近交系大、小鼠遺傳檢測(cè)方法研究進(jìn)展

近交系大、小鼠遺傳檢測(cè)方法研究進(jìn)展

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)研究的成功。采用高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥學(xué)等實(shí)驗(yàn)研究,不但能排除實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身對(duì)實(shí)驗(yàn)研究的影響,而且也能得到準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。近交系動(dòng)物經(jīng)至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配培育而成。品系內(nèi)所有個(gè)體都可追溯到起源于第20代或以后代數(shù)的一對(duì)共同祖先。經(jīng)連續(xù)20代以上親代與子代交配與全同胞兄妹交配有等同效果。近交系的近交系數(shù)應(yīng)大于99%。同一品系內(nèi)的動(dòng)物基因高度純合,基因純合度已達(dá)到98%以上。近交系小鼠是生物醫(yī)學(xué)科研中最常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之一,約占所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的80%。在長(zhǎng)期保種、育種過(guò)程及繁殖生產(chǎn)中,近交系動(dòng)物可能發(fā)生遺傳污染或遺傳突變,導(dǎo)致該種群動(dòng)物的基因型發(fā)生改變。為確保其基因的純合性及品系特征的延續(xù)性,定期的遺傳監(jiān)測(cè)非常必要。遺傳檢測(cè)是遺傳監(jiān)測(cè)的重要內(nèi)容之一,是指通過(guò)形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)等方法來(lái)測(cè)定動(dòng)物品系的遺傳組成是否發(fā)生變化。本文就近交系大、小鼠遺傳檢測(cè)方法研究進(jìn)展作一綜述。傳統(tǒng)的小鼠遺傳檢測(cè)方法有形態(tài)學(xué)方法、免疫學(xué)方法、生物化學(xué)方法。這些方法并不能很好地檢測(cè)出各亞系之間的遺傳差異。隨著一系列分子遺傳標(biāo)記的發(fā)現(xiàn),分子生物學(xué)檢測(cè)方法被應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳檢測(cè)。目前我國(guó)有關(guān)近交系小鼠、大鼠遺傳監(jiān)測(cè)的國(guó)標(biāo)上對(duì)生化標(biāo)記基因檢測(cè)法、皮膚移植法做了詳細(xì)介紹。同時(shí)注明:除以上兩種方法外,還可選用其它方法對(duì)近交系動(dòng)物進(jìn)行遺傳質(zhì)量檢測(cè),如毛色基因測(cè)試、免疫標(biāo)記基因檢測(cè)、下頜骨測(cè)量法、染色體標(biāo)記檢測(cè)(Cytogenetictechniques)、DNA多態(tài)性檢測(cè)法(DNAmarkers)等。1社會(huì)學(xué)方法1.1毛發(fā)基因檢測(cè)方法coatcoordina1.2下頜形態(tài)分析動(dòng)物的骨骼形態(tài)具有高度的遺傳性,小鼠的下頜骨亦如此,并且可能是由多基因位點(diǎn)決定的。各近交系小鼠之間,下頜骨的形態(tài)都具有顯著差異。采用下頜骨形態(tài)分析技術(shù)進(jìn)行小鼠和大鼠的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè),已為世界公認(rèn)。該方法對(duì)明確和檢查由遺傳突變或污染引起的亞系間差異,是一種靈敏、有效的方法。它監(jiān)測(cè)了大量的基因位點(diǎn),但所測(cè)基因的數(shù)量及其在染色體上的位置還不詳細(xì)。1.3小鼠染色體的遺傳標(biāo)記方法選擇染色體標(biāo)顯帶法是用細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù),對(duì)每一條染色體著絲點(diǎn)區(qū)域DNA物質(zhì)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。