電泳技術 分子生物實驗技術

電泳技術概論

10/16/20231電泳

是指帶電粒子在電場中向與其自身帶相反電荷的電極移動的現象

正極負極帶負電粒子帶正電粒子10/16/20232第一節(jié)

基本原理

遷移率（或泳動度）是指帶電顆粒在單位電場強度下泳動的速度，可用下列公式計算：

Ｕ=υ/E=(d/t)/(V/l)=dl/Vt

Ｕ為遷移率（cm2·V-1·min-1）；υ為顆粒泳動速度（cm·s-1）；E為電場強度（V·cm-1）；d為顆粒泳動的距離（cm）；l為濾紙有效長度（cm）；V為實際電壓（V）；t為通電時間（s或min）。通過測量d,l,V,t,即可計算出被分離物質的遷移率。

10/16/202331遷移率單位=10-5cm2·V-1·min-1

在確定的條件下，某物質的遷移率為常數，是該物質的化學特征常數10/16/20234影響電泳速度的外界因素1.電場強度

2.溶液的pH值

3.溶液的離子強度

4.電滲現象

5.溫度的影響

6.支持物的影響

10/16/20235離子的這種阻礙效應是與其濃度和價數相關的。用離子強度來表示，它的數值如下式：

式中s表示共有s種離子，Ci和Zi分別代表每種離子的濃度（mol/L）和價數。

10/16/20236影響電泳速度的外界因素

1.電場強度電場強度也稱電位梯度，是指單位長度（每一厘米）支持物體上的電位降，它對泳動速度起著十分重要的作用。一般，電場強度越高，帶電顆粒移動速度越快。10/16/20237影響電泳速度的外界因素

2．溶液的pH值

溶液的pH值決定了帶電顆粒解離的程度，也決定了物質所帶凈電荷的多少。10/16/20238影響電泳速度的外界因素

3.溶液的離子強度電泳液中的離子增加會使電泳遷移率降低，原因是帶電的離子會吸引相反符號的離子聚集在其周圍，相成一個與運動粒子符號相反的離子氛（ionicatmosphere），它使該離子向相反的方向運動，從而降低了該粒子的遷移率。10/16/20239離子的這種阻礙效應是與其濃度和價數相關的。用離子強度來表示，它的數值如下式：式中s表示共有s種離子，Ci和Zi分別代表每種離子的濃度（mol/L）和價數。10/16/202310影響電泳速度的外界因素

5.溫度的影響電泳過程中由于通電產生焦耳熱，熱對電泳有很大的影響。溫度每升高1℃，遷移率約增加2.4%。為降低熱效應對電泳的影響，可控制電壓或電流，或在電泳系統(tǒng)中安裝冷卻散熱裝置

10/16/202311影響電泳速度的外界因素

6.支持物的影響

對支持物的要求一般是均勻和吸附力小，否則電場強度不均勻，影響區(qū)帶的分離，實驗結果及掃描圖譜無法重復。

10/16/202312第二節(jié)

電泳的分類

一、按分離原理分類

二、按有無固體支持物分類

10/16/202313電泳的分類

二、按有無固體支持物分類

10/16/202314第三節(jié)

