凝膠滲透色譜(GPC)、凝膠色譜安全操作保養(yǎng)規(guī)定

凝膠滲透色譜(GPC)凝膠滲透色譜(GelPermeationChromatography,GPC)是一種可用于分離不同分子量的聚合物、蛋白質(zhì)等大分子量生物大分子的技術(shù)。GPC技術(shù)很大程度上提高了生物醫(yī)藥和化學(xué)材料中高分子量物質(zhì)的研究難度。GPC技術(shù)主要基于分子量不同的生物大分子通過列裝固定流動相的樹脂柱，隨著分子量的增加，進(jìn)而通過彌散和流動物質(zhì)的進(jìn)入粒子內(nèi)部而進(jìn)行分離。在GPC操作中，固定相吸附有SIZEEX凝膠，凝膠內(nèi)存在三種不同孔徑的樹脂，分別是SDV、SDVB、和SDVBG，用于分離不同分子量的生物大分子。GPC實驗原理GPC實驗涉及可進(jìn)行分離和定量所測試分子的純化分離，需要先利用某種氣體或流體作為載流相，在不同孔徑尺寸的固定流動相中穿行。由于不同分子的大小不同，在穿行不同樹脂柱時將會發(fā)生吸附行為，使得顆粒徑向內(nèi)部隨其樹脂中所需開啟的具有特定功能鍵的孔徑匹配固定相互作用，從而逐漸分離成分子量不同的組分。GPC實驗流程根據(jù)實驗設(shè)定用所需柱或不同種類的孔徑尺寸進(jìn)行裝柱和準(zhǔn)備固定相包裝物，固定流動相的選擇通常有三種固定相可以選擇，分別是SDV、SDVB、和SDVBG，用于分離不同分子量的生物大分子;等到固定相吸附完全后，用一定的速度和壓力進(jìn)行載流相的穿行;激活洗滌劑，并用洗滌液將固定物徹底清洗干凈;化合物經(jīng)過固定流動相孔徑進(jìn)入其中而分離出不同分子量的生物大分子組分;最后通過檢測不同的分子量計算出不同分子量的生物大分子的百分比濃度。GPC實驗注意事項在使用GPC進(jìn)行實驗時，需要注意以下事項：安裝穩(wěn)定：進(jìn)行好的GPC實驗需要具有相應(yīng)的穩(wěn)定性，并不易受到外界干擾，固定流動相必須牢固安裝且固定良好;樣品的使用：樣品應(yīng)該與載流相處于相同溫度下并與固定流動相匹配;流速的設(shè)定：流速的設(shè)定在GPC實驗過程中非常重要，在調(diào)整時避免出現(xiàn)工藝偏差和誤差;測試方法：實驗進(jìn)行的過程中需要合理的進(jìn)行檢測方法選擇，常用的檢測方法包括UV、CD、NMR、MS等。凝膠色譜安全操作保養(yǎng)規(guī)定分子生物實驗室必須組織專人對GPC儀器的維護(hù)保養(yǎng)，通常情況下每周進(jìn)行一次，各個部分的問題需要及時反饋到維護(hù)人員，確保儀器良好工作;在使用GPC儀器進(jìn)行實驗時，應(yīng)該嚴(yán)格按照學(xué)校或機(jī)構(gòu)的安全操作規(guī)定進(jìn)行相關(guān)操作，所有相關(guān)使用者也必須遵守使用規(guī)定操作;在操作中應(yīng)該注意安全和防范措施，避免造成二次污染和傷害等安全事故;在使用儀器過程中注意對儀器的耗材和固定流動相的替換，保持穩(wěn)定突襲。總之，在進(jìn)行GPC實驗時，需要