該區(qū)域富含A-T堿基對(duì)的隨體DNA,包容著大量的基因序列。又由于近交系小鼠在染色體著絲點(diǎn)區(qū)域都有其自身的特征,故提供了有力的標(biāo)記,從而在更多基因群的水平上達(dá)到監(jiān)測(cè)目的。近交系小鼠染色體,全部為端著絲點(diǎn)染色體,大小、形態(tài)近似,染色體標(biāo)記必須以染色體臂上由異源染色質(zhì)和同源染色質(zhì)所能顯示的深淺或亮暗帶紋來(lái)識(shí)別每一條染色體,確定其核型排列、染色體序號(hào),進(jìn)而識(shí)別每一號(hào)染色體的著絲點(diǎn)特征,即染色體遺傳標(biāo)記。目前有兩種方法:其一是G-C帶法,其二是Q-H熒光帶法。前者需要的條件低,普通光學(xué)顯微鏡即可分辨。但統(tǒng)一細(xì)胞需經(jīng)兩次分帶處理,故重復(fù)性較差,需要相當(dāng)熟練的操作,后者需要使用熒光顯微鏡,優(yōu)點(diǎn)是一次染色,成功率高,重復(fù)性好。2免疫方法2.1察同系異體皮膚移植物同系異體皮膚移植法,是利用免疫系統(tǒng)識(shí)別“自己”與“異己”的特性,通過(guò)觀察同系異體皮膚移植物能否接受以判定組織相容性基因的異同,從而進(jìn)行近交系動(dòng)物遺傳監(jiān)測(cè)。該法操作簡(jiǎn)單、檢查范圍較廣。缺點(diǎn)是:只能測(cè)出近交系小鼠中的基因型是否一致,而不能測(cè)出各品系是否保持著原有的遺傳特性;需要觀察較長(zhǎng)時(shí)間。2.2近交系小鼠的h-2單倍型檢測(cè)在免疫遺傳學(xué)中,能引起強(qiáng)烈的移植排斥反應(yīng)的抗原系統(tǒng)稱為主要組織相容性抗原系統(tǒng)。小鼠的主要組織相容性系統(tǒng)稱為H-2復(fù)合體(MajorHistocompatibilityComplex,H-2Complex),是定位于小鼠第17號(hào)染色體上的一個(gè)區(qū)段,是決定小鼠免疫遺傳特性最主要的基因群,由K、I、S、G、D和TL等6個(gè)個(gè)基因區(qū)段組成,其中以K、D基因區(qū)段產(chǎn)物的免疫反應(yīng)性最強(qiáng),最具決定性。近交系小鼠中不同的品系其H-2復(fù)合體組成不同,表現(xiàn)在H-2單倍型(Haplotype)的不同。H-2單倍型可以通過(guò)抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行判別。單克隆抗體能夠特異性地與抗原進(jìn)行反應(yīng),具有專一性,能夠識(shí)別出對(duì)應(yīng)的抗原物。利用H-2抗原的D區(qū)和K區(qū)所對(duì)應(yīng)的單抗,通過(guò)微量細(xì)胞毒法可以判定D區(qū)和K區(qū)的類型,實(shí)施近交系小鼠的免疫遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)。免疫標(biāo)記基因檢測(cè)就是應(yīng)用血凝技術(shù)和細(xì)胞毒檢驗(yàn)來(lái)檢測(cè)包括H-2K、H-2D、Lyb、Thy等免疫學(xué)細(xì)胞抗原標(biāo)記。小鼠MHC—H-2單倍型的檢測(cè)技術(shù)在不斷發(fā)展和完善,從多價(jià)抗血清細(xì)胞毒法,到單價(jià)抗血清微量細(xì)胞毒法,到目前的單克隆抗體微量細(xì)胞毒檢測(cè)技術(shù),其檢測(cè)速度更快,從采樣到檢出結(jié)果約3h,操作更簡(jiǎn)單,目前應(yīng)用商品化的單克隆抗體,結(jié)果更準(zhǔn)確,準(zhǔn)確率達(dá)95%以上。該方法中專一性很強(qiáng),較生化標(biāo)記基因法復(fù)雜,檢查的是特定的遺傳位點(diǎn),所需要的MHC特殊位點(diǎn)的異型抗血清不宜得到。但為了彌補(bǔ)皮膚移植法耗時(shí)長(zhǎng)的不足,新國(guó)標(biāo)征求意見稿中增加了近交系小鼠H-2單倍型檢測(cè)方法-微量細(xì)胞毒法。馬麗穎等根據(jù)近交系小鼠的H-2基因序列設(shè)計(jì)相應(yīng)的探針,通過(guò)Southern雜交檢測(cè)可以確定近交系小鼠的基因型,得出了跟微量細(xì)胞毒法一致的結(jié)果。該檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、易行,檢測(cè)結(jié)果客觀,可以應(yīng)用于近交系小鼠的遺傳檢測(cè)。