醋酸纖維素薄膜電一、原理以醋酸纖維素薄膜為支持物。

二、材料和試劑三、特點10/16/202315特點：

１

電泳后區(qū)帶界限清晰；

２通電時間較短；

３它對各種蛋白質幾乎完全不吸附，因此無拖尾現象；

４靈敏度高，樣品用量少。５對染料也沒有吸附。６它的電滲作用雖高但很均一，不影響樣品的分離效果。

10/16/202316醋酸纖維素膜電泳槽可做各種醋酸纖維素膜電泳、紙電泳及載玻片電泳等。

10/16/20231710/16/202318第四節(jié)瓊脂（糖）凝膠電泳

瓊脂糖凝膠電泳主要用于分離、鑒定核酸，如DNA鑒定，DNA限制性內切酶圖譜制作等，為DNA分子及其片段分子量測定和DNA分子構象的分析提供了重要手段。

10/16/202319核酸構型與瓊脂糖凝膠電泳分離的關系

共價閉環(huán)cccDNA>直線DNA>開環(huán)的雙鏈環(huán)狀DNA

10/16/202320瓊脂糖凝膠電泳的基本操作

１、配制緩沖液貯備液

２、水平型瓊脂糖凝膠制備

３、樣品的制備與點樣

４、電泳

５、染色

６、樣品回收

10/16/202321橋式水平電泳槽用于對DNA、蛋白的鑒定、分離、制備及分子量測定

10/16/202322DNA回收電泳槽

用于電洗脫回收DNA10/16/202323微型水平電泳槽

用于對DNA、蛋白的鑒定、分離、制備及分子量測定

10/16/20232410/16/202325丙烯酰胺凝膠有以下優(yōu)點：

①幾乎無電滲作用。②化學性能穩(wěn)定，與被分離物不起化學反應。對pH和溫度變化較穩(wěn)定。

③在一定濃度范圍內凝膠無色透明，有彈性，機械性能好，易觀察。

④凝膠孔徑可調。

⑤分辨率高，尤其在不連續(xù)不連續(xù)凝膠電泳中，集濃縮、分子篩和電荷效應為一體，因而有更高的分辨率。10/16/202326一、丙烯酰胺凝膠聚合原理

10/16/20232710/16/202328催化劑和加速劑的種類

（1）AP-TEMED：化學聚合作用。

加速劑TEMED的堿基可使催化劑過硫酸銨（簡稱AP）的水溶液產生出游離氧原子，然后激活Acr單體，形成單體長鏈，在交聯劑Bis作用下聚合成凝膠。（2）核黃素-TEMED：光聚合作用。

光聚合作用通常需痕量氧原子存在才能發(fā)生，因為核黃素在TEMED及光照條件下，還原成無色核黃素，后者被氧再氧化形成自由基，從而引發(fā)聚合作用。

10/16/202329二、凝膠組成成分的化學、物理性質10/16/20233010/16/202331丙烯酰胺會產生如下幾個化學反應：

高濃度酸和堿會促進其水解形成丙烯酸和NH3。

與一些羥基化合物如酚或酯族醇反應，生成β-芳氧基或烷氧基丙酰胺。

在20℃能NH3反應，生成β、β′、β″-氮川三丙酰胺。

與一些硫醇反應，生成β-烷基丙酰胺。

也會由于超聲、γ-射線和自然光線引起聚合作用。如果烴鍵靠近在高度聚合的位置，酰胺基也會受到分子間的縮聚作用而成亞胺橋。

10/16/202332聚丙烯酰胺凝膠電泳原理三種物理效應⑴樣品濃縮效應

⑵分子篩效應⑶電荷效應10/16/202333聚丙烯酰胺凝膠電泳原理樣品濃縮效應：由凝膠系統(tǒng)的不連續(xù)性產生。

①凝膠孔徑不連續(xù)性②緩沖液離子成份的不連續(xù)性

③PH的不連續(xù)性10/16/202334聚丙烯酰胺凝膠電泳原理樣品濃縮效應：由凝膠系統(tǒng)的不連續(xù)性產生。

①凝膠孔徑不連續(xù)性②緩沖液離子成份的不連續(xù)性

③PH的不連續(xù)性10/16/202335聚丙烯酰胺凝膠電泳原理①凝膠孔徑不連續(xù)性單體濃度

交聯度

大孔膠:T=3%C=2.0%小孔膠:T=7%C=2.5%10/16/202336聚丙烯酰胺凝膠電泳原理①凝膠孔徑不連續(xù)性

凝膠網孔大小:聚合鏈長度:由Acr濃度交聯程度:由Acr與Bis相對比例Bis的濃度低,孔徑大,可在聚合前調節(jié)單體與Bis的濃度比如:AcrBisT(%)小孔28.0g0.735g7%大孔10.0g2.5g2.5%10/16/20233710/16/202338不同濃度丙烯酰胺和DNA有效分離范圍

丙烯酰胺（%）有效分離范圍（bp）溴酚蘭*二甲苯青*3.5100～20001004605.080～500652608.060～4004516012.040～200307015.025～150156020.010～100124510/16/202339聚丙烯酰胺凝膠電泳原理②緩沖液離子成份的不連續(xù)性大孔膠pH=6.7先行離子：Cl-存在于凝膠層中任何PH值下隨后離子：Gly-存在于電極緩沖液中pI=6.0pKα1=2.34pKα2=9.70在pH=6.7時，只有少數解離為Gly-，多數為Gly+-。Pr分子在pH6.7時以Pr-形式存在10/16/202340聚丙烯酰胺凝膠電泳原理③pH的不連續(xù)性

pH大孔(濃縮)膠6.7小孔(分離)膠8.9緩沖液8.310/16/202341聚丙烯酰胺凝膠電泳原理樣品濃縮效應（不連續(xù)性）

不連續(xù)性可控制Gly的解離度，從而控制有效遷移率。

遷移率:Cl->Pr->Gly-(Pr被壓成薄層)在大孔膠中：要求Gly的有效遷移率低于所有Pr，經計算pH=6.7。在小孔膠中：要求Gly超過所有Pr，Pr留在后面進行普通的電泳與分子篩分離分成多個區(qū)帶。(此PH實測為9.5)10/16/202342丙烯酰胺凝膠電泳的應用

