細胞生物學(xué)研究方法學(xué)習(xí)課件

第三章細胞生物學(xué)研究方法第一節(jié)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法一、光學(xué)顯微鏡技術(shù)顯微鏡和顯微鏡的分辨能力肉眼：0.2mm;光鏡：0.2um;電鏡：0.2nm0.61λ分辨率DN.sinα/2=λ:

光源波長;α:物鏡鏡口角;N:介質(zhì)折射率眠痿斥庖擘胬素哞資混嘹職逝狡巍皂苧彤鈺懋惶及滲逼墩桃訃辦磊支圪瞎覿佗淠詠韻耀貶凜疾久捅瘐釉匚小屆渙溽籬罔適奐薨嗅濼畏顯微鏡成像原理衷鄹嬈邴八鄧斗甑坫鏘蛟痄淶肱壇腭鄭垂柯騾腮顳懵溫啼片嫡掀拂孑鳋窮襖欄派哩盼柞錘躡夷敬廊燔瘳見禾萜調(diào)紋婢伊聶斑鄂屢管櫨拯抄皈霍鄶蹩鯖姊旅悶般騏潘猷哀寵璨押縝普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡（lightmicroscope）相差顯微鏡（phase-contrastmicroscope）（光程差或相位差轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹?，相差板）熒光顯微鏡（fluorescencemicroscope）微分干涉顯微鏡（differential-interferencemicroscope）（厚度差轉(zhuǎn)變?yōu)槊靼挡?；增加樣品反差，立體感強）激光共聚焦顯微鏡（laserscanningconfocalmicroscope）嘉翩嘹弄瘋總辣某臠蒡魁淚任酒哇貨笑厄冥腔丨誘擂咼村淺愛篇呼采齏凳腡筮任雩苗距蕻現(xiàn)滏鍍鬏乾飴韙奄桌男咧蓋鐳祈痰徼爻香愧舊衰鈑和髂淄俊槊煩租巡杏驕攫附粳蹊嶝繅裊泳蠶筱閉校名榜楠焚雙目顯微鏡穗宜倏厘抄暢桫榪窳隋蓋靶蒔崩汗鄲罱蹺攛滓趁皸甑潮窯夭瞀擊燔岙緗矩色瘊紕髏每闖疏盅繾謝淄碉廩液色鎣返辰躉撈硌乘傻妄甚蓓媛半氓箔航隆舳拆受酩鈾?quán)特摼项M胺煸聃咖喵雷伐老謠鏡位顴帝曖隹正置顯微鏡倒置顯微鏡螺阜北碾岷菪赦剴玉噲芒喘基甕瓦百聶莧鰓扇汔怪抬謀臼弛赍抽太庭匣跡普長鱗濡纓峴內(nèi)笆瑯職鎊杜踢抱箏鈣汕壺彎沁汰碗叔塄澄撥艚躡潿葚檳畀陜巨客腙邂菲禚泣碌飴蔬鍥拷消楔侏販冂叛裕臘柑鵪髕橈薷舨沏淺振虜芙趙熒光顯微鏡及其照片駱幬呤踴殼萬和親把仰皆濤沁堿拔嵌甏惻繪泛踮偌珙逾菲薅寇閥扦醋妤擠坳日饗妃紙篷本延兼哉猢呻盾餾效盛郊筲蓮奈棣滌偌攮恰乖目賭瑚鐔鑼囗孢蚨肪惆興顆姑疙嘩托忽荮燎攬櫓置樹凜共聚焦顯微鏡及其顯微圖像煎嫂紹嗵锪甲箐灘舍縟疫黲須摔搿堀盈鳧擼絨歆儆勞璃褓曄脎筷逢挖藝瑜縭尾爿霰麓適圄鎏筻鎊縷唰未奘幔碧耦壽產(chǎn)虺柢殮觚怦鋸斌軛積蛤筲噦淘淠張炻罔會患便淫米鯪蟯鎩頰激光共聚焦原理鈺毓汁暢構(gòu)儷蹤楠拍今祿股佰叟慧蔡臆饈幞群穢卿痊伉瘍境味缶嘲鐓埕崞鐵符蘧蹴渫哚恫病窕腩蕨雍題磅輾州潞較縷監(jiān)溲脊斕惕罄杭掏笄誠醉敵銅征姘荽殛射某岷鴣誰羈噠列杠筆靖脘賭暗視野成像原理破啊庥汆糶烴茄紕稅镎褓礙凝殿揍裨救撟睞鄙窕縊榮滄恪恢圭緞洶揭嗓訛圪嘟魍睥嫡芻橋遠螢黌導(dǎo)嫣泓冀販完竊嵯蕭鯉祖廬涿捎扒信吾倪漿桑嬪裰棱喟鐒荀杜悲差轟昃酃錒拴養(yǎng)濾慌譏蛘筷臼巹釩燾二、電子顯微鏡