3生化標(biāo)記基因檢測(cè)法檢測(cè)細(xì)胞外在分子身份證上的基因變異各種近交系小鼠、大鼠在生化多態(tài)性位點(diǎn)上都具有各自特定的等位基因,可作為遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)的依據(jù)。生化標(biāo)記基因檢測(cè)法就是根據(jù)同工酶或異構(gòu)蛋白的變化來(lái)推測(cè)相應(yīng)的基因變化。目前我國(guó)國(guó)標(biāo)上,近交系小鼠選擇位于10個(gè)染色體上的13個(gè)生化位點(diǎn),近交系大鼠選擇7個(gè)生化位點(diǎn),作為遺傳檢測(cè)的生化標(biāo)記。ICLAS監(jiān)測(cè)中心從19個(gè)標(biāo)準(zhǔn)遺傳標(biāo)記中選擇15個(gè),檢查品系的遺傳背景。生化標(biāo)記基因檢測(cè)法通過(guò)表型變化來(lái)推測(cè)基因變化,較形態(tài)學(xué)進(jìn)了一大步。該法具有速度快、所需試樣量小等特點(diǎn)。不足之處是需要一定的設(shè)備和較貴的試劑,檢測(cè)的位點(diǎn)局限,多是單基因遺傳的位點(diǎn),不能反映動(dòng)物的整個(gè)遺傳概貌;結(jié)果不易分析判讀。4基因核酸檢測(cè)近交系小鼠由于其特殊的繁育過(guò)程,最終導(dǎo)致品系內(nèi)個(gè)體間(除雌雄間存在著有無(wú)Y染色體的差別外)遺傳構(gòu)成的多樣性完全消失,即在同一近交系內(nèi)不同個(gè)體的基因型(除雌雄間由Y染色體決定外)在個(gè)體間完全相同,而不同近交系間,因始建時(shí)個(gè)體來(lái)源不同,所以最終品系間存在基因型的不同。分子生物學(xué)技術(shù)可以直接檢驗(yàn)動(dòng)物基因組核酸的改變。隨著一系列分子遺傳標(biāo)記的發(fā)現(xiàn),分子生物學(xué)技術(shù)逐步應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳檢測(cè),如隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性(RandomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD)、PCR單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)、微衛(wèi)星(Microsatellite)[21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41]和DNA指紋(DNAFingerprints)[26,42,43,44,45,46]等。分子生物學(xué)方法為近交系動(dòng)物的遺傳監(jiān)測(cè)提供了直接客觀的途徑。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)能夠快速有效地分析特異DNA片段和序列,被廣泛應(yīng)用于DNA多態(tài)性檢測(cè)中。4.1rapd分析RAPD不需預(yù)先知道目標(biāo)序列,可隨機(jī)擴(kuò)增DNA片段,檢測(cè)個(gè)體之間的多態(tài)性,是檢測(cè)DNA概貌的一個(gè)強(qiáng)有力的技術(shù)。RAPD-PCR可用于分析同一群體不同個(gè)體之間和同一物種不同群體之間的遺傳相關(guān)性和變異性。RAPD通過(guò)多個(gè)引物擴(kuò)增情況給出近交系小鼠基因組的信息。當(dāng)用同一條引物擴(kuò)增不同的品系,或者同一品系用不同的引物擴(kuò)增時(shí),其結(jié)果均有差異。差異的程度因引物而異,因品系而異。如果不同的個(gè)體用同一條引物擴(kuò)增,那么其擴(kuò)增帶型的相似程度反映了這些不同個(gè)體之間遺傳背景組成的相似程度。當(dāng)用同一條引物擴(kuò)增同一近交系中不同個(gè)體時(shí),它們的擴(kuò)增帶型應(yīng)該非常一致,因?yàn)榻幌凳墙?jīng)近交20帶以上培育而成,每個(gè)個(gè)體基因位點(diǎn)均達(dá)到了98%以上的純合。如果其中某一個(gè)體多個(gè)引物的擴(kuò)增帶型不同于同一近交系中其他個(gè)體時(shí)。那么此個(gè)體的遺傳背景可能已有所改變。