聚丙烯酰胺凝膠電泳根據其有無濃縮效應，可分為連續(xù)的和不連續(xù)的兩類

。前者指整個電泳系統(tǒng)中所用緩沖液，pH值和凝膠網孔都是相同的；后者是指在電泳系統(tǒng)中采用了兩種或兩種以上的緩沖液、pH值和孔徑，不連續(xù)電泳能使稀的樣品在電泳過程中濃縮成層，從而提高分辨能力。

10/16/202343在不連續(xù)PAGE系統(tǒng)里，存在三種物理效應,，即電荷效應、分子篩效應和濃縮效應。

１、電荷效應：各種蛋白質按其所帶電荷的種類及數量，在電場向一定電極，以一定速度泳動。２、分子篩效應：區(qū)別不同大小分子種類的能力是凝膠所具有的一種篩分大小的能力即分子篩效應。這種效應與凝膠過濾過程中的情況不同。

10/16/202344濃縮效應10/16/202345電泳過程示意圖

A為電泳前3層凝膠排列順序，3層膠中均有快離子，慢離子

B顯示電泳開始后，蛋白質樣品夾在快、慢離子之間被濃縮成極窄的區(qū)帶。

C顯示蛋白質樣品分離成數個區(qū)帶。

聚丙烯酰胺凝膠電泳原理10/16/202346不連續(xù)系統(tǒng)濃縮效應示意圖

聚丙烯酰胺凝膠電泳原理10/16/202347聚丙烯酰胺凝膠電泳原理10/16/202348聚丙烯酰胺凝膠電泳原理三種物理效率使樣品分離效果好，分辨率高。

⑴一般電泳分離的電荷效應

帶電多，MW小，遷移快

⑵不連續(xù)系統(tǒng)對樣品的濃縮效應

遷移率被壓成薄層

⑶凝膠對樣品分子的篩選效應10/16/202349聚丙烯酰胺凝膠電泳原理電泳儀器

⑴垂直板電泳儀⑵圓盤電泳儀

返回10/16/202350圖1聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳示意圖

(A為正面,B為剖面)

(1)樣品膠pH6.7(2)濃縮膠pH6.7

(3)分離膠pH8.9(4)電極緩沖液pH8.3

返回10/16/202351SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS)

原理概述

早在1964年，Ferguson為了描述蛋白質在淀粉凝膠中的電泳行為曾提出下列公式：

1gmR=-KRC+1gm0

后來證明該公式同樣適用于聚丙烯酰胺凝膠電泳。式中，mR是蛋白質在凝膠濃度為C時的相對遷移率；

10/16/20235210/16/20235310/16/202354SDS測定蛋白質分子量原理

各種SDS-Pr均帶相同密度的負電荷，其荷電超過了原Pr，消除了不同Pr荷電差異。加入SDS，改變了Pr的構象，SDS-Pr為長橢圓棒，各種短軸約為1.8nm。長軸：Mr，均呈正比例，所以常數斜率遷移率10/16/202355SDS測定蛋白質分子量原理

相對遷移率mR=樣品遷移距離cm/染料遷移距離cm標準曲線MW=K（10―bm）1gMW=1gK―bmR=K1―bmR

式中：MW為蛋白質的分子量；K，K1為常數；b為斜率；mR為相對遷移率。10/16/20235610/16/202357SDS測定蛋白質分子量影響遷移率的因素

⑴二硫鍵是否完全被還原：只有在蛋白質分子內的二硫鍵被徹底還原的情況下，SDS才能定量地結合到蛋白質分子上去，并使之具有相同的構象。一般以巰基乙醇作還原劑。在有些情況下，還需進一步將形成的巰基烷基化，以免在電泳過程中重新氧化而形成蛋白質聚合體。10/16/202358SDS測定蛋白質分子量影響遷移率的因素

