專題一基因工程的基本操作程序1

復(fù)習(xí)提問：1、基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，并通過和等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是在進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫做DNA重組技術(shù)。2、基因工程中的限制酶：來源、作用和結(jié)果。3、基因工程中的針線：種類、來源、作用。4、基因工程中的運(yùn)載體：種類、特點(diǎn)。體外DNA重組轉(zhuǎn)基因DNA分子水平上ATCATGGCTT

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ADNA連接酶CGCTT

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AGAATTDNA聚合酶基因工程的基本操作程序1、目的基因的獲取2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4、目的基因的檢測與鑒定第一步：目的基因的獲取1、目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因2、方法：1)、人工合成2)、從基因文庫中獲取3)、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增(基因比較小，序列)基因文庫基因組文庫部分基因文庫－－如：cDNA文庫聚合酶鏈?zhǔn)椒错懟蛭膸?/p>

基因組文庫部分基因文庫（如:cDNA文庫）基因文庫？將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫從基因文庫中獲取目的基因從基因文庫中獲取目的基因依據(jù)：1、基因的核苷酸序列2、基因的功能3、基因在染色體上的位置4、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物—mRNA5、基因的表達(dá)(翻譯)產(chǎn)物—蛋白質(zhì)受體菌的整個(gè)群體包含了這種生物的全部基因基因組文庫的構(gòu)建模式圖基因組文庫與局部基因文庫的關(guān)系cDNA文庫的構(gòu)建模式圖雜交雙鏈(單鏈RNA/單鏈DNA)單鏈DNA反轉(zhuǎn)錄酶雙鏈DNA(cDNA)某種生物的mRNA某種酶DNA聚合酶與載體連接后導(dǎo)入受體菌貯存，組成cDNA文庫原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)啟動(dòng)子終止子內(nèi)含子外顯子

啟動(dòng)子終止子真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼序列轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄mRNA翻譯多肽鏈初始mRNA剪接成熟mRNA翻譯多肽鏈出核孔原核、真核基因表達(dá)比較啟動(dòng)子

.VS.起始密碼/終止子

.VS./終止密碼存在分子：作用：DNA(基因)啟動(dòng)/終止轉(zhuǎn)錄mRNA起始/終止翻譯mRNA中存在啟動(dòng)子/終止子的序列嗎？存在外顯子/內(nèi)含子嗎？①概念：PCR全稱為_______________，是一項(xiàng)在生物____復(fù)制________________的核酸合成技術(shù)③條件：②原理：__________聚合酶鏈?zhǔn)椒错戵w外特定DNA片段DNA復(fù)制基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸1對引物DNA聚合酶(Taq酶)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因能量變性復(fù)性延伸1.變性〔90℃-95℃〕雙鏈DNA模板在熱作用下，_____斷裂，形成________氫鍵單鏈DNA2.復(fù)性

(55℃-65℃)溫度降低，

與DNA模板結(jié)合，形成局部______。雙鏈引物3.延伸〔70℃-75℃〕在的作用下，連接，合成與模板互補(bǔ)的DNA鏈。脫氧核苷酸Taq酶(二)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因DNA復(fù)制PCR技術(shù)不同點(diǎn)解旋方式場所酶溫度條件引物聯(lián)系PCR技術(shù)與DNA復(fù)制的比較解旋酶催化高溫變性解旋細(xì)胞內(nèi)主要在細(xì)胞核內(nèi)細(xì)胞外主要在PCR擴(kuò)增儀內(nèi)解旋酶、普通的DNA聚合酶等耐熱的DNA聚合酶〔Taq酶〕細(xì)胞內(nèi)溫和條件需控制溫度，在較高溫度下進(jìn)行需要〔一對〕不需要模板、原料均相同、均需能量。第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建〔核心〕2、基因表達(dá)載體的組成？①使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代②使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用啟動(dòng)子目的基因終止子標(biāo)記基因1、基因表達(dá)載體構(gòu)建的目的？〔P162〕抗生素抗性基因質(zhì)粒DNA分子限制酶處理兩個(gè)切口（位點(diǎn)）獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種一個(gè)切口(位點(diǎn))兩個(gè)黏性末端用相同的限制核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因和載體DNA〔如質(zhì)粒〕，目的基因和載體DNA的兩端形成相同的黏性末端，在DNA連接酶的作用下，將目的基因和載體DNA連接在