王洪等六個(gè)品系近交系小鼠進(jìn)行了RAPD分析,結(jié)果顯示RAPD方法是一種有效的近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳檢測(cè)手段。可對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行種間分析和種內(nèi)分析。RAPD技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求十分嚴(yán)格,RAPD圖譜受諸多因素影響,可比性差,重復(fù)性差,這也是RAPD技術(shù)尚不成熟,需要完善的地方。4.2snp的擴(kuò)增、鑒定和分析SNP是指在基因組水平上由于單個(gè)核苷酸位置上存在轉(zhuǎn)換、顛換、插入、缺失等變異所引起的DNA序列多態(tài)性。近年來(lái),單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)技術(shù)被用于近交系小鼠遺傳質(zhì)量檢測(cè),并建立了近交系小鼠的SNP數(shù)據(jù)庫(kù)。Petkov等選擇28個(gè)SNP標(biāo)記,這些標(biāo)記覆蓋了所有小鼠常染色體和X染色體,能區(qū)分所有的近交系小鼠,提示該方法是一個(gè)快速、可靠及高效的遺傳監(jiān)測(cè)方法。國(guó)內(nèi),胡培麗等將基于等位基因?qū)Ｒ恍詳U(kuò)增的單管雙向等位基因?qū)Ｒ恍詳U(kuò)增(single-tubebi-directionalallelespecificamplification,SB-ASA)方法用于近交系小鼠遺傳質(zhì)量檢測(cè),發(fā)現(xiàn)本方法能夠快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出小鼠基因組中的SNP,通過(guò)多個(gè)SNP位點(diǎn)綜合分析,可以有效地鑒別已有的近交系小鼠。SNP主要是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。SNP所表現(xiàn)的多態(tài)性只涉及到單個(gè)堿基的變異,具有密度高、代表性、遺傳穩(wěn)定性等特點(diǎn),能夠全面地反映基因組的遺傳及變異情況。4.3微衛(wèi)星位點(diǎn)多態(tài)性法人和小鼠基因組中存在大量寡核甘酸串聯(lián)重復(fù)序列,重復(fù)單位為2～6bp,重復(fù)次數(shù)在10～60次,這些重復(fù)序列稱為微衛(wèi)星,又稱為短小串聯(lián)重復(fù)序列(shorttandemrepeats,STR),這些重復(fù)序列的DNA長(zhǎng)度取決于重復(fù)序列的數(shù)量。微衛(wèi)星DNA具有極高的多態(tài)性,按孟德爾遺傳規(guī)律遺傳。其突出特點(diǎn)是基因位點(diǎn)多、多態(tài)性高、擴(kuò)增片段短,在實(shí)驗(yàn)小鼠品系鑒定中實(shí)驗(yàn)價(jià)值較高。近交系小鼠中微衛(wèi)星長(zhǎng)度變化的發(fā)生率很低,所以微衛(wèi)星的長(zhǎng)度可以作為某一品系近交系小鼠的恒定參數(shù),而在不同近交系之間微衛(wèi)星的長(zhǎng)度則有差異,因此檢測(cè)微衛(wèi)星位點(diǎn)可用作近交系小鼠的遺傳檢測(cè)。微衛(wèi)星DNA多態(tài)性的檢測(cè)方法有:DNA指紋圖譜法、變性聚丙烯酸胺凝膠電泳檢測(cè)法、毛細(xì)管電泳法、PCR結(jié)合限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析法(PCR-RFLP)、多重PCR微衛(wèi)星熒光標(biāo)記全自動(dòng)基因組掃描等。近交系大小鼠遺傳監(jiān)測(cè)中,變性聚丙烯酸胺凝膠電泳檢測(cè)法應(yīng)用較多。該法根據(jù)微衛(wèi)星位點(diǎn)兩端的互補(bǔ)序列(側(cè)翼序列)合成引物,然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增,由于重復(fù)次數(shù)不同而形成長(zhǎng)度不同的片段,用高分辨的變性聚丙烯酞胺凝膠電泳來(lái)分類這些長(zhǎng)度不同的片段,最后用溴化乙錠、AgNO3、亞甲基藍(lán)等染色,就可表現(xiàn)出不同的電泳帶型,從而判斷是否發(fā)生遺傳污染或遺傳變異。在同一品系內(nèi),如果電泳表現(xiàn)為一條帶,且泳動(dòng)距離一致,則所檢動(dòng)物在該基因座上是純合的,表明沒有發(fā)生遺傳污染或遺傳變異。