404-ZL泰樂菌素發(fā)酵液檢驗(yàn)操作規(guī)程

泰樂菌素發(fā)酵液檢驗(yàn)操作規(guī)程編 號(hào)：SOP-ZL-404第1頁(yè)共5頁(yè)版本號(hào)：00制訂人/日期年月曰發(fā)放日期年月曰審核人/日期年月曰實(shí)施日期年月曰批準(zhǔn)人/日期年月曰頒發(fā)部門質(zhì)量科QA分發(fā)部門質(zhì)量科QC1目的：規(guī)定泰樂菌素發(fā)酵液及放罐發(fā)酵液的檢驗(yàn)操作方法，確保公司產(chǎn)品質(zhì)量。2范圍：適用于QC室檢驗(yàn)人員對(duì)泰樂菌素發(fā)酵液的檢驗(yàn)。3職責(zé)：QC室檢驗(yàn)人員對(duì)本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)。4內(nèi)容：4.1化學(xué)效價(jià)的測(cè)定4.1.1原理在0.1mol/L的鹽酸溶液中，泰樂菌素在290nm波長(zhǎng)處有最大吸收，可用紫外分光光度法進(jìn)行檢測(cè)。4.1.2試劑4.121O.lmol/L鹽酸：取濃鹽酸9ml,加純化水定容至1000m1,搖勻。標(biāo)準(zhǔn)曲線制備4.1.3.1取約25mg泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)品于50ml容量瓶中，精密稱定，用純化水溶解、定容、搖勻，配成含量約為500u/m1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml于25ml容量瓶中，用0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液定容搖勻。設(shè)定光度計(jì)檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm，使用1cm石英比色皿，以0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液作為空白溶液調(diào)節(jié)儀器零點(diǎn)，測(cè)量溶液吸光度，以吸光度為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。要求：相關(guān)系數(shù)r三0.999。4.1.3.2更換測(cè)定用儀器或儀器大修后需重新制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定方法4.1.4.1樣品預(yù)處理：a取樣品約30ml，用粉末狀分析純硫酸鋁調(diào)節(jié)pH值至2.5?3.0，濾紙過(guò)濾或用離心法泰樂菌素發(fā)酵液檢驗(yàn)操作規(guī)程編號(hào)：SOP-ZL-404第2頁(yè)共5頁(yè)版本號(hào)：00得到發(fā)酵液清液。b稀釋根據(jù)樣品的估計(jì)效價(jià)，用純化水稀釋，稀釋后溶液估計(jì)效價(jià)在300~700u/ml范圍內(nèi)。具體稀釋倍數(shù)見下表。樣品名稱稀釋倍數(shù)稀釋過(guò)程發(fā)酵液5精密量取1.0ml發(fā)酵液清液，加入4.0ml純化水10精密量取1.0ml發(fā)酵液清液，加入9.0ml純化水15精密量取1.0ml發(fā)酵液清液，加入14.0ml純化水20精密量取1.0ml發(fā)酵液清液，加入19.0ml純化水25精密量取1.0ml發(fā)酵液清液，加入24.0ml純化水放罐20精密量取1.0ml發(fā)酵液清液，加入19.0ml純化水4.1.4.2吸光度的測(cè)定精密量取樣品稀釋液0.5ml,加入0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液12ml。設(shè)定光度計(jì)測(cè)量波長(zhǎng)為290nm,使用1cm石英比色皿，以0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液作為空白溶液調(diào)節(jié)儀器零點(diǎn),測(cè)量溶液吸光度。4.1.5計(jì)算化學(xué)效價(jià)(u/ml)=(kXA+b)XN式中 k：標(biāo)準(zhǔn)曲線所得的直線斜率；A：所測(cè)樣品的吸光度；b：標(biāo)準(zhǔn)曲線所得直線截距；N：稀釋倍數(shù)。4.2HPLC法測(cè)發(fā)酵液組分4.2.1HPLC條件色譜柱：C184.6mmX250mm,5m檢測(cè)波長(zhǎng)：290nm泰樂菌素發(fā)酵液檢驗(yàn)操作規(guī)程編號(hào)：SOP-ZL-404第3頁(yè)共5頁(yè)版本號(hào)：00進(jìn)樣體積：20l柱溫：室溫流動(dòng)相：200g/l高氯酸鈉溶液：乙腈=60：40(pH值2.5±0.1)流速：1.0ml/min運(yùn)行時(shí)間：35分鐘記錄圖譜時(shí)間：1.5倍泰樂菌素A峰保留時(shí)間相對(duì)于泰樂菌素A的保留時(shí)間：泰樂菌素C~0.5A,泰樂菌素B~0.7A,泰樂菌素D~0.8A，泰樂菌素A峰的保留時(shí)間在11.0?14.0分鐘之間。