第3次：體外培養(yǎng)物的生長生物學(xué)060209

體外培養(yǎng)的原理與技術(shù)我的細(xì)胞培養(yǎng)計劃（手寫和打印均可）應(yīng)包括如下內(nèi)容：1、培養(yǎng)目的：2、實驗室條件：已具備的條件；尚未具備的條件。3、培養(yǎng)方法：

1）培養(yǎng)基的選用（含應(yīng)補(bǔ)充的附加成分）及培養(yǎng)所需的其它用液；2）具體操作方法及步驟（按實際操作分步列出）；3）培養(yǎng)過程的觀察的注意事項；4、目的細(xì)胞的鑒定方法：1）具體方法（可列1～3種）；2）應(yīng)出現(xiàn)的結(jié)果：陽性；陰性。5、困難及解決辦法：本課程的作業(yè)及考核依據(jù)之一我的細(xì)胞培養(yǎng)計劃（手寫和打印均可）注意事項：1、作業(yè)上交時間及地點(diǎn)：時間：校歷第16周（08.12.19）前地點(diǎn)：104館三樓（組胚教研室）2、作業(yè)必須標(biāo)明的項目：題目學(xué)號

姓名專業(yè)導(dǎo)師本課程的作業(yè)及考核依據(jù)之一體外培養(yǎng)的基本原理與技術(shù)一、從體內(nèi)生存環(huán)境到體外生長條件二、體外培養(yǎng)的基本方法和過程三、體外培養(yǎng)物的生長生物學(xué)四、細(xì)胞分離與純化五、細(xì)胞系（株）、細(xì)胞克隆六、培養(yǎng)物的觀察檢測方法體外培養(yǎng)有機(jī)體的結(jié)構(gòu)成分，其生長生物學(xué)特征具有兩重性：一方面，培養(yǎng)物取自于體內(nèi)，它的基本生物學(xué)特征仍與體內(nèi)的細(xì)胞相似，乃所謂“萬變不離其宗”。另一方面，培養(yǎng)物在體外條件下生長，生長環(huán)境與體內(nèi)相比有很大差異，尤其是失去了在體時有機(jī)體整體的生長調(diào)節(jié)機(jī)制，因而培養(yǎng)物的許多生長生物學(xué)行為將會發(fā)生改變，此即為“入鄉(xiāng)隨俗”。分析和評價體外培養(yǎng)的結(jié)果需同時考慮到此兩方面的特征，既不能生搬硬套在體細(xì)胞的生物學(xué)規(guī)律，也不要完全否認(rèn)培養(yǎng)物的生長生物學(xué)行為與體內(nèi)的一致性。體外培養(yǎng)物的生長生物學(xué)體外培養(yǎng)物的生長生物學(xué)二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)三、影響動物細(xì)胞體外生長的因素一、體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型一、體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型按照體外培養(yǎng)的結(jié)構(gòu)成分可將培養(yǎng)的類型分為組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、器官培養(yǎng)以及整體培養(yǎng)等。下面討論的主要是細(xì)胞培養(yǎng)時的情況。體外培養(yǎng)的細(xì)胞，按照其生長方式大體可分為黏附型和懸浮型兩大類。黏附型細(xì)胞是必須附著在某一固相支持物表面才能生長的細(xì)胞。懸浮型細(xì)胞則是不必附著于固相支持物表面，而在懸浮狀態(tài)下即可生長的細(xì)胞。絕大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞屬于黏附型細(xì)胞，只有少數(shù)細(xì)胞類型如某些腫瘤細(xì)胞和白細(xì)胞以及有些微生物可在懸浮狀態(tài)下生長。（一）黏附型細(xì)胞黏附(adherence)是大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞在體內(nèi)生存和生長發(fā)育的基本存在方式。黏附有兩方面含義：其一是細(xì)胞與細(xì)胞之間相互接觸；其二是細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合。當(dāng)細(xì)胞被放到體外環(huán)境中以后，需要黏附于某一固相表面才能生存和生長，因而屬于黏附型細(xì)胞。其中有一些細(xì)胞類型惟有黏附于固相表面才能生存，這樣的細(xì)胞被稱為黏附（錨定或錨著）依賴型（性）細(xì)胞（anchorage-dependentcell）。一、體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型由于體內(nèi)、外生長環(huán)境不同，故細(xì)胞在體內(nèi)、外的黏附方式也存在差異。在體內(nèi)，細(xì)胞的黏附是全方位的，細(xì)胞的各個部分都與周圍環(huán)境相接觸，因而細(xì)胞外形具有復(fù)雜的立體特征。當(dāng)細(xì)胞被轉(zhuǎn)移到體外環(huán)境中之后，能夠提供附著面的只有培養(yǎng)器皿的壁，大多數(shù)情況下，細(xì)胞只有一個附著平面，因而培養(yǎng)細(xì)胞的外形一般與在體時明顯不同。（一）黏附型細(xì)胞一、體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型按照培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)，可將其分為幾大類型：上皮型細(xì)胞成纖維細(xì)胞型細(xì)胞游走型細(xì)胞多形型細(xì)胞（一）黏附型細(xì)胞一、體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型上皮型細(xì)胞：體外培養(yǎng)中的上皮型細(xì)胞泛指那些外形上類似上皮細(xì)胞，大體為扁平樣的多種培養(yǎng)細(xì)胞。