⑵溶液中SDS的濃度：溶液中的SDS的總量，至少要比蛋白質的量高3倍，一般需高達10倍以上。

⑶溶液的離子強度：溶液的離子強度應較低，最高不能超過0.26，因為SDS在水溶液中是以單體和分子團的混合體而存在的，SDS結合到蛋白質分子上的量，僅決定于平衡時SDS單體的濃度而不是總濃度，在低離子強度的溶液中，SDS單體具有較高的平衡濃度。10/16/202359SDS測定蛋白質分子量影響遷移率的因素

在凝膠電泳中，影響遷移率的因素較多，而在制膠和電泳過程中，很難每次都將各項條件控制得完全一致，因此，用SDS-凝膠電泳法測定分子量，每次測定樣品必須同時做標準曲線，而不得利用另一次電泳的標準曲線。10/16/202360SDS測定蛋白質分子量注意

有許多蛋白質，是由亞基（如血紅蛋白）或兩條以上肽鏈（如α-胰凝乳蛋白酶）組成的，它們在SDS和巰基乙醇的作用下，解離成亞基或單條肽鏈。因此，對于這一類蛋白質，SDS-凝膠電泳測定的只是它們的亞基或單條肽鏈的分子量，而不是完整分子的分子量。為了得到更全面的資料，還必須用其它方法測定其分子量及分子中肽鏈的數目等，與SDS-凝膠電泳的結果互相參照。10/16/202361SDS測定蛋白質分子量注意

不是所有的蛋白質都能用SDS-凝膠電泳法測定其分子量，已發(fā)現有些蛋白質用這種方法測出的分子量是不可靠的。這些蛋白質有：電荷異?；驑嬒螽惓５牡鞍踪|，帶有較大輔基的蛋白質（如某些糖蛋白）以及一些結構蛋白如膠原蛋白等。

例如組蛋白F1，它本身帶有大量正電荷，因此，盡管結合了正常比例的SDS，仍不能完全掩蓋其原有正電荷的影響，它的分子量是21,000，但SDS-凝膠電泳測定的結果卻是35,000。10/16/202362SDS測定蛋白質分子量蛋白質樣品的處理

⑴標準蛋白質樣品的處理：取成套的標準蛋白質系列加入20μL樣品溶解液，使之充分溶解后置沸水浴中加熱3min，取出冷卻。⑵待測蛋白質樣品處理：取小牛血清白蛋白0.1mg及膜蛋白酶0.2mg或其他待測樣品(作為未知樣品)分別溶解于20-50μL樣品溶解液中，置沸水浴中加熱3min，取出冷卻至室溫。10/16/202363SDS測定蛋白質分子量電泳

上槽接負極，下槽接正極，然后打開電源開關立即進行電泳，開始時電流控制在10A，待樣品從濃縮膠進入分離膠后，將電流調節(jié)至20-25A，在整個電泳過程，電流維持不變，當指示染料澳盼藍遷移至距下沿1cm左右，即可停止電泳，整個電泳過程約需4h左右。10/16/202364SDS測定蛋白質分子量剝膠與染色

電泳結束后，關閉電源開關，從電泳槽中取下凝膠板并卸下硅膠框，用帶細長針頭的注射器吸滿蒸餾水，將針頭插入凝膠與玻板之間，沿玻板緩緩移動，并緩緩將蒸餾水注人，最后注入少量空氣，取出針頭，將兩玻板輕輕揭開后即可取出凝膠板，將之置培養(yǎng)皿中，沖洗膠面后，加入染色液，染色5h或過夜。10/16/202365SDS測定蛋白質分子量染色

10/16/202366SDS測定蛋白質分子量結果與分析

⑴繪制標準曲線將大培養(yǎng)皿放在一張坐標紙上，量出加樣端距細銅絲間的距離（cm）以及各蛋白質樣品區(qū)帶中心與加樣端的距離（cm），如圖18-6所示。按下式計算相對遷移率mR：相對遷移率mR=蛋白質樣品距加樣端遷移距離(cm)溴酚藍區(qū)帶中心距加樣端距離(cm)10/16/202367SDS測定蛋白質分子量結果與分析

以標準蛋白質的相對遷移率為橫坐標，標準蛋白質分子量為縱坐標在半對數坐標紙上作圖，可得到一條標準曲線。⑵根據未知蛋白質樣品相對遷移率直接在標準曲線上查出其分子量。⑶分析各蛋白質相對遷移率高氏主要是由什么決定的？10/16/202368SDS測定蛋白質分子量標準Marker蛋白的電泳圖譜10/16/202369SDS測定蛋白質分子量返回10/16/202370等電聚焦電泳IsoelectricFocusingElectrophoresis，IEFE10/16/202371一、IEFE定義

