水消毒效果鑒定試驗

水消毒效果鑒定試驗1生活飲用水消毒效果鑒定1.1目的檢測生活飲用水消毒劑與消毒器械的殺菌效果，以驗證其對生活飲用水消毒能否達到衛(wèi)生合格標(biāo)準(zhǔn)。1.2試驗器材(1)大腸桿菌(8099)懸液。取37℃培養(yǎng)18h～24h的新鮮大腸桿菌斜面，用生理鹽水洗下菌苔，混勻后再用生理鹽水適當(dāng)稀釋，配制成試驗用大腸桿菌懸液。(2)微孔濾膜濾器和濾膜(濾膜孔徑為0.45μm～0.65μm，濾膜大小示濾器型號確定，目前常用有直徑為35mm和47mm兩種)。(3)抽濾水泵或氣泵。(4)恒溫水浴箱。(5)秒表。(6)三角燒瓶。(7)廣口玻璃瓶(500ml)。(8)無齒鑷子。(9)品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基：見附錄A。(10)中和劑(鑒定合格者，見2.1.1.5)。(11)細(xì)菌定量殺滅試驗用其他器材(見2.1.1.7)。(12)天然水樣。(13)模擬現(xiàn)場消毒裝置(見1.8)。(14)磁力攪拌器。1.3試驗階段飲用水消毒效果的鑒定應(yīng)經(jīng)過實驗室殺菌試驗，天然水樣消毒試驗兩個階段的檢測。實驗室試驗的目的是以大腸桿菌為試驗菌，用懸液定量殺菌試驗法測出在試管中消毒所需的劑量。天然水樣消毒試驗是由自然水體取樣，進一步驗證受試消毒劑或方法對成分較復(fù)雜的天然水的消毒效果。對用于較大水體(如人工游泳池水、高層建筑二次供水)消毒的設(shè)備和方法，必要時尚需進行模擬現(xiàn)場或現(xiàn)場試驗，以進一步驗證其消毒效果。由于生活飲用水的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，除微生物外還需考慮化學(xué)污染等方面，因此對其安全評價尚需由有關(guān)專業(yè)單位對其他條件，例如化學(xué)物質(zhì)含量和pH值等，進行檢測和判定，以對所鑒定的消毒劑或器械做出合格與否的綜合評價。1.4試驗菌污染水樣的配制試驗用試驗菌污染水樣用于試驗室消毒試驗。配制時，將用生理鹽水配制的大腸桿菌懸液加入脫氯的自來水或蒸餾水中，使其含菌量達到5′104cfu/100ml～5′105cfu/100ml。1.5試驗菌污染水樣中活菌的培養(yǎng)計數(shù)(1)將纖維濾膜在蒸餾水中煮沸消毒3次，每次15min。每次煮沸后需更換蒸餾水洗滌2～3次，以除去殘留溶劑。(2)將濾器用壓力蒸汽滅菌(121℃，20min)，也可用酒精火焰滅菌。(3)用無菌鑷子夾取無菌的濾膜邊緣，將粗燥面向上，貼放在已滅菌濾器的濾床上，穩(wěn)妥地固定好濾器。取一定量待檢水樣(稀釋或不稀釋)注入濾器中，加蓋，打開抽氣閥門，在負(fù)壓0.05Mpa下抽濾。(4)水樣濾完后，再抽氣約5s，關(guān)上濾器閥門，取下濾器。用無菌鑷子夾取濾膜邊緣，移放在品紅亞硫酸鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，濾膜截留細(xì)菌面向上。濾膜應(yīng)與瓊脂培養(yǎng)基完全緊貼，當(dāng)中不得留有氣泡，然后將平板倒置，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)22h～24h。(5)觀察結(jié)果和計數(shù):計數(shù)濾膜上生長帶有金屬光澤的黑紫色大腸桿菌菌落，并計算出染菌水樣中含有的大腸桿菌數(shù)(cfu/100ml)。1.6實驗室殺菌試驗操作程序（1）飲水消毒劑殺菌試驗1）試驗分組①試驗組。申請消毒產(chǎn)品衛(wèi)生許可批件時，按使用說明書規(guī)定的最短劑量，設(shè)定1個濃度，3個作用時間（使用說明書規(guī)定的最短作用時間，最短作用時間的1.5倍和最短作用時間的0.5倍），測定其對大腸桿菌的殺菌效果。