真菌基因組DNA快速提取試劑盒操作方法及步驟說明書

杭州昊鑫生物科技股份“://hzhxbio/“htpp://hzhxbio杭州昊鑫生物科技股份“://hzhxbio/“htpp://hzhxbio--1-真菌基因組DNA快速提取試劑盒名目號：DN41DN4101DN4102DN4103

包裝單位50次100次200次適用范圍：適用于快速提取真菌組織細(xì)胞基因組DNA試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性：試劑盒組成AP1AP2

保存-20℃

50次250μl25ml10ml

100次500μl50ml20ml

200次1ml100ml40ml緩沖液AP3/EWB

15ml 25ml 50ml室溫 第一次使用前按說明加指定量乙醇15ml 25ml 50ml室溫 第一次使用前按說明加指定量乙醇洗脫緩沖液EB 室溫吸附柱AC 室溫收集管〔2ml〕 室溫

15ml50個(gè)50個(gè)

20ml個(gè)100個(gè)

40ml個(gè)200個(gè)12個(gè)月不影響使用效果。杭州昊鑫生物科技股份“://hzhxbio/“htpp://hzhxbio杭州昊鑫生物科技股份“://hzhxbio/“htpp://hzhxbio--2-儲存事項(xiàng):、AP3/E低溫時(shí)可能消滅析出和沉淀，可以在65℃水浴幾分鐘幫助重溶解〔AP3參加乙醇前可加熱，參加乙醇后不行加熱，恢復(fù)澄清透亮后冷卻到室溫即可使用。pH蓋緊蓋子。產(chǎn)品介紹：DNA吸附柱和型獨(dú)特的溶液系統(tǒng)，適合于從真菌組織細(xì)胞中快100mg20mg枯燥需要用到耗時(shí)的異丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖類、酚類和酶抑制物等DNAPCR、酶切和雜交等試驗(yàn)。〔細(xì)胞〕磨碎后經(jīng)裂解液裂解；蛋白質(zhì)、多糖、細(xì)胞殘片通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。產(chǎn)品特點(diǎn)：可重復(fù)性好。抑制了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。快速，簡捷，單個(gè)樣品操作一般可在1小時(shí)內(nèi)完成。數(shù)種去多糖、多酚成份和屢次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反響。留意事項(xiàng)使用轉(zhuǎn)速可以到達(dá)13000rp如Eppendorf5415C或者類似離心機(jī)。開頭試驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到65℃?zhèn)溆谩＞彌_液AP3/E中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避開沾染皮膚，眼睛和衣服。假設(shè)沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。不同來源的真菌組織細(xì)胞材料中提取DNA100mg穎組織典3-25μ。洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，也可以使用水洗脫，但應(yīng)當(dāng)確保pH7.5，pHDNA應(yīng)當(dāng)〔10mMTris-HCl，1mMEDTpH8.0EDTA真菌種類簡單，沒有一種試劑盒可以提取全部種類的真菌DNA。假設(shè)有的真菌多糖多酚含量過于豐富、次級代謝產(chǎn)物太簡單導(dǎo)致本試劑盒效果不佳，可以選擇DN14CTABDNA提取試劑盒提取真菌，一般該試劑盒對于多DNA提取效果良好。操作步驟：〔試驗(yàn)前請先閱讀留意事項(xiàng)〕提示：第一次使用前請先在漂洗液WB中參加指定量無水乙醇，充分混勻，參加后請及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已參加乙醇，以免屢次參加!第一次使用前請先在緩沖液AP3/E中參加指定量無水乙醇!取適量真菌組織在研缽中參加液氮充分碾磨成細(xì)粉。離心管，不要解凍，參加400μlAP14μlRNaseA(10mg/ml)，旋渦振蕩，充分混勻幫助裂解。10秒的步驟幫助裂解。大多數(shù)狀況下不需要離心去除未完全裂解的組織，由于后面有一個(gè)離心去除的步驟。AP1參加2%PVP40，000;多酚含量特別高AP10.2%beta巰基乙醇。也可兩者同時(shí)參加。65102-3次，混合樣品。130μl緩沖液AP2514,000rpm5-10分1.5ml離心管，留意不要吸到界面物質(zhì)。1.5AP3/E請先檢查是否已參加無水乙醇!吹打混勻。AP3/E可能會消滅絮狀沉淀，但不影響DNA提取。留意將AP3/E直接參加到上清并馬上吹打混勻?！舶赡芟麥绲某恋鞟C〔吸附柱放30-60秒，倒掉收集管中的廢液〔650μl離心，棄廢液，再參加剩余的溶液，再次離心。600μlW〔請先檢查是否已參加無水乙醇!12,000rpm30棄掉廢液。600μlWB，12,000rpm30秒，棄掉廢液。漂洗液中殘留乙醇抑制下游反響。取出吸附柱AC吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩rpm1分鐘。將得到的溶液重參加2分鐘，12,000rpm1分鐘。洗脫體積越大，洗脫效率越高，假設(shè)估量和需要產(chǎn)量高，可增大洗脫體積，假設(shè)需要DNA但是最小體積不應(yīng)少于50lDNADNA產(chǎn)量。假設(shè)要長時(shí)間存放，可以放置在－20℃。問題與解決方法問題 評論與建議DNA產(chǎn)量低

*處理材料過量或者裂解不完全-建議：使用適量的起始材料，充分研磨或者勻漿*結(jié)合條件不恰當(dāng)-建議：51.5倍體積AP3/E量要準(zhǔn)確RNA殘留未提取到DNA

*RNA含量太豐富-建議：提高RNaseA處理濃度*漂洗液WB中遺忘加無水乙醇-建議：第一次試驗(yàn)時(shí)，在漂洗液WB中參加指定量無水乙醇。*研磨裂解不充分，團(tuán)塊多；裂解物太粘稠；離心力太小-建議：參離心柱堵塞 見步驟2，加一個(gè)離心步驟去除；減低起始材料量，不要處理過量，加大離心力洗脫下來的DNA溶液帶顏色或者膜上有明顯的色素殘留

*漂洗次數(shù)不夠-建議：8500μl乙醇再漂洗一遍*起始材料太多過量-建議：削減起始處理材料，不要過量洗脫下來的DNA產(chǎn)量低

*離心柱殘留有較多乙醇或者底部不慎沾有乙醇-建議：確保做了步9，否則殘留乙醇會影響洗脫效率。*使用了水或者其它非最正確液體代替洗脫緩沖液-建議：認(rèn)真閱讀步105和只使用洗脫緩沖液EB洗脫。*洗脫緩沖液量偏低-建議：200μl洗脫緩沖液洗脫特別偏高DNA下游酶切不能切開或者酶切不完全

*一些硅基質(zhì)膜成分一起洗脫下來，干擾了吸光值-建議：將洗脫的DNA1