試劑與溶液的配制4.2.2.1流動(dòng)相[200g/l高氯酸鈉溶液：乙腈=60：40(pH值2.5±0.1)]稱取360g高氯酸鈉于2000ml燒杯中，加入純化水，攪拌使溶解，稀釋至1800ml,用1mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2.5±0.1，用0.45pm的微孔濾膜過(guò)濾，倒入5000ml試劑瓶中，加入1200ml用0.45pm的微孔濾膜過(guò)濾后的色譜純乙腈，混合均勻備用。用時(shí)倒入1000ml試劑瓶中超聲15分鐘。注意：乙腈有毒，易揮發(fā)，操作時(shí)在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，佩帶防護(hù)手套，若不慎沾到皮膚上，立刻用清水清洗。50%乙腈溶液:量取用0.45pm的F型微孔濾膜過(guò)濾后的乙腈和純化水各500ml于1000ml試劑瓶中，搖勻。4.2231mol/l的鹽酸溶液：量取濃鹽酸10ml,加純化水至120ml。磷酸泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液：取約10毫克磷酸泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)品置于50毫升的容量瓶中，精密稱定，用50%的乙腈溶液溶解、定容、搖勻，轉(zhuǎn)至棕色瓶中，冷藏保存于冰箱內(nèi)。此標(biāo)準(zhǔn)溶液用于確定泰樂菌素C峰和A峰的保留時(shí)間。泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液：取約25毫克泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)品置于50毫升的容量瓶中，精密稱定，用50%的乙腈溶液溶解、定容、搖勻，轉(zhuǎn)至棕色瓶中，冷藏保存于冰箱中。4.2.3系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)泰樂菌素發(fā)酵液檢驗(yàn)操作規(guī)程編號(hào)：SOP-ZL-404第4頁(yè)共5頁(yè)版本號(hào)：00在分析樣品之前，先做系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，合格后方可進(jìn)行樣品檢測(cè)。精密量取20pl泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)5針，確認(rèn)系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)合格。泰樂菌素A峰的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于2.0%,理論板數(shù)不低于2000,泰樂菌素A峰與D峰分離度大于1.5,拖尾因子小于1.5。樣品溶液的制備取樣品約30ml,用硫酸鋁調(diào)節(jié)pH值為2.5?3.0,濾紙過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液1.00ml于一比色管中，加入19.00ml純化水，搖勻后用0.45pm的微孔濾膜過(guò)濾。測(cè)定精密量取續(xù)濾液20pl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。計(jì)算Ai泰樂菌素A%= x100%工AAi泰樂菌素B%= x100%工AAi泰樂菌素C%= x100%乙AAi泰樂菌素D%= x100%乙A式中Ai：被測(cè)含量組分峰面積；刀A：參與計(jì)算的全部峰面積之和。5相關(guān)文件及記錄泰樂菌素發(fā)酵液理化檢驗(yàn)記錄見附頁(yè)1泰樂菌素發(fā)酵液HPLC法檢驗(yàn)記錄見附頁(yè)2泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)曲線制備記錄見附頁(yè)3泰樂菌素發(fā)酵液HPLC法檢驗(yàn)報(bào)告單見附頁(yè)4發(fā)酵罐生產(chǎn)檢驗(yàn)批報(bào)記錄見附頁(yè)5

泰樂菌素發(fā)酵液檢驗(yàn)操作規(guī)程編號(hào)：SOP-ZL-404第5頁(yè)共5頁(yè)版本號(hào)：006文件變更歷史版本號(hào)變更日期變更描述變更人