進行消毒產(chǎn)品監(jiān)督檢測時，按使用說明書規(guī)定的最短劑量，設(shè)定1個濃度，1個作用時間（使用說明書規(guī)定的最短作用時間），測定其對大腸桿菌的殺菌效果。②陽性對照組，以未經(jīng)消毒的試驗菌污染水樣進行活菌培養(yǎng)計數(shù);③陰性對照組，以試驗所用同批次未經(jīng)使用的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，觀察有無細(xì)菌生長。2）操作程序①按1.4所示方法配制試驗菌污染水樣。②將裝有試驗菌污染水樣的三角燒瓶放入恒溫水浴箱(20℃±2℃)中，開動磁力攪拌器，使細(xì)菌在水中分布均勻。先取2份試驗菌污染水樣，按1.5所示方法進行大腸桿菌活菌計數(shù)(陽性對照組)。③待水樣的溫度恒定后加入消毒劑，迅速攪拌均勻。從開始加消毒劑起計時，按規(guī)定時間吸取水樣，注入裝有中和劑的無菌三角燒瓶中，以終止消毒作用。④將中和后水樣，分別取100ml，10ml，1ml各2份，按1.5所示方法進行大腸桿菌的活菌培養(yǎng)計數(shù)。⑤將未接種大腸桿菌的試驗用同批培養(yǎng)基平板2個，置溫箱中培養(yǎng)(陰性對照組)。⑥試驗重復(fù)3次。3）結(jié)果評價當(dāng)陽性對照組平均菌量在5′104cfu/100ml～5′105cfu/100ml，陰性對照組均無菌生長時。在3次試驗中均使大腸桿菌下降至0/100ml的最低劑量，可判定為實驗室試驗中飲水消毒最低有效劑量。若陽性對照和陰性對照未達上述要求，應(yīng)尋找原因，糾正后重做試驗。（2）飲水消毒器殺菌試驗本節(jié)飲水消毒器械指能產(chǎn)生消毒液并用于飲水消毒的飲水消毒裝置。1）試驗分組①試驗組。申請消毒產(chǎn)品衛(wèi)生許可批件時，按使用說明書規(guī)定的最低劑量，設(shè)定1個作用濃度（使用說明書規(guī)定的最低作用濃度）和3個作用時間（使用說明書規(guī)定的最短作用時間，最短作用時間的1.5倍和最短作用時間的0.5倍），測定其對大腸桿菌的殺菌效果。進行消毒產(chǎn)品監(jiān)督檢測時，按使用說明書規(guī)定的最低劑量，設(shè)定1個濃度（使用說明書規(guī)定的最低作用濃度）和1個作用時間（使用說明書規(guī)定的最短作用時間），測定其對大腸桿菌的殺菌效果。②陽性對照組，以未經(jīng)消毒的試驗菌污染水樣進行活菌培養(yǎng)計數(shù);③陰性對照組，以試驗所用同批次未經(jīng)使用的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，觀察有無細(xì)菌生長。2）操作程序①按1.4所示方法配制試驗菌污染水樣。②取2份試驗菌污染水樣，按1.5所示方法進行大腸桿菌活菌計數(shù)(陽性對照組)。③應(yīng)用氣壓法或水泵法進行消毒處理。應(yīng)用氣壓法時，按要求聯(lián)接高壓(2kg/cm2～3kg/cm2)氣源、耐壓水樣貯水器（3kg/cm2～5kg/cm2）、流量計和飲水消毒器。應(yīng)用水泵法時，則按要求聯(lián)接耐壓水樣貯水器（3kg/cm2～5kg/cm2）、水泵、流量計和飲水消毒器。然后將加有試驗菌的水樣通過消毒器，將消毒過的水樣放置至規(guī)定時間，再分別取其加于含中和劑的滅菌三角瓶中，混勻。分別吸取中和后水樣100ml，10ml，1ml各2份，按1.5所示方法進行大腸桿菌的活菌計數(shù)。④將未接種大腸桿菌的試驗用同批培養(yǎng)基平板2個，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(陰性對照組)。⑤試驗重復(fù)3次。3）結(jié)果評價當(dāng)陽性對照組平均含菌量在5′104cfu/100ml～5′105cfu/100ml。陰性對照組均無菌生長時。