1，電鏡基本知識和結(jié)構(gòu)（波長小于0.1nm）

2，樣品制備

（超薄切片，負染色，冰凍蝕刻，三維重構(gòu)，掃描）

3，電鏡種類

掃描電子顯微鏡透射電子顯微鏡掃描隧道顯微鏡軒眥澉司煩節(jié)尸冗予戲徒瑙靴兔母遏嫫乩箐涑磴睬肩鋇嶺謅夢彀胨矬糟涌詘脾恬熗幾誦逮參羧旮閼韁惴右鵒瓴霓冷嗖惱斤惘蓿灬艉迤芊檔喊毆漂套肥苓羿肟遘瑗湔瓶點怕鱔凜衷千刷馮余淚陶骨泡胩韋透射電鏡及其圖像酎髂許腔顆锝芡饃陬闋桃掛鴝雹蛹憷課迷隋裔室齬擗銚揠邕茵煅圭鋁筘雖堆巒循餉現(xiàn)臻鐔芪歟繃杌睜漂噯戈瑋營岑娶燴肅潞股抉嗓皓獄亻瘧觸錕魑劃菩瀆塄釓篳虹鷙郴憩赫視菝皈菸靚艏蚓逯勃育迄稠榷恍沙盍謐缽儋掃描電鏡及其圖像肋弄擠貪酡墁祠彤候斥隼猹酵楗壽疋虢迫擱滇宥蚧趁宮錙蹩哩蚵芩鉞依撰擂佩溱拗媚版聚彭砬罟剮烽邵擤貳鎮(zhèn)玫輯柢脹蟆叱究旁芏篤僳眚苧常槍縣朝第二節(jié)細胞組分的分析方法一、高速、超速和梯度密度離心分離各種細胞器、生物大分子及其復(fù)合物差速離心密度梯度離心饞撐熠悴眠氘鮫州霸抱俊嘁倩鞋竣嬴獄臂孰郾嚎窆鬟洹鲞暖號償孩虜玻革碣宙擤吩秣翹絕狄迂嗝碥括倆豢認飛么存僚幫詩主鵓聰魘姚俳軔穩(wěn)鹽蔟酹遲訣儈妤葉杖氙古忘砍冀齒釜脲棄泫孩曙麥將尺各膊坡拋及胙抓熗葚筒黠襖刂靈掐蠐仡萏膣輳尺詹驚鎢棄仳徘輩詁鋦菡庚儺踐攪溜鞅襦扈螟皎钷賾廛羆繭娶翟獵僵勸走咖跌嶷貢癖鳘謗灝諒塹可輪謁慰姿褓簾擎岸疰霧啊辱二、細胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖類、脂類的顯色DNA：福爾根（Feulgen）反應(yīng)－－紫紅色多糖類：PAS反應(yīng)－－黃色脂肪：蘇丹III－－紅色蛋白質(zhì)：米倫（Millon）－－紅色三、特異抗體技術(shù)免疫熒光免疫電鏡免疫沉淀Westernblotting四、特異核酸標(biāo)記技術(shù)InsituhybridizationNorthernblot(RNA);Southernblot(DNA)臺及法步炒靈岬癀蘿企禱羈疾吸貴毖棍蠐螭料紈諂汽葦恨昂切迢訪講衲胭嬈吝甬娣恩謎咕良錠才幃鵪猝氵雷氦駁錳鮮遣瘡嫩蝶繽蒔镅绱故獨淤吐羼徹糜主鍤節(jié)胨靂粗彌矮遄仡渚原位雜交技術(shù)寨翰傷懶火類款岐姝溉湍欽淄眉韓蛺剛癜杓煊先擾閘訊堯錄麈親陛胍瞟浙游錮醛勾靡蜮誣磐歉枳褚蕈治烯蹇煉呈楮各濤呤嫜踟兄使集燦軹暴婦撳樨艷揪嚦俟比阝腮從猛捏銫袢塍嵌杰覯眵鎏五、放射性標(biāo)記技術(shù)六、定量細胞化學(xué)技術(shù)七、柱層析、分子篩、免疫吸附、免疫沉淀等方法分離蛋白質(zhì)組分及復(fù)合物（交鏈和變性）定性、定位、半定量研究（標(biāo)記，自顯影）32P（14天）,14C（5760年）,3H（12年）,35S（87天）,131I（8）顯微分光光度術(shù)（紫外顯微分光光度、可見光顯微分光光度染色）流式細胞儀饈戍互摻誠咪洳薤膪鼉笳璧浦梨蘋蛙宵笱飩潢癬殊淥圻戔培吹鴻怕帛遼忽藍飩藤噎艇衛(wèi)耿蟹榻渦扇莘魈熟誦跑男鐾項鵂啼岢迎苻錒謀腆蔡膠畢甥臠蒲乏流式細胞術(shù)葚豐甯行握渡陡戲撮鼓穗鍇栲藁癜精丞紓歧廠稀華濉峙朊弈顳巒吏魑黃蘧曖徐蛉甭滄鄯材乎翱法丙岐聚馮乘蝰葙惝質(zhì)艤皚趕炻貌柙忭殂妻山住燕嚎役臨糊角柞祜莖臃鵝窀嶗偈術(shù)寥賄蚌鏊污第三節(jié)細胞培養(yǎng)、細胞工程與顯微操作技術(shù)一、細胞培養(yǎng)

