當歸六黃湯分煎樣品與合煎樣品中阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷含量的比較

當歸六黃湯分煎樣品與合煎樣品中阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷含量的比較【摘要】目的對當歸六黃湯分煎樣品與合煎樣品中阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷的含量進行比較，從而為其提供依據(jù)。方法均采用反相液相色譜法，DIKMAODSC18柱(5μmmm×250mm)，以％磷酸－乙腈為流動相梯度洗脫，流速為ml·min-1，柱溫：35℃，檢測波長為326nm測定阿魏酸。以乙腈－%的三乙胺為流動相，流速為ml·min-1，柱溫：30℃，檢測波長為343nm測定鹽酸小檗堿。以甲醇水－磷酸(55∶45∶)為流動相，檢測波長為280nm，流速為·min-1，柱溫30℃測定黃芩苷。結(jié)果3個指標性成分在分煎樣品中平均含量均大于合煎樣品中平均含量。結(jié)論從中藥復方湯劑中指標性成分的含量考慮，當歸六黃湯配方顆粒應用于臨床具有一定的可行性。

【關(guān)鍵詞】當歸六黃湯；阿魏酸；鹽酸小檗堿；黃芩苷

ChinaAbstract：ObjectiveTocomparethecontentsofferulicacid、berberine、baicalininsinglemedicinedecoctionandmixedmedicinedecoctionofDanguiliuhuangdecoction，andtoprovideascientificbasisofDanguiliuhuangdecoctionforclinic.MethodsThesamplesweredeterminedbyHPLC.DIKMAODSC18column(5μm,mm×250mm)wasused，themobilephaseconsistedof%phosphoricacetonitrilewithflowrate·min-1，Thedetectionwavelengthwassetat326nmandthecolumntemparaturewas35℃andFerulicAcidwasdetected.Themobilephaseconsistedofacetonitrileandwaterwithflowrateml·min-1.Thedetectionwavelengthwassetat280nm，thecolumntempraturewas30℃andbaicalinwascontentsofferulicacid、berberine、baicalininsinglemedicinedecoctionwashigherthaninmixedmedicinecanbeusedinclinicasareference.

Keywords：Dangguiliuhuangdecoction；Ferulicacid；Berberine；Baicalin

當歸六黃湯出自李東垣《蘭室秘藏》，由當歸6g，生地黃6g，熟地黃6g，黃連6g，黃芩6g，黃柏6g，黃芪12g7味藥組成，藥材均為粗末。每服五錢，水兩盞，煎至一盞，口服［1］，主治陰虛火旺證。配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)湯劑的化學成分、藥效是否有明顯的差異，配方顆粒是否應廣泛應用于臨床，還存在爭論。本文以阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷的含量為指標，采用HPLC法比較該方中藥配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑制得的湯劑中指標性成分的含量是否有差異，從有效成分含量對比方面，為中藥配方顆粒應用于臨床提供一定理論依據(jù)。

1儀器與試藥

Aglient1100高效液相色譜儀(包括真空脫氣機，自動進樣器，四元泵，DAD檢測器)，HP1100/WIND3D化學站。當歸為傘形科植物當歸Angelicasinensia(Oliv.)Diels的干燥根，黃芩為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根，黃連為毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch.的干燥根莖，黃柏為蕓香科植物黃皮樹的干燥樹皮PhellodendronchinenseSchnd.黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根，地黃為玄參科植物地黃RehmanniaglutinosaLibosch.的新鮮或干燥塊莖。以上藥材均經(jīng)貴陽中院董麗莎教授鑒定。阿魏酸對照品、鹽酸小檗堿對照品、黃芩苷對照品均供含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇、乙腈為色譜純；水為純凈水；其它試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

分煎、合煎、陰性樣品的制備

分煎樣品稱取黃芪120g，先加8倍量的水，煎煮1h后過濾，濾渣加6倍量的水煎煮1h，過濾，合并濾液，濃縮，減壓干燥，粉碎。分別稱取生地、熟地、黃連、黃柏、當歸、黃芩各60g，按上述方法進行制備，即得各味藥材的浸膏粉。

合煎樣品按處方比例稱取各味藥材粗粉，加20倍量的水，煎煮至10倍量，過濾，濃縮，減壓干燥，粉碎，即得傳統(tǒng)湯劑樣品。

陰性樣品按處方比例稱取除當歸、黃連、黃柏、黃芩外的各味藥材浸膏粉，混合均勻，即得分煎陰性樣品；按處方比例稱取除當歸、黃連、黃柏、黃芩外的各味藥材，加20倍量的水，煎煮至10倍量，濃縮，減壓干燥，即得合煎陰性樣品。

色譜條件

阿魏酸色譜柱為DIKMAODSC18(5μm，250mm×)；流動相為％磷酸－乙腈梯度洗脫，0～31min乙腈％，31～40min乙腈60％，40～48min乙腈％；流速為ml/min；檢測波長為326nm，柱溫35℃。

鹽酸小檗堿色譜柱為DIKMAODSC18(5μm，250mm×)，流動相為乙腈－%三乙胺，，流速ml/min，檢測波長：343nm，柱溫：30℃。

黃芩苷色譜柱:DIKMAODSC18(5μm，250mm×mm)；流動相為甲醇水－磷酸(55∶45∶)；流速為ml/min；檢測波長為280nm；柱溫30℃。

對照品溶液的制備分別精密稱取阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷對照品適量，分別制成濃度為μg/L阿魏酸對照品溶液、μg/ml鹽酸小檗堿對照品溶液、μg/ml黃芩苷對照品溶液。