記錄編號(hào)：R-SOP-ZL-404A泰樂菌素發(fā)酵液理化檢驗(yàn)記錄批號(hào)：周期： h檢驗(yàn)日期： 年月日時(shí)分室內(nèi)溫度： °C檢驗(yàn)儀器：離心機(jī)編號(hào)： 電熱恒溫水浴鍋編號(hào)：紫外-可見分光光度計(jì)編號(hào)： 泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)曲線編號(hào)：檢驗(yàn)過(guò)程：1化學(xué)效價(jià)1.1樣品預(yù)處理取樣品約30ml,用粉末狀分析純硫酸鋁調(diào)節(jié)pH值為2.5?3.0,濾紙過(guò)濾或用離心法得到發(fā)酵液清液。1.2樣品稀釋精密量取1.0ml發(fā)酵液清液，加入 ml純化水，即得樣品稀釋液。1.3吸光度測(cè)定精密量取樣品稀釋液0.5ml,加入0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液12ml。設(shè)定光度計(jì)測(cè)量波長(zhǎng)為290nm,使用1cm石英比色皿，以0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液作為空白溶液調(diào)節(jié)儀器零點(diǎn)，測(cè)量溶液吸光度 。1.4計(jì)算化學(xué)效價(jià)（u/ml）=檢驗(yàn)人： 復(fù)核人：備注：記錄編號(hào)：R-SOP-ZL-404B泰樂菌素發(fā)酵液HPLC檢驗(yàn)記錄批號(hào)：檢驗(yàn)日期年月日周期：流動(dòng)相編號(hào)：1檢驗(yàn)儀器儀器編號(hào)：色譜柱編號(hào)：2色譜條件檢測(cè)波長(zhǎng)： nm流動(dòng)相配比：流動(dòng)相流速： ml/min運(yùn)行時(shí)間：min進(jìn)樣量： gl3樣品溶液制備取樣品約30ml,用硫酸鋁調(diào)節(jié)pH值為2.5?3.0,濾紙過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液1.00ml于一比色管中，加入19.00ml純化水，搖勻后用0.45um的微孔濾膜過(guò)濾。4系統(tǒng)適用性：取對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5針，其峰面積分別為A1 、A2 、A3 、A4 、A5 對(duì)照品溶液峰面積RSD為 ;泰樂菌素A拖尾因子為 。5數(shù)據(jù)處理泰樂菌素發(fā)酵液組分（％）泰樂菌素A（%）泰樂菌素B（%）泰樂菌素C（%）泰樂菌素D（%）泰樂菌素總組分（％）供試品備注:附頁(yè)3文件編號(hào)：SOP-ZL-404 版本號(hào)：00記錄編號(hào)：R-SOP-ZL-404C泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)曲線制備記錄標(biāo)準(zhǔn)曲線名稱：標(biāo)準(zhǔn)曲線編號(hào)：標(biāo)準(zhǔn)品編號(hào)：曲線制備時(shí)間： 年月日儀器:紫外-可見分光光度計(jì)編號(hào):標(biāo)準(zhǔn)曲線制備過(guò)程：1標(biāo)準(zhǔn)溶液制備精密稱取泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)品 mg于50ml容量瓶中，用純化水溶解、定容，即得含量為 的泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液。2梯度稀釋：用吸量管分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液，按下表方式進(jìn)行梯度稀釋：編號(hào)標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(ml)一25ml濃度(mg/25ml)10.620.831.041.251.461.63標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算：按下表整理數(shù)據(jù)，以吸光度為橫坐標(biāo)，以濃度為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程。編號(hào)123456C(u/25ml)A(吸光度)泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)曲線公式為:r=批準(zhǔn)人:曲線啟用時(shí)間:批準(zhǔn)人:備注:記錄編號(hào)：R-SOP-ZL-404D泰樂菌素發(fā)酵液HPLC檢驗(yàn)報(bào)告單批號(hào)： 周期： h 報(bào)告單編號(hào)：送檢日期： 年 月 日?qǐng)?bào)告日期： 年 月 日檢驗(yàn)項(xiàng)目檢驗(yàn)結(jié)果HPLC法泰樂菌素A（%）泰樂菌素B（%）泰樂菌素C（%）泰樂菌素D（%）報(bào)告人：復(fù)核人：備注：文件編號(hào)：SOP-ZL-404版本號(hào)：00記錄編號(hào)：R-SOP-ZL-404D泰樂菌素發(fā)酵液HPLC檢驗(yàn)報(bào)告單批號(hào)： 周期（放罐）： h 報(bào)告單編號(hào)：送檢日期： 年 月 日?qǐng)?bào)告日期： 年 月