在3次試驗中使大腸桿菌均下降至0/100ml的最低劑量，可判定為實驗室試驗中飲水消毒最低有效劑量。若陽性對照組和陰性對照組含菌量未達上述要求，應(yīng)尋找原因，糾正后重做試驗。（3）飲水過濾器除菌試驗1）試驗分組①試驗組。申請消毒產(chǎn)品衛(wèi)生許可批件時，按使用說明書規(guī)定的最大流量，測定其對大腸桿菌的除菌效果。②陽性對照組，以未經(jīng)消毒的試驗菌污染水樣進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。③陰性對照組，以試驗所用同批次未經(jīng)使用的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，觀察有無細(xì)菌生長。2）操作程序①按1.4所示方法配制試驗菌污染水樣。②取2份試驗菌污染水樣，按1.5所示方法進行大腸桿菌活菌計數(shù)(陽性對照組)。③按使用說明書規(guī)定的最大流量，將試驗菌污染水樣(見1.4)分段通過飲水過濾除菌裝置。按規(guī)定過濾的水量，用無菌三角瓶分段采集:初始、1/4、2/4、3/4、4/4等各段流出的水樣(不需加中和劑)。④對過濾后各段水樣，分別取100ml、10ml、1ml各2份，進行大腸桿菌活菌培養(yǎng)計數(shù)(見1.5)。⑤將未接種大腸桿菌的試驗用同批培養(yǎng)基平板2個，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(陰性對照組)。⑥試驗重復(fù)3次。3）結(jié)果評價當(dāng)陽性對照組平均含菌量在5′104cfu/100ml～5′105cfu/100ml。陰性對照組均無菌生長時。在3次試驗所有流量段水樣中大腸桿菌下降至0/100ml時，可判為實驗室試驗中飲水消毒效果合格。若陽性對照組和陰性對照組含菌量未達上述要求，應(yīng)尋找原因，糾正后重做試驗。1.7殺菌效果影響因素測定試驗操作程序(用于飲用水化學(xué)消毒試驗)（1）水溫影響試驗:將人工染有大腸桿菌的水樣，溫度分別調(diào)控在5℃±2℃、20℃±2℃、30℃±2℃條件下，對不同溫度的水樣，按說明書上規(guī)定的最低使用劑量（1個濃度，1個作用時間）進行殺菌試驗，觀察水溫的影響。試驗程序同1.5或1.6。試驗重復(fù)3次。3次試驗中，3個溫度組殺菌效果均達合格標(biāo)準(zhǔn)，判為溫度對該消毒劑殺菌效果影響不明顯，所試劑量可在5℃～30℃條件下使用。否則應(yīng)依據(jù)殺菌效果確定僅可在殺菌效果均達合格標(biāo)準(zhǔn)的溫度區(qū)間內(nèi)使用。試驗中應(yīng)設(shè)陽性對照和陰性對照組。兩對照組結(jié)果未達要求見1.6（1）3），應(yīng)尋找原因，糾正后重做試驗。（2）有機物影響試驗①腐殖酸配制：取0.1g腐殖酸（分析純）用少許2.0mol/L氫氧化鈉溶液溶解，加蒸餾水50ml，用濾紙過濾至100ml容量瓶中，用2.0mol/LHCl溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，并定容至100ml，比色測定實際色度。②水樣制備：在水樣中加入腐殖酸，比照標(biāo)準(zhǔn)色度管，使色度各為0度、10度、15度，然后分別加入大腸桿菌懸液，配成不同色度的人工染有大腸桿菌水樣。③消毒處理：按說明書上推薦的最低使用劑量(1個濃度，1個作用時間)進行殺菌試驗，觀察有機物的影響。試驗程序同1.6（1）或1.6（2）。試驗重復(fù)3次。④3次試驗中，3個濃度的有機物組殺菌效果均達合格標(biāo)準(zhǔn)，判為有機物對該消毒劑殺菌效果影響不明顯，所試劑量可用于色度低于15度水的處理。否則應(yīng)依據(jù)殺菌效果確定僅可用于低于殺菌效果均達合格標(biāo)準(zhǔn)色度水的處理。試驗中應(yīng)設(shè)陽性對照和陰性對照組。