植物單細(xì)胞培養(yǎng)概論

植物單細(xì)胞培養(yǎng)方法小組成員：胡晏榕、高華、韋玉連、杜侶佩、楊迪、梁宇薇一、植物單細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)概念

1、植物的單細(xì)胞培養(yǎng)：在適宜的條件下，一個來自已分化的根、莖、葉等組織的細(xì)胞，經(jīng)過離體培養(yǎng)可以發(fā)育成同其親本一樣的完整植株。植物組織培養(yǎng)技術(shù)的重要理論基礎(chǔ)是植物細(xì)胞的全能性

植物的單細(xì)胞培養(yǎng)，在無菌和人為控制外因的條件下，培養(yǎng)、研究植物組織器官，甚至進而從中分化、發(fā)育出整個植株的技術(shù)。2、愈傷組織：原指植物體受傷時產(chǎn)生于傷口周圍的組織?，F(xiàn)多指切取植物體的一部分，置于含有生長素和細(xì)胞分裂素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生的無定形的組織團塊。3、外植體：把由活植物體上切取下來以進行培養(yǎng)的那部分組織或器官叫做外植體愈傷組織例圖二、植物組織培養(yǎng)特點及其意義特點：①培養(yǎng)條件可以人為控制②生長周期短，繁殖率高③管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動化控制意義：①研究細(xì)胞生理代謝過程及各種影響因子；②用于植物品種的改良；③用于植物次生代謝物質(zhì)的生產(chǎn)三、單細(xì)胞培養(yǎng)

（Singlecellculture）單細(xì)胞的分離單細(xì)胞的培養(yǎng)方法植物單細(xì)胞的分離從外植體中直接分離單細(xì)胞從愈傷組織中分離單細(xì)胞通過原生質(zhì)體再生法獲取單細(xì)胞

葉片是分離單細(xì)胞的最好材料，目前最為有效的一種獲得單細(xì)胞的方法

機械法：第一種方法：用刀片刮葉片

第二種方法：葉片研碎、離心

酶解法：機械法第一種方法：用刀片刮葉片撕去下表皮露出葉肉細(xì)胞用解剖刀刮下細(xì)胞機械法第二種方法：葉片研碎、離心研碎成粉加研磨介質(zhì)過濾、離心從愈傷組織中分離單細(xì)胞將愈傷組織進行振蕩培養(yǎng)，使其分散成小的細(xì)胞團伙單細(xì)胞，然后用適當(dāng)孔徑的細(xì)胞篩過濾，除去大的細(xì)胞團和殘渣，離心除去小的殘渣，得到單細(xì)胞懸浮液。酶解法Takebe等（1968）最早報道：用果膠酶處理可以分離大量的葉肉細(xì)胞加果膠酶過濾、離心通過原生質(zhì)體再生法獲取單細(xì)胞

外植體、愈傷組織或細(xì)胞團通過纖維素酶和果膠酶等的作用，除去細(xì)胞壁得到原生質(zhì)體。植物單細(xì)胞培養(yǎng)方法液體淺層靜置培養(yǎng)法固體平板培養(yǎng)法看護培養(yǎng)法微室培養(yǎng)法1、液體淺層培養(yǎng)法將懸浮在培養(yǎng)液中的細(xì)胞過濾，得到游離單細(xì)胞和小細(xì)胞團培養(yǎng)在淺層液體培養(yǎng)基中液體培養(yǎng)基用途：主要用來增殖細(xì)胞。

特點操作簡便；分離單細(xì)胞系比液體淺層培養(yǎng)容易；培養(yǎng)細(xì)胞氣體交換不暢。固體培養(yǎng)基2、固體平板培養(yǎng)法具體步驟：1、單細(xì)胞懸浮液的制備，并計數(shù)2、調(diào)節(jié)細(xì)胞密度3、培養(yǎng)基的選擇與凝固劑選擇，澆平板4、接種培養(yǎng)3、看護培養(yǎng)法看護培養(yǎng)的含義及用途含義：指用一塊活躍生長的愈傷組織來看護單個細(xì)胞，并使其生長和增殖的方法。用途；誘導(dǎo)形成單細(xì)胞系。繆爾（M