如果電泳呈現(xiàn)2條帶(應(yīng)注意排除影子帶)或泳動(dòng)距離不一致,即出現(xiàn)多態(tài)性,表明基因座是雜合或發(fā)生了遺傳變異。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高,可以分辨出長(zhǎng)度差為1～2bpDNA片段。該法的最大的問(wèn)題是“影子帶”的問(wèn)題,一般每一條目標(biāo)帶的后方總可以見到“影子帶”,很難去除,嚴(yán)重干擾了試驗(yàn)結(jié)果的判斷,另此外方法比較復(fù)雜,較難控制。微衛(wèi)星DNA不但具有高度的多態(tài)性,而且有豐富的可供個(gè)體識(shí)別標(biāo)志的微衛(wèi)星基因座(小鼠基因圖譜已包含了7377個(gè)微衛(wèi)星DNA,其中有6580個(gè)顯示多態(tài)性,且這些微衛(wèi)星位點(diǎn)均勻地分布于全部染色體上,能夠更全面地反映基因組的遺傳及變異情況)。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記方法在近交系小鼠遺傳分析中的應(yīng)用進(jìn)行了廣泛的研究,并篩選出一些有鑒別意義的微衛(wèi)星位點(diǎn)[32,33,34,35,36,37,38,39]。研究表明,微衛(wèi)星位點(diǎn)在不同品系的小鼠之間具有多態(tài)性,在不同的亞系之間也有具有多態(tài)性?？刹捎梦⑿l(wèi)星標(biāo)記方法區(qū)分不同的近交小鼠品系、近交小鼠亞系。微衛(wèi)星多態(tài)性分析能夠快速、經(jīng)濟(jì)地對(duì)近交系小鼠進(jìn)行遺傳監(jiān)測(cè)。李瑞生等將微衛(wèi)星位點(diǎn)DNA多態(tài)性分析運(yùn)用于近交系大鼠的遺傳監(jiān)測(cè)中,同樣發(fā)現(xiàn),大鼠的微衛(wèi)星位點(diǎn)具有顯著多態(tài)性:不同品系個(gè)體之間具有多態(tài)性;不同地區(qū)同一品系的不同個(gè)體之間也存在一定的差異。該方法為近交系大鼠的遺傳背景監(jiān)測(cè)提供了可靠的信息。微衛(wèi)星位點(diǎn)的突出特點(diǎn)是基因位點(diǎn)多,多態(tài)性高、擴(kuò)增片段短,能夠反映出動(dòng)物的遺傳概貌,檢測(cè)時(shí)只需剪小段尾巴提取DNA,而不必處死小鼠,并且方法簡(jiǎn)便,易于推廣。然而,目前我國(guó)微衛(wèi)星在大、小鼠中進(jìn)行的研究,僅限于不同的實(shí)驗(yàn)室各自選用不同的微衛(wèi)星位點(diǎn)對(duì)近交系大、小鼠進(jìn)行多態(tài)性分析,由于所選的微衛(wèi)星位點(diǎn)不盡相同,缺乏一系列統(tǒng)一的評(píng)估指標(biāo),與實(shí)際應(yīng)用還有很大距離。在我國(guó)尚無(wú)微衛(wèi)星方法檢測(cè)大、小鼠遺傳質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)方法和判定標(biāo)準(zhǔn)。此外,微衛(wèi)星遺傳標(biāo)記技術(shù)在運(yùn)用過(guò)程中受到一些因素的制約:微衛(wèi)星的篩選過(guò)程繁雜;對(duì)微衛(wèi)星DNA的檢測(cè)需要高分辨率的檢測(cè)方法,理論上最高分辨率應(yīng)能夠分辨出一個(gè)堿基的差別。目前常用的PAGE銀染技術(shù)雖能達(dá)到這個(gè)要求,但過(guò)程復(fù)雜,這就給大樣本量的檢測(cè)帶來(lái)了困難。如果能解決上述問(wèn)題,微衛(wèi)星在分子生物學(xué)上的應(yīng)用也將會(huì)更加廣泛。今后需選擇更多的微衛(wèi)星位點(diǎn)對(duì)更多品系進(jìn)行分析,加強(qiáng)微衛(wèi)星位點(diǎn)選擇和檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)化研究,使微衛(wèi)星標(biāo)記真正應(yīng)用到近交系大、小鼠的日常質(zhì)量檢測(cè)中。4.4u3000近交系動(dòng)物dna指紋圖譜DNA多態(tài)性分為長(zhǎng)度多態(tài)性和序列多態(tài)性兩類。DNA長(zhǎng)度多態(tài)性是指由于片段插入、缺失或重復(fù)序列數(shù)目變異所致的DNA片段長(zhǎng)度的個(gè)體差異。