疏四君湯是由柴胡疏肝散和四君子湯合方而成,因此理論上認(rèn)為,3方與肝郁脾虛證之間有一定的關(guān)聯(lián)性,其中當(dāng)以柴疏四君湯與之關(guān)聯(lián)的程度最大,所謂“方證對(duì)應(yīng)”。本研究則是通過比較相關(guān)方劑對(duì)同一肝郁脾虛證模型的作用,以探討不同方劑與證之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系。研究采用慢性束縛+飲食失節(jié)+游泳疲勞復(fù)合法復(fù)制肝郁脾虛證大鼠模型。實(shí)驗(yàn)觀察到,造模兩周時(shí),模型大鼠即表現(xiàn)出類似中醫(yī)的肝郁脾虛之象。隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng),模型大鼠體重增長(zhǎng)也呈減慢的趨勢(shì),表明模型大鼠存在生長(zhǎng)代謝方面的異常。上述結(jié)果與之前造模所觀察到模型大鼠的外觀行為變化基本一致。臨床曾觀察到,肝郁脾虛證患者伴有植物神經(jīng)功能的失調(diào),其中以副交感神經(jīng)偏亢為多;肝郁脾虛證患者血漿腎上腺素、去甲腎上腺素水平均明顯低于健康人。已知體溫變化與植物性神經(jīng)調(diào)節(jié)功能有關(guān),通常體溫上升期交感神經(jīng)興奮性增高,體溫下降時(shí)副交感神經(jīng)緊張性增強(qiáng)。不過之前有關(guān)肝郁脾虛證的研究很少涉及對(duì)體溫的觀察,本研究在對(duì)大鼠外觀行為觀察的基礎(chǔ)上,增設(shè)了動(dòng)物體溫的測(cè)定,以完善對(duì)模型外觀表征的了解。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),造模1周時(shí)大鼠體溫開始降低,之后各點(diǎn)呈持續(xù)顯著性降低。結(jié)果提示模型大鼠可能存在下丘腦體溫調(diào)節(jié)或植物性神經(jīng)功能調(diào)節(jié)方面的異常,有待進(jìn)一步研究。實(shí)驗(yàn)觀察到,中藥3方給藥2周后均可使模型大鼠的外觀行為呈現(xiàn)不同程度的改善。其中柴胡疏肝散在改善模型大鼠的情緒、活動(dòng)度方面較為突出;四君子湯在改善大鼠皮膚毛發(fā)、飲食、大便等方面明顯,但對(duì)大鼠情緒方面的影響不及柴胡疏肝散;柴疏四君湯對(duì)模型大鼠的皮膚毛發(fā)、活躍程度、情緒反應(yīng)、飲食睡眠、大便等多個(gè)方面均有明顯的改善作用。結(jié)果表明,疏肝方和健脾方對(duì)肝郁脾虛證模型中的肝郁和脾虛有一定的選擇性作用,疏肝健脾方則對(duì)肝郁脾虛證有較全面的作用。提示中醫(yī)肝郁脾虛證中肝郁和脾虛在病機(jī)上具有一定的加和性。3方還可使模型大鼠體重和體溫呈現(xiàn)不同程度的改善,但在增加體重方面,僅柴疏四君湯的作用顯著;在改善體溫方面,3方均有顯著作用,但柴疏四君湯可使大鼠體溫恢復(fù)至正常,且作用優(yōu)于柴胡疏肝散。結(jié)合上述3方對(duì)模型大鼠外觀行為影響的結(jié)果,可以看出相關(guān)3方雖均對(duì)肝郁脾虛證模型有一定改善作用,但疏肝方和健脾方僅對(duì)模型中部分異常變化有作用,而疏肝健脾方則在作用范圍和效度上均優(yōu)于其他2方。根據(jù)中醫(yī)“方證相關(guān)”的理論,即“方劑