兩對照組結(jié)果未達要求見1.6（1）3），應(yīng)尋找原因，糾正后重做試驗。3）水中pH值的影響試驗①水樣制備：用氫氧化鈉（分析純）或鹽酸（分析純）調(diào)水樣pH值分別調(diào)為6.5，7.0和8.5，然后加入大腸桿菌懸液，配成不同pH值的試驗菌污染水樣。②消毒處理：按說明書上推薦的最低使用劑量(1個濃度，1個作用時間)進行殺菌試驗，觀察pH值的影響。試驗程序同1.6（1）或2.1.6（2）。試驗重復(fù)3次。③3次試驗中，3種pH值的消毒劑濃度殺菌效果均達合格標(biāo)準(zhǔn)，判為pH值對該消毒劑殺菌效果影響不明顯，所試劑量可用于pH值6.5～8.5水的處理。否則應(yīng)依據(jù)殺菌效果確定僅可在殺菌效果均達合格標(biāo)準(zhǔn)的pH值區(qū)間內(nèi)使用。試驗中應(yīng)設(shè)陽性對照和陰性對照組。兩對照組結(jié)果未達要求見1.6（1）3），應(yīng)尋找原因，糾正后重做試驗。1.8模擬現(xiàn)場試驗和現(xiàn)場試驗考慮到實用情況下各種水質(zhì)對消毒效果的影響，根據(jù)產(chǎn)品申報的使用范圍，選用天然水樣如井水、河水、湖水或高層建筑貯水箱的水等進行消毒試驗。（1）飲水消毒劑對天然水樣殺菌試驗1)根據(jù)說明書的最低使用劑量選擇1個濃度，1個作用時間，對天然水樣進行殺菌試驗。同時設(shè)置陽性對照組與陰性對照組。2)將裝有天然水樣的三角燒瓶放入恒溫水浴箱(20℃±2℃)中，開動磁力攪拌器，使細(xì)菌在水中分布均勻。取2份同批同類天然水樣，每份100ml，按1.5所示方法計數(shù)大腸菌群數(shù)(陽性對照組)。3)待水樣的溫度恒定后，加入消毒劑，迅速攪拌均勻。從開始加消毒劑起計時，按規(guī)定時間吸取水樣，注入裝有中和劑的無菌三角燒瓶中，以終止消毒作用。4)將中和后水樣，分別取100ml2份，按1.5所示方法進行大腸菌菌群的活菌培養(yǎng)計數(shù)。5)將未接種水樣的試驗用同批培養(yǎng)基平板2個，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(陰性對照組)。6)試驗重復(fù)3次。當(dāng)陽性對照組均有菌生長。陰性對照組均無菌生長時，可判定在3次試驗中均使大腸菌菌群下降至0/100ml，可判定為對天然水樣消毒合格。7)如陽性對照組含菌量未達上述要求和陰性對照組有菌生長，應(yīng)尋找原因，糾正后重做試驗。（2）飲水消毒器對天然水樣殺菌試驗1)根據(jù)使用說明書的最低使用劑量選擇1個濃度，1個作用時間，對天然水樣進行殺菌試驗。2)試驗前，先取2份試驗用天然水樣，每份100ml，按1.5所示方法進行大腸菌菌群的活菌培養(yǎng)計數(shù)(陽性對照組)。然后，將天然水樣本按1.6（2）2）要求通過消毒器進行消毒處理，將處理后水樣移到含中和劑的三角燒瓶中，混勻。3)將中和的水樣2份，每份100ml，按1.5所示方法進行大腸菌菌群的活菌培養(yǎng)計數(shù)。4)大腸菌菌群的活菌培養(yǎng)計數(shù)量，按1.5所示方法檢測。用濾膜過濾法檢測時，所用水量應(yīng)一致，約數(shù)毫升。污染嚴(yán)重的天然水，檢測時可適當(dāng)稀釋。5)將未接種水樣的試驗用同批培養(yǎng)基平板2個，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(陰性對照組)。6)試驗重復(fù)3次。當(dāng)陽性對照組均有大腸菌群生長，陰性對照組均無菌生長時，在3次試驗中均使大腸菌群下降至0/100ml，可判定為對天然水樣消毒合格。7)如陽性對照組含菌量未達上述要求和陰性對照組有菌生長，應(yīng)尋找原因，糾正后重做試驗。