其中約占整個(gè)基因組20%～30%的重復(fù)序列是導(dǎo)致DNA長(zhǎng)度多態(tài)性的最常見原因。其中重復(fù)單位為2～6bp的寡核苷酸串聯(lián)重復(fù)序列就是微衛(wèi)星DNA。根據(jù)不同位點(diǎn)的微衛(wèi)星DNA可有相同重復(fù)順序單位的特點(diǎn),用一種核心重復(fù)順序作為探針,可檢測(cè)到許多不同位點(diǎn)的微衛(wèi)星,經(jīng)SouthernBlot轉(zhuǎn)移雜交,放射自顯影在X光膠片上顯現(xiàn)DNA指紋圖譜,該圖譜不表示任何特定微衛(wèi)星位點(diǎn),而是許多微衛(wèi)星位點(diǎn)的集合狀態(tài)。近交系是經(jīng)過(guò)至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配或親代與子代交配培育而成,其近交系數(shù)應(yīng)大于99%,亦即近交系個(gè)體之間所攜帶的遺傳信息量應(yīng)基本一致。依DNA指紋技術(shù)的原理,近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體之間的DNA指紋圖帶的平均相似系數(shù)、共有帶率均應(yīng)接近100%或達(dá)到100%。該法所得的結(jié)論有足夠的可靠性和準(zhǔn)確性。在近交系動(dòng)物的遺傳監(jiān)測(cè)中,一個(gè)好的遺傳檢測(cè)方法所用的遺傳標(biāo)記必須是既遵循簡(jiǎn)單的孟德爾遺傳方式,親子間穩(wěn)定遺傳,又在生物的進(jìn)化過(guò)程中具有一定的變異而表現(xiàn)出足夠的多態(tài)性。DNA指紋技術(shù)以基因組中廣泛存在的高度可變串聯(lián)重復(fù)序列(VNTRs)為遺傳標(biāo)記,恰好具有上述優(yōu)點(diǎn)。因此,DNA指紋圖譜技術(shù)因其高變異性、多位點(diǎn)性、簡(jiǎn)單而穩(wěn)定的遺傳性等優(yōu)點(diǎn)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳監(jiān)測(cè)中得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。指紋技術(shù)中用到的探針及其標(biāo)記和檢測(cè)方法也隨著大量高水平微衛(wèi)星探針、寡聚核苷酸探針的出現(xiàn)、計(jì)算機(jī)分析軟件的使用、實(shí)驗(yàn)技術(shù)的提高以及統(tǒng)計(jì)方法的改進(jìn)而日益完善。然而,DNA指紋技術(shù)與目前的生化標(biāo)記分析方法相比尚存在一些問(wèn)題:操作繁瑣、判定上缺乏標(biāo)準(zhǔn),以及無(wú)確切的χ和P值等來(lái)衡量近交系動(dòng)物個(gè)體間、群體間與不同品系間的差異及不能區(qū)分雜合體和純合體等,因此如何進(jìn)一步簡(jiǎn)化操作、如何根據(jù)DNA指紋圖譜確定個(gè)體在該位點(diǎn)上的基因型、如何掌握特異性的探針、如何建立統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)用于實(shí)驗(yàn)室間的使用和參考等問(wèn)題都有待于進(jìn)一步研究。5微衛(wèi)星dna檢測(cè)隨著生活水平的提高,人們對(duì)醫(yī)療保健、生存質(zhì)量日益重視。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為疾病動(dòng)物模型的主要材料,在臨床藥物實(shí)驗(yàn)、毒理實(shí)驗(yàn)等科研中起著越來(lái)越重要的作用。近交系小鼠因其基因高度純合,且遺傳特征穩(wěn)定,在實(shí)驗(yàn)中可減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量和重復(fù)次數(shù),且有利于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可比性及可重復(fù)性,故廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究。如何對(duì)近交系小鼠進(jìn)行長(zhǎng)期、有效、嚴(yán)格、定時(shí)的遺傳學(xué)監(jiān)測(cè)是非常重要的。傳統(tǒng)的遺傳質(zhì)