口腔微生物分子生物學(xué)

口腔微生物分子生物學(xué)武漢大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院邊專什么是遺傳物質(zhì)？蛋白質(zhì)20種氨基酸DNA四種堿基轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的結(jié)果說(shuō)明……生命的主要遺傳物質(zhì)脫氧核糖核酸（DNA）DNA結(jié)構(gòu)的推衍Chargaff:T+C=A+G A=T G=CX線衍射：

DNA在兩條鏈組成，相互平行核酸的組成DNA RNA脫氧核糖 核糖腺嘌吟胞嘧啶 腺嘌呤胞嘧啶鳥嘌呤胸腺嘧啶 鳥嘌呤尿嘧啶雙鏈 單鏈DNA復(fù)制半保留復(fù)制DNA復(fù)制半不連接復(fù)制由于DNA多聚酶只能從5’→

3’方向合成DNA，因而半保留復(fù)制不能完全解釋。DNA復(fù)制的特點(diǎn)新合成的子代DNA與親代DNA完全一樣，保證了遺傳的穩(wěn)定性。RNA信使RNA（mRNA)核蛋白體RNA（rRNA)轉(zhuǎn)運(yùn)RNA（tRNA)RNA的生物合成——轉(zhuǎn)錄以DNA為模板合與RNA由RNA多聚酶合成從DNA上特定起始序列（啟動(dòng)子）開始，至終止信號(hào)結(jié)束蛋白質(zhì)的生物合成——翻譯遺傳密碼

由3個(gè)連續(xù)的核苷酸組成蛋白質(zhì)的生物合成——翻譯蛋白質(zhì)合成過(guò)程Ⅰ.氨基酸活化Ⅱ.蛋白質(zhì)合成的起始AUG→甲?；琢虬彼幔╢Met)Ⅲ.蛋白質(zhì)合成的終止終止碼UAA、UGA、UAG蛋白質(zhì)的生物合成——翻譯新生多肽的加工Ⅰ.fMet水解Ⅱ.磷酸化、糖基化、甲基化修飾Ⅲ.信號(hào)肽蛋白質(zhì)向細(xì)胞外分泌基因表達(dá)DNA→RNA→蛋白質(zhì)豐富的生命現(xiàn)象基因表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)體的每一個(gè)細(xì)胞都有一套完全相同的基因共同表達(dá)的基因特異性表達(dá)的基因基因表達(dá)的調(diào)節(jié)共同表達(dá)的基因維持細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)、功能基因表達(dá)的調(diào)節(jié)特異性表達(dá)的基因紅細(xì)胞產(chǎn)生血紅蛋白B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體成牙本質(zhì)細(xì)胞分泌牙本質(zhì)蛋白基因表達(dá)調(diào)控的原因動(dòng)力細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞間，或細(xì)胞與外界環(huán)境間關(guān)系的變化。基因表達(dá)調(diào)節(jié)的方式啟動(dòng)子強(qiáng)啟動(dòng)子與RNA多聚酶有較強(qiáng)的結(jié)合能力，轉(zhuǎn)錄水平較高；弱啟動(dòng)子則反之?；虮磉_(dá)調(diào)節(jié)的方式調(diào)節(jié)蛋白的作用—負(fù)向調(diào)節(jié)—正向調(diào)節(jié)負(fù)向調(diào)節(jié)乳糖操縱子學(xué)說(shuō)正向調(diào)節(jié)原核生物基因表達(dá)的調(diào)節(jié)主要在轉(zhuǎn)錄水平真核基因生物調(diào)節(jié)多層次復(fù)雜性分子克隆技術(shù)限制性內(nèi)切酶特定的識(shí)別序列，4~6個(gè)堿基對(duì)在識(shí)別序列內(nèi)固定位置切割，5’–端磷酸基因，

3’-端羥基基團(tuán)切割后形成粘性或平滑末端DNA連接酶催化DNA中相鄰3’羥基和5’磷酸基團(tuán)之間形成3’，5’–磷酸二酯鍵。質(zhì)粒細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立于染色體外的環(huán)狀DNA，能自我復(fù)制其上基因可借助宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄、翻譯系統(tǒng)得以表達(dá)分子2000~50000bpTpGEM

-TVector(3003bp)AmprlacZoriXmnI1994ScaI1875NaeI2695ApaIAatIISphIBstZINcoISacIIT7SpeINotIBstZIPstISaLINdeISacIBstXINsiISP6T1start14202631374655626273758294103112126

pGEM-TvectormapXhoISmaIXhoISmaIXhoISmaIpCIpCIA-PpGEM-T/A-P

A-PfragmentSub-cloningconstructionofrecombinantpCIA-PinsertionofA-PDNAfragmentintoplasmidpCIXhoISmaIT4LigaseA-Pfragment構(gòu)建質(zhì)粒的特點(diǎn)Ori區(qū)：復(fù)制起點(diǎn)Par區(qū)：保證質(zhì)粒均勻分布于子細(xì)胞多克隆區(qū)：人為構(gòu)建，便于克隆操作選擇因子：含特定基因，如耐抗生素基因，使克隆后便于挑選接合在適當(dāng)?shù)臈l件下，雄性菌和雌性菌混合時(shí)形成配對(duì)的雄性-雌性菌，并有遺傳物質(zhì)的單向轉(zhuǎn)移。雄性菌：含F(xiàn)性因子，染色體外環(huán)狀DNA轉(zhuǎn)化外源DNA能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)并通過(guò)整合至宿主DNA中或獨(dú)立復(fù)制保存于宿主細(xì)胞內(nèi)。轉(zhuǎn)錄利用噬菌體為媒介，將供體DNA轉(zhuǎn)移到受體菌內(nèi)的現(xiàn)象，能在自然狀態(tài)下發(fā)生。分子克隆常用技術(shù)DNA電泳基因轉(zhuǎn)移核酸雜交聚合酶鏈反應(yīng)PCRDNA電泳可分離不同分子量的DNA

Ladder1234567891011121314Ladder對(duì)臨床菌株的第二次PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖譜分析

Lane1~7:臨床菌株S.sobrinus;Lane8~14:臨床菌株S.mutans.(Kb)2.01.00.250.10.750.5MW核酸雜交原理：在一定條件下（溫度、pH值等）DNA雙股螺旋可解開并分離在一定條件下，兩股游離的互補(bǔ)的核苷酸可自行配對(duì)形成雙股SouthernBlot電泳、轉(zhuǎn)移、雜交確定分子量斑點(diǎn)雜交目標(biāo)序列的存在目標(biāo)序列的量聚合酶鏈反應(yīng)PCR與齲病相關(guān)微生物的定量檢測(cè)方法細(xì)菌形態(tài)生化反應(yīng)免疫反應(yīng)分子生物學(xué)方法----