供試品溶液制備

阿魏酸供試品溶液分別精密稱取干燥的當歸六黃湯分煎與合煎浸膏粉約g，置250ml圓底燒瓶中，加70%甲醇100ml，稱重，加熱回流30min，放冷，補足減失重量，過濾，取續(xù)濾液過μm微孔濾膜即得供試品溶液，備用。

鹽酸小檗堿供試品溶液分別精密稱取干燥的分煎與合煎樣品約g，置具塞錐形瓶中，加鹽酸∶甲醇(1∶100)100ml，稱重，超聲處理30min，放冷，補足減失重量，過濾，取續(xù)濾液過μm微孔濾膜即得供試品溶液，備用。

黃芩苷供試品溶液分別精密稱取分煎與合煎浸膏粉約，置具塞錐形瓶中，加70％乙醇100ml，稱重，超聲處理45min，放冷，補足減失重量，過濾，取續(xù)濾液過μm微孔濾膜即得供試品溶液，備用。

線性關(guān)系考察分別精密吸取阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷對照品溶液適量各6份，分別置于10ml量瓶中，分別加入70％甲醇、鹽酸∶甲醇(1∶100)、70％乙醇定容制成不同濃度的阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷對照品溶液。精密吸取10μl注入色譜柱，測定峰面積，以峰面積對進樣量，繪制標準曲線，計算得阿魏酸回歸方程為A=5+6，r=7，在48～8μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；鹽酸小檗堿回歸方程為A=18，r=97在2～0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；黃芩苷回歸方程為A=2，r=95，在4～μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

精密度實驗分別精密吸取同一阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷對照品溶液10μl，連續(xù)進樣6次，在上述色譜條件下測定峰面積，結(jié)果RSD分別為％，％，%，表明精密度良好。

重復性實驗精密稱取同一批分煎浸、合煎樣品各6份，按上述供試品溶液的制備方法和色譜條件，分別測定3種成分的含量，阿魏酸分煎樣品RSD為%、合煎樣品RSD為%，鹽酸小檗堿分煎樣品RSD為%、合煎樣品RSD為%，黃芩苷分煎樣品RSD為%、合煎樣品RSD為%。結(jié)果表明方法具有良好的重復性。

穩(wěn)定性實驗按供試品溶液的制備方法處理得3種供試品溶液，照上述色譜條件，阿魏酸供試品溶液分別在0，，3，，6h測定，阿魏酸分煎、合煎樣品RSD分別為％，％，表明阿魏酸供試品溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定。鹽酸小檗堿供試品溶液分別在0，2，4，6，8h測定，鹽酸小檗堿分煎、合煎樣品RSD分別為％、％，表明鹽酸小檗堿供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。黃芩苷供試品溶液分別在0，2，4，6，8h測定，黃芩苷分煎、合煎樣品RSD分別為％，％，表明黃芩苷供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收率實驗分別精密稱取已知含量的分煎、合煎樣品各9份，分別加入阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷對照品溶液，照供試品溶液制備項下方法處理，制備所需溶液。照以上色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果分煎樣品、合煎樣品中阿魏酸平均回收率分別為%，%，RSD分別為%，%；分煎樣品、合煎樣品中鹽酸小檗堿平均回收率分別為%，%，RSD分別為%，%；分煎樣品、合煎樣品中黃芩苷平均回收率分別為%，%，RSD分別為%、%。

樣品含量測定按供試品溶液制備方法分別制備樣品，在上述色譜條件下測定，結(jié)果：分煎樣品中阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷含量分別為：，，，RSD分別為%，%，%；合煎樣品中阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷含量分別為：，，，RSD分別為%，%，%。阿魏酸，鹽酸小檗堿，黃芩苷出峰位置陰性對照液無干擾。對照品、樣品色譜見圖1～3。

采用無重復雙因素方差分析比較分煎與合煎樣品間阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷含量差異，處理結(jié)果表明當歸六黃湯分煎樣品和合煎樣品中阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷3種指標性成分含量均有顯著性差異，且分煎樣品中3種指標性成分平均含量均高于合煎樣品中平均含量。

3討論

本實驗采用HPLC法測定當歸六黃湯中3種指標性成分的含量，在文獻報道［2～8］的基礎(chǔ)上結(jié)合《中國藥典》的記載，選定適合的流動相測定該3種成分，其與雜質(zhì)峰均能達到基線分離，方法簡單可行，重復性好。

當歸六黃湯配方顆粒湯劑中3種指標性成分的含量均高于傳統(tǒng)湯劑中的含量，采用方法分析其所得數(shù)據(jù)，得出兩種湯劑之間其含量存在著顯著性差異，因為方中含有阿魏酸和鹽酸小檗堿，在合煎過程中酸堿可能發(fā)生中和反應或其它化學成分間相互作用，從而影響了這3種指標性成分的溶出，但中藥復方成分復雜，其原因還需作進一步深入的考察。

【參考文獻】

1］李飛.方劑學［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：641.

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