（3）飲水過濾器對天然水樣的除菌試驗1)取2份試驗用天然水樣，每份100ml，按1.5所示方法進行大腸菌菌群的活菌培養(yǎng)計數(shù)。所得結(jié)果作為過濾前含菌量(陽性對照組)。2)按過濾器產(chǎn)品規(guī)定流量，將天然水樣分段通過過濾器。按規(guī)定過濾的水量，用無菌三角瓶分段采集:初始、1/4、2/4、3/4、4/4等各段流出的水(不需加中和劑)。3)對過濾后各段水樣，分別取100ml、10ml、1ml各2份，按1.5所示方法進行大腸菌菌群的活菌培養(yǎng)計數(shù)。4)將未接種水樣的試驗用同批培養(yǎng)基平板2個，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(陰性對照組)。5)試驗重復(fù)3次。當(dāng)陽性對照組均有菌生長，陰性對照組均無菌生長，3次試驗中所有流量段水樣大腸菌群均降至0/100ml，可判為對天然水樣的消毒效果合格。6)如陽性對照組和陰性對照組含菌量未達上述要求，應(yīng)尋找原因，糾正后重做試驗。（4）高層建筑二次供水消毒設(shè)備和方法對較大水體消毒設(shè)備和方法的鑒定，在模擬現(xiàn)場和現(xiàn)場試驗中選做其一即可，但首先應(yīng)考慮后者，只有在無法進行現(xiàn)場試驗時，才做模擬現(xiàn)場試驗。大水體現(xiàn)場消毒試驗的操作程序，隨當(dāng)時當(dāng)?shù)厍闆r，設(shè)備大小和所采取的消毒方法而定。1)高層建筑二次供水消毒有兩種主要方式，一是直接對貯水池中的水用物理或化學(xué)法消毒，一是將貯水池水引出通過消毒裝置(如紫外線照射裝置、過濾裝置或消毒劑添加和攪拌裝置等)進行消毒，遂后再輸送到用戶。2)直接對水池中水進行消毒的設(shè)備和方法的鑒定，可參照游泳池水消毒設(shè)備和方法鑒定的有關(guān)要求進行消毒和采樣檢測(見2)。試驗劑量選用使用說明書中規(guī)定者，樣本按1.5所示方法進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。檢測中陰性對照組的設(shè)置和結(jié)果的評價，與天然水樣殺菌試驗相同[見1.8（1）；1.8（2）；1.8（3）]。但檢測需重復(fù)5次，結(jié)果均符合要求者(使用含氯消毒劑消毒的水樣，剩余氯量為0.3mg/L～0.5mg/L)可判為合格。3)將水引出后消毒的設(shè)備和方法的鑒定，可在進入消毒器和消毒后出水口管道上各加一三通閥門，分別采集消毒前和消毒后水樣。將樣本按1.5所示方法進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。試驗劑量選用使用說明書規(guī)定者。檢測中陰性對照組的設(shè)置和結(jié)果的評價，與天然水樣殺菌試驗相同[見1.8（1）；1.8（2）；1.8（3）]。但檢測需重復(fù)5次，結(jié)果均符合要求者(使用含氯消毒劑消毒的水樣，剩余氯量為0.3mg/L～0.5mg/L)可判為合格。4)對條件不容許加裝三通閥門時，可進行模擬現(xiàn)場試驗。先設(shè)一大型水箱(大小根據(jù)鑒定的消毒設(shè)備流量和試驗時間計算)，在其出水口下游用管道依次連接水箱出口閥門、排水泵、三通閥門(一端接下面的流量計，另一端接一回流管，必備需要時可將菌懸液送回水箱)、流量計和所鑒定的消毒裝置。消毒裝置的進水口前裝一三通閥門，以備采集陽性對照水樣。試驗時，水箱內(nèi)盛裝含大腸桿菌懸液(大腸桿菌濃度在5′104cfu/100ml～5′105cfu/100ml，見1.4)的水樣。打開水箱出口閥門，根據(jù)流量計所示，用閥門和水泵控制流出水樣的量和壓力，并使按規(guī)定流量進入消毒裝置。當(dāng)水流按規(guī)定流量穩(wěn)定地由消毒裝置出水口流出后，先采陽性對照水樣，而后由消毒裝置出水口采集消毒后水樣。將水樣按2.5.5所示方法進行活菌