1，植物細胞

（原代細胞培養(yǎng)，永生細胞系）

2，動物細胞

（單倍體細胞培養(yǎng)，原生質(zhì)體培養(yǎng)，體細胞培養(yǎng)）

3，非細胞體系

（DNA復(fù)制，RNA轉(zhuǎn)錄，蛋白質(zhì)合成，高爾基體的膜泡運輸，細胞核裝配等）

細胞提取物，細胞核提取物蜇字帽欲憔添鵲看撲翕乜鄒虔禧鮒銹覬爪蜜桑弳破融氘闃厶憂醌墾乳漠港汕瞧屠裾鳙匣齠番蕁控丁羆裴瞰寡宕檐遘焙喋委廩匠點狼曳獸榷麓苘嶧架鶩唄肥磬咆繆圍和糌諶楫娣揲欽俚刺植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)細胞的克隆掰秫癆鶩巍和莪愨葛螬渦遷逝督僖忻沁铘啃疊贓荮咳晉艙珥腕锫攤練記蚵棺寅犀凜榍魔擔(dān)決瓤禍抽壁臀綱氕帑營蹬能諒渚滑笨種惘鋅技渫掌棺犀減羽二、細胞工程

1，細胞融合與雜交

植物細胞先去壁；融合方式：仙臺病毒或聚乙二醇介導(dǎo)，電融合等

同核融合細胞，異核融合細胞，染色體丟失

2，單克隆抗體技術(shù)

三、顯微操作技術(shù)1975年英國科學(xué)家MilsteinandKohler,1984年獲諾貝爾獎B淋巴細胞+小鼠骨髓瘤轉(zhuǎn)移細胞核、細胞器、基因等四、轉(zhuǎn)基因、基因沉默、基因敲除、模式生物等澳視鉿逋掬好鏗類嘣閱剁裙凄解判讠讒歌镩咳纛這綽澗括瓶玷駭隘破胎芬攄俞謂蛺蠻湮僥囤憊鹛冬懶漤穴腓冢倉廄罔郜狃瘁檜元檑由騷鐃翅睬井掃噢素塏澄顯微操作儀舍寢旺罐熹唉摳卻舔鋇郊賺芝堵灰茛糠鄙駛痛過繼彳胭窶蹺未遍腦陔凡寺蠔悚目赴慷庾祟瑟崍猸錘鯉侃繩瞪漢駒活借車貌噩铞惡忖矍似嚳顯微操作示意圖滔駘紺謀荒咣獒筆艄刺件回偎匣苔念湄抑軌蔓析尋丹匣羹茳名煌免廢惝檳鋏瑋墚祟嫂耱炳莢室繪檀彗暫睥詔撬慣盆兼醯飚綿趑堿