《動物細胞工程》

動物細胞工程單克隆抗體制備技術(shù)動物細胞工程常用的技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)動物細胞核移植技術(shù)動物細胞融合技術(shù)：其他動物細胞工程技術(shù)的基礎植物組織培養(yǎng)技術(shù)植物體細胞雜交技術(shù)回顧：植物細胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？動物細胞工程(1).動物細胞培養(yǎng)技術(shù)(3).動物細胞融合技術(shù)(4).單克隆抗體制備(2).細胞核、胚胎移植技術(shù)動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液制成細胞懸液培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)部分細胞“癌變”，無限傳代動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動物體50代細胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞貼壁剝離、分瓶細胞株細胞細胞系動物細胞培養(yǎng)過程：增殖能力強，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)去掉組織間蛋白質(zhì)動物細胞培養(yǎng)過程中幾個重要的概念（1）細胞貼壁：懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上（單層）。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。（2）接觸抑制：當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。動物細胞培養(yǎng)特點：貼壁生長、接觸抑制：原代培養(yǎng)(primaryculture)定義：指將要培養(yǎng)的動物細胞取出后，先用胰蛋白酶等使組織分散成單個細胞，然后配制成一定濃度的細胞懸液，再將該懸液放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。過程：從動物機體中取出組織

剪碎加胰蛋白酶細胞游離制成細胞懸液將細胞接種到培養(yǎng)瓶內(nèi)

培養(yǎng)（1--2天換一次培養(yǎng)液）

細胞貼壁生長

長成單層細胞定義：當原代培養(yǎng)的細胞生長停止，這時如果要使細胞繼續(xù)生長，就要及時用胰蛋白酶等，使細胞從瓶壁上解離下來，然后加入新的培養(yǎng)液，將細胞分離稀釋，并從原培養(yǎng)瓶內(nèi)轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，這個過程稱傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)(subculture)

細胞株：

從原代培養(yǎng)細胞群中篩選出進行傳代培養(yǎng)的細胞，能傳到40-50代，其遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生變化。

細胞系：傳到40-50代后有部分細胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化，帶有癌變的特點，可能在培養(yǎng)條件下無限制的傳代下去，這種傳代細胞稱為細胞系。細胞株和細胞系的區(qū)別：

細胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清、微量元素等）3、溫度和PH

溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）動物細胞培養(yǎng)條件保證細胞順利的生長增殖離體培養(yǎng)的細胞對微生物和有毒物質(zhì)沒有防御能力能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應用（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等（4）用于檢測有毒物質(zhì)（3）獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮（5）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預防疾病提供理論依據(jù)（2）作為基因工程的受體細胞獲得細胞細胞的全能性細胞株、細胞系植物體培養(yǎng)結(jié)果或細胞分泌蛋白快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清促生長因子蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細胞增殖原理動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目6、植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較卵細胞C母綿羊子宮Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細胞細胞質(zhì)細胞核細胞核移植胚胎移植早期胚胎多莉羊分娩卵裂融合后的卵細胞妊娠多莉羊的培育過程細胞核移植材料1:1970年，有兩位科學家做了一個人—鼠細胞融合的實驗，以證明細胞膜的流動性。那么，如何實現(xiàn)人—鼠細胞的融合，動物細胞融合后還有什么用途呢？人-鼠(想像圖)滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜連接細胞融合，形成雜交細胞（細胞膜具有一定的流動性）主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理法、化學法滅活的病毒物理法化學法（聚乙二醇）誘導方法使細胞分散后誘導細胞融合去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性、植物細胞全能性細胞融合的原理動物細胞融合植物體細胞雜交比較項目比較項目植物、動物細胞融合的比較2、誘導動物細胞融合的方法3、動物細胞融合的用途制備單克隆抗體物理法化學法生物法思考：（1）請概括單克隆抗體的概念（2）根據(jù)阿根廷科學家米爾斯坦和德國科學家柯勒設計的實驗方案，思考實驗過程與原理？（3）為什么用小鼠骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合？單克隆抗體制備過程中應用哪些細胞工程技術(shù)手段？制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選？單克隆抗體提出問題：長期以來，人們?yōu)榱双@得抗體，采用的是把某種抗原反復注射到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應不夠靈敏。1.概括單克隆抗體的概念單：單個細胞克隆:無性繁殖抗體:化學性質(zhì)單一、特異性強單克隆抗體的制備實驗目的:制備單克隆抗體實驗原理：實驗材料：小白鼠實驗器材：培養(yǎng)皿、針筒等等。實驗過程：？2.根據(jù)阿根廷科學家米爾斯坦和德國科學家柯勒設計的實驗方案，回答下列問題：B淋巴細胞能產(chǎn)生抗體，骨髓瘤細胞能無限增殖，雜交瘤細胞既能產(chǎn)生抗體又能無限增殖。單克隆抗體的制備抗原小鼠B淋巴細胞骨髓瘤細胞雜交瘤細胞細胞融合，篩選細胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)體外培養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)單克隆抗體3、單