廣西巴馬小型豬遺傳多樣性與生物學特性研究

廣西巴馬小型豬遺傳多樣性與生物學特性研究

1987年，王愛德等人將廣西巴馬香豬的2頭公和14頭母親轉移到原廣西農業(yè)科學院（現(xiàn)廣西農業(yè)大學），以實驗用小型豬。1育出體型以廣西巴馬香豬作為原始基礎群，要培育出體型盡量小、兩頭烏毛色整齊、繁殖性能好、遺傳性穩(wěn)定、有關生物學特性明確、適于實驗應用的小型豬品系。2方法2.1入其它種香豬巴馬香豬引入后自繁自養(yǎng)，從此不再導入其它品種、品系豬，也不再引入其它巴馬香豬。與國外小型豬多以雜交繁育方式比較，廣西巴馬小型豬采用純繁閉鎖繁育方式，保證了遺傳基礎相對不復雜，歷經(jīng)和承受住了近交衰退(畸形、致死基因)的風險，選育進展相對快，選育效果好。2.2封閉群遺傳一致性低主要采用群內隨機交配方式，偶有少量半同胞等近交方式。小型豬有其特殊的長期培育歷史，主要是世代間隔長(一年一個世代)、群體小、小群體內世代連續(xù)繁殖難以避免近交，正因為如此才形成了具有和近交系相似的、較高的遺傳一致性的封閉群，所以不能將大、小鼠封閉群遺傳多態(tài)性的概念完全套用在小型豬封閉群身上。2.3廣西規(guī)模豬近交家系的選擇采用連續(xù)全同胞兄妹高度近交、含少量親子近交方式。近交系的遺傳純合度隨著近交世代數(shù)的增加而增長，常會面臨近交衰退甚至全軍覆沒的巨大風險。廣西巴馬小型豬近交系是在第10世代封閉群的基礎上開始選擇近交家系。在前10世代封閉群中畸形、致死等有害基因常有出現(xiàn)，當即被淘汰，逐漸整個群體已成為相對優(yōu)秀基因的集合和純合，因此在近交系的培養(yǎng)過程中沒有出現(xiàn)嚴重的、大量的近交衰退現(xiàn)象，進展順利。2.4絕對選擇廣西巴馬小型豬的培育過程中始終重視選擇小體型和兩頭烏毛色的整齊性、多產性并重視性格溫順的馴養(yǎng)。2.5遺傳咨詢利用微衛(wèi)星標記法探明廣西巴馬小型豬封閉群的遺傳狀態(tài)和近交系的培育程度。2.6喂食試驗通過系列飼養(yǎng)試驗確認廣西巴馬小型豬生長期間營養(yǎng)需要。2.7廣西地方標準的制定在對廣西巴馬小型豬遺傳學、微生物學、飼養(yǎng)學和環(huán)境學質量控制因素研究的基礎上，制定廣西地方標準。2.8關于生物特性的研究對廣西巴馬小型豬生長發(fā)育、生理學、生化學、繁殖學、組織學和解剖學等生物學特性進行研究。3栽培結果3.1小型豬guagxiba-pig1994年鑒定專家將培育的實驗小型豬命名為“廣西巴馬小型豬”(GuangxiBA-MAMini-Pig)。至今己有22年連續(xù)培育歷史。3.2封閉組a系的形成至2009年完成了廣西巴馬小型豬封閉群21世代的培育。3.3聯(lián)合交通系統(tǒng)b系的結果至2009年完成了廣西巴馬小型豬近交系11世代的培育。3.4精確選擇和有效選擇3.4.1互通理論試驗型廣西巴馬小型豬1世代和18世代體重比較如下:12月齡母豬分別為39.33kg和29.47kg;可見經(jīng)多世代向小體型方向選育，成年體重減少10kg左右，說明對廣西巴馬小型豬小體型的選擇有效。3.4.2嚴格選擇論豬巴馬香豬原毛色為頭臀黑、其余白的“兩頭烏”，肩、背、腰部常有大小不一的黑斑。培育過程中各世代都注意嚴格選擇標準“兩頭烏”毛色豬留種，并嚴格淘汰黑斑豬。據(jù)統(tǒng)計，從第1世代到第6世代，體軀毛色為標準“兩頭烏”者由70.44%上升至80.89%，至第18世代幾乎為100%標準“兩頭烏”。3.4.3遺傳穩(wěn)定性在培育過程中注意選擇繁殖性能好的豬留種。雖經(jīng)連續(xù)多世代選育，多產遺傳性一直都較為穩(wěn)定。廣西巴馬小型豬初產8頭/胎、經(jīng)產10頭/胎左右。