IEFE一種利用具有pH梯度的支持介質分離等點電不同的蛋白質的電泳技術。10/16/202372各種蛋白質各自都有一個等電點,在一特殊的pH環(huán)境中,蛋白質分子呈電中性,在電場中不會遷移。

等電聚焦就是在電泳介質中放入載體兩性電解質，當通以直流電時，兩性電解質即形成一個由陽極到陰極逐步增加的pH梯度，在此體系中，不同的蛋白質即移動到或聚焦于其相當的等電點位置上，也就是說被聚焦于一個狹的區(qū)帶中，電泳技術中的等電點聚焦也稱為聚焦電泳。

10/16/202373二、IEFE的特點

（一）優(yōu)點1.分辨率高（精密度可達0.01pH單位），靈敏度高（最低檢出量達0.1ng）。2.電泳區(qū)帶相當狹窄。3.重復性好。10/16/202374（二）缺點1.要求用無鹽溶液，而在無鹽溶液中蛋白質可能發(fā)生沉淀。2.樣品中的成分必須停留在其pI，不適用在pI不溶或發(fā)生變性的蛋白質。10/16/202375分辨率較不連續(xù)PAGE更高，特別適合于分離分子量相同而電荷不同的生物大分子。

10/16/202376三、IEFE的基本原理10/16/202377蛋白質分子在不同pH下的解離狀態(tài)NH3+NH3+NH2PPPCOOHCOO-COO-

pH＜pIpH＝pIpH＞pI10/16/202378

在電泳介質中放入載體兩性電解質，當通入直流電時，兩性電解質形成一個由正極到負極逐漸增加的pH梯度，正極附近是低pH區(qū)，負極附近是高pH區(qū)。10/16/202379蛋白質分子的電聚焦過程

+pI1

pI2pH=pIpI3

pIn-

abc

蛋白質分子在負極端蛋白質分子在正極端蛋白質樣品中各組分聚焦成區(qū)帶

—+10/16/202380

在這個從正極到負極pH逐漸增加的直流電場中，當蛋白質進入這個環(huán)境，不同的蛋白質帶上不同性質和數量的電荷，向著一定方向移動，遷移到與其相同的等電點位置上停留下來，即被聚焦于一個狹的區(qū)帶中，得以分離。

10/16/202381進行IEFE必須具備3個條件：

①有一個在電泳條件下基本穩(wěn)定、重復性良好的pH梯度②有一個抗對流的電泳材料，使已經分離的樣品不再重新混合③電泳后有適當的方法來鑒定分離的區(qū)帶10/16/202382（一）pH梯度的建立用多種兩性電解質混合物建立穩(wěn)定良好的pH梯度10/16/2023831.理想的載體兩性電解質（Carrierampholytes）應具備的特征：

①分子量要小，以便與被分離大分子物質分離；②化學性質穩(wěn)定；③各成分的pI彼此接近，并在其pI值附近有良好的緩沖能力；④在pI處具有足夠的電導，導電性均勻；⑤兩性電解質載體的數目要足夠多；⑥可溶性好；⑦對280nm的紫外光沒有或僅有很低的吸光度，不干擾樣品的測定。10/16/2023842.載體兩性電解質的合成

本質：一系列脂肪族多氨基多羧酸同系物和異構體，具有很多既不相同又十分接近相互連接的pI值。pH范圍：pH3~10丙烯酸+多乙烯多胺Ampholine（LKB）加成反應10/16/20238510/16/20238610/16/2023873.pH梯度的形成

載體兩性電解質是一系列不同分子的兩性電解質的混合物,在通電后，它們各自遷移到適當位置形成一個連續(xù)的pH梯度。

10/16/202388pH梯度形成的過程10/16/202389

㈠沒通電時的變化所有的載體兩性電解質分子都荷電，只是溶液中荷正電和荷負電的基團數目相等，凈電荷為零。10/16/202390㈡引入電場時的變化載體兩性電解質分子將向陰極或陽極遷移，帶有最低等電點的分子（荷最多的負電）將最快地向陽極遷移。當它達到凈電荷是零的位置時才停止。其次一些低pI的載體兩性電解質分子（荷其次多的負電）也將向陽極移動，直到它的凈電荷被減少到零才停止。10/16/20239110/16/202392㈢電泳結束后的變化