3.4.4實驗抓豬保管20多年前剛引入的巴馬香豬性格粗暴、膽小怕人，1m多高的圈欄一躍就跳過(公豬圈欄必須加高至2m)，注射、采血等各種實驗抓豬保定都較困難，有時還要咬人。畢業(yè)實習的學生專門做過馴養(yǎng)實驗，斷乳后由學生專人負責馴養(yǎng)，獲得成功。由于各世代重視對性格溫順的馴養(yǎng)，廣西巴馬小型豬“野性”減少了很多，用戶普遍反應性格較溫順，適于實驗用。3.5廣西規(guī)模豬近交系的構建廣西巴馬小型豬l7世代封閉群在19個微衛(wèi)星座位上，平均觀察等位基因數(shù)為3.00個。廣西巴馬小型豬第7世代近交系在21個微衛(wèi)星座位上，平均觀測等位基因數(shù)僅為1.9048個、平均有效等位基因數(shù)僅為1.5461個，平均基因純合率0.7232，確認廣西巴馬小型豬近交系已成為遺傳純合度相當高的近交群體(該近交系是在第10世代封閉群的基礎上開始培育的，所以第7世代近交系才會有這樣高的遺傳純合度)。3.6廣西規(guī)模的藥物基因序列和功能抑制劑3.6.1廣西巴馬小型豬肥胖基因(leptin)成熟肽序列的cDNA克隆、序列分析。3.6.2廣西小型豬生長激素基因-119bp～+486bp區(qū)域的限制性酶切片段多態(tài)性的研究。3.6.3廣西巴馬小型豬生長激素(pGH)基因全序列克隆及序列分析。3.6.4廣西巴馬小型豬促生長激素釋放激素成熟肽的克隆及序列分析。3.6.5廣西巴馬小型豬生長素(Ghrelin)cDNA的克隆及序列分析。3.6.6廣西巴馬小型豬卵泡抑素(Follistatin)cDNA的克隆和序列分析。3.6.7廣西巴馬小型豬卵泡抑素(Follistatin)原核表達。3.6.8廣西巴馬小型豬卵泡抑制素基因第3外顯子的限制性內切片段多態(tài)性研究。3.6.9廣西巴馬小型豬激活素(Activin)基因βA/βB亞基成熟肽序列的克隆分析及其融合蛋白的構建和表達的研究。3.6.10廣西巴馬小型豬肌肉生長抑制素(Myostatin)cDNA克隆和序列分析。以上功能基因的研究，為今后人類和動物疾病模型動物的培育和生產基因疫苗打下基礎。3.7喂食試驗的結果確認在廣西巴馬小型豬生長期間營養(yǎng)需要:蛋白質水平12%、能量3100kcal/kg，鈣0.65%，有效磷0.32%。3.8傳染病疫情防控研究3.8.1近三年完成了對廣西巴馬小型豬的六次病原微生物抗體檢測及有關研究，堅持預防為主、治療為輔，豬場未發(fā)生傳染病疫情。3.8.2對廣西巴馬小型豬的部分免疫因子進行了基因克隆和序列測定，并進行了原核表達，對于研究其增強疫苗的免疫效果和制備豬的免疫佐劑具有重要的理論意義和應用價值。3.9制定廣西地方標準制定出廣西地方標準DB45/T546-2008《實驗動物小型豬》(發(fā)布日期:2008.09.08、實施日期:2008.10.08)。3.10生物特征的研究對廣西巴馬小型豬生長發(fā)育、生理學、生化學、繁殖學、組織學、解剖學進行研究，為實驗應用和標準化數(shù)據(jù)庫的建立提供依據(jù)。3.11形態(tài)一致性小、條模式好、回收小、菌株小主要應用于心血管病動物模型(心肌梗塞、缺血性心力衰竭模型)、糖尿病動物模型等。解放軍總醫(yī)院醫(yī)學實驗動物中心評價:“廣西巴馬小型豬遺傳控制穩(wěn)定，表型特征一致性好，體型小，性情比較溫順，相對比較方便實驗研究，是值得推廣應用的優(yōu)秀小型豬品系”。廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院評價:“廣西巴馬小型豬性情比較溫和，體型不大，比較干凈。各個器官系統(tǒng)與人體極為相似，個體之間差異小，以心血管系統(tǒng)的結構和功能尤為突出。其血液指標也比較穩(wěn)定，個體之間差異不大。所以我們認為廣西巴馬小型豬作為實驗動