所有的載體兩性電解質分子以增加pI級數的辦法將分別在陽、陰極之間到達它們自己的位置而給出一個pI梯度。10/16/20239310/16/20239410/16/202395電解槽中，通電后，正負兩極都會發(fā)生電極反應：正極端反應：6H2O→O2+4H3O++4e-負極端反應：4H2O+4e-→2H2+4OH-在負極引起pH值的升高，在正極pH下降，另外在電極槽的正極端放的是酸性溶液，負極端放的是堿性溶液造成了在電極附近pH的急劇變化。（圖a）

10/16/202396pH+-a10/16/202397由于載體兩性電解質是一系列不同分子的兩性電解質的混合物所組成的，設其中某一成分為A，它的pI=pH’，當環(huán)境中的pH>pH’時，它帶負電荷，朝正極移動。(圖b)10/16/202398pH+-bpH=pH’A-10/16/202399當環(huán)境pI<pH’時，它帶正電荷，朝負極移動，直至移動到它的等點電處，在那里聚集。由于兩性電解質A在它的pI處具有一定的緩沖能力，因此在它附近形成一個pH穩(wěn)定區(qū)域。（圖c）10/16/2023100pH+-cpH=pH’A+10/16/2023101同樣載體兩性電解質中各種兩性電解質也會各自遷移到它們的等電點處，由于它們的數量足夠多，各自的等電點相差很小，從而形成一個pH梯度。（圖d）10/16/2023102pH+-d10/16/2023103假設在一個系統(tǒng)中含有極多的有適當的等電點和它的等電點處有一定的緩沖能力的兩性電解質，因此形成的pH梯度將是連續(xù)平滑的。

10/16/2023104

pH梯度的選擇在測定未知蛋白時，可先采用pH3-10的載體，經初步測定后改用較窄的以提高分辨率。10/16/202310510/16/202310610/16/2023107（二）支持介質的選擇

作用：防止擴散抗對流1.液體介質：蔗糖、Ficoll2.凝膠介質：瓊脂糖，葡聚糖、PAG10/16/2023108（三）聚焦后的檢測方法

10/16/20231091.各種染色法

考馬斯亮藍染色銀染色同工酶染色專一蛋白染色熒光標記以及免疫方法10/16/20231102.掃描與定量

激光光源強度大、單色性好，所以對IEFE譜帶的掃描最合適。

注意：操作程序和條件必須嚴格相同10/16/20231113.其它檢測方法電泳轉移雙相電泳滴定曲線分析10/16/2023112蛋白質樣品及分離容量

1、電聚焦有高的分辨力，一般樣品不需提

純，分析上可用來測定混合物中某一成

分的相對比例。

2、大量提純蛋白質，則應預先初步提純。

有些物質（如核酸）聚焦時會沉淀，應

預先除去。

3、蛋白質應不含鹽，因鹽濃度高電流大，

易發(fā)熱，而且鹽離子遷移至兩極產生酸

堿，占據了分離的有效部位。

10/16/2023113等電點聚焦的分離容量受下列幾個因素影響：1、聚焦后每一區(qū)帶的蛋白量取決于密度梯

度所能支持的蛋白質，提高密度可以提

高分離容量；

2、容量與區(qū)帶高度的平方成正比，降低電

壓可使區(qū)帶變寬，提高容量，但分辨率

降低，聚焦時間長，用窄的pH梯度范圍

可以使區(qū)帶變寬，提高分辨率。

3、分離的容量與柱的橫截面成正比，用440

毫克柱時，可加粗蛋白質5克，每一區(qū)帶

可達一克。10/16/2023114四、等點聚焦電泳的應用

1.分析分離制備蛋白質、多肽①區(qū)分人血清蛋白②測出異常免疫球蛋白③基因分型④csf中寡克隆區(qū)帶的檢測2.測定pI可鑒定蛋白質、多肽3.雙相電泳中，IEFE作為第一相10/16/202311510/16/2023116參考書目《蛋白質電泳實驗技術》科學出版社

郭堯君《蛋白質技術手冊》

科學出版社

汪家政

范敏

主編《電泳》

科學出版社

何忠效張樹政

主編10/16/2023117實驗血紅蛋白的等點聚焦電泳

10/16/2023118[原理]

Hb具有四條多肽鏈和球蛋白

（α、β、γ、δ）

pI

HbAα2β