這類培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)學(xué)特征是：扁平，形態(tài)較為規(guī)整，細(xì)胞大致呈多角形，胞體近中央處有扁圓的細(xì)胞核；細(xì)胞之間相互銜接或呈鑲嵌狀緊密排列；當(dāng)細(xì)胞緊密排列時，細(xì)胞可為六角形或多角形，因為相互擁擠而呈現(xiàn)“鋪路石樣”，局部可構(gòu)成單層的上皮樣“膜片組織”。（一）黏附型細(xì)胞一、體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型培養(yǎng)的上皮型細(xì)胞成纖維細(xì)胞型細(xì)胞：成纖維細(xì)胞型的細(xì)胞外形與體內(nèi)成纖維細(xì)胞形狀相似，胞體大致呈梭形或不規(guī)則形。這類培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)學(xué)特征是：細(xì)胞呈梭形、長條形、多角形或不規(guī)則形，后兩種情況下常具寬扁胞質(zhì)突起（片狀偽足）；胞質(zhì)近中央處有橢圓形胞核，胞體一般鋪展很開。多數(shù)情況下，細(xì)胞之間排列疏松，有較大細(xì)胞間隙。有時也見相互平行排列，成群細(xì)胞呈現(xiàn)放射狀、漩渦狀等走行形式。（一）黏附型細(xì)胞一、體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞型細(xì)胞游走型細(xì)胞：體外培養(yǎng)中的游走型細(xì)胞具有類似巨噬細(xì)胞樣的特征。其形態(tài)學(xué)特征是：細(xì)胞相互分散，一般不形成群落；細(xì)胞內(nèi)易出現(xiàn)色暗的吞噬性顆粒，常具有胞質(zhì)突起（偽足）。這類細(xì)胞在培養(yǎng)器皿壁上生長的位置不固定，經(jīng)常處于較活躍的變形及游走狀態(tài)，因此外形不規(guī)則且不斷變化。當(dāng)細(xì)胞密度增大相互連接成片時，游走受限，形狀上類似上皮型細(xì)胞或成纖維細(xì)胞型的細(xì)胞。（一）黏附型細(xì)胞一、體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型多形型細(xì)胞是一些形態(tài)上不規(guī)則的細(xì)胞，不規(guī)則形態(tài)由寬扁的胞質(zhì)突起所致。其細(xì)胞一般分胞體和胞突兩部分。胞突為細(xì)長形，似絲狀偽足。胞體雖略呈多角形，但沒有成纖維細(xì)胞型那樣不規(guī)則。體外培養(yǎng)中呈現(xiàn)多形型的細(xì)胞最常見的類型是神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。多形型細(xì)胞：（一）黏附型細(xì)胞一、體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型培養(yǎng)中的星形膠質(zhì)細(xì)胞（8d）星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)中的星形膠質(zhì)細(xì)胞（傳1代）培養(yǎng)中的星形膠質(zhì)細(xì)胞（傳2代）星形膠質(zhì)細(xì)胞（傳3代）（GFAP標(biāo)記免疫熒光）上述四種形態(tài)學(xué)類型是培養(yǎng)細(xì)胞的常見形式，也是較為明顯的幾種形態(tài)學(xué)形式。然而，許多情況下，所培養(yǎng)的細(xì)胞并不一定呈現(xiàn)典型的形態(tài)形式，而出現(xiàn)一些過渡形態(tài)。能夠影響細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征的主要因素包括血清成分、培養(yǎng)液中的添加成分、培養(yǎng)液的酸堿度、氣相環(huán)境、溫度條件等。例如，許多已分化的細(xì)胞，在有血清培養(yǎng)液中生長或者在無血清培養(yǎng)液中生長，形態(tài)上就有差異。（一）黏附型細(xì)胞一、體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型二、懸浮型細(xì)胞這類細(xì)胞的生命活動不需要固相支持物。其主要形態(tài)學(xué)特點(diǎn)是胞體始終為球形。能以懸浮狀態(tài)生長的細(xì)胞，密度一般都可以較大，故培養(yǎng)的效率高。以這種方式培養(yǎng)細(xì)胞時，轉(zhuǎn)換培養(yǎng)液、補(bǔ)加培養(yǎng)液以及收獲細(xì)胞都比較容易。不足之處是不方便觀察。一、體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特性與其在體內(nèi)生長時到底有哪些差別？這是運(yùn)用體外培養(yǎng)這門技術(shù)研究生命科學(xué)和從事生產(chǎn)實踐活動首先要了解和掌握的問題。（一）培養(yǎng)細(xì)胞分化狀態(tài)的變化（二）培養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程（四）體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)（五）植塊培養(yǎng)物的生長生物學(xué)（一）培養(yǎng)細(xì)胞分化狀態(tài)的變化由受精卵通過細(xì)胞增生與分化產(chǎn)生原始的胚層結(jié)構(gòu)，再由后者進(jìn)一步分化、發(fā)育和衍生出體內(nèi)各種各樣的細(xì)胞及體內(nèi)組織器官，這是脊椎動物胚胎發(fā)育的基本過程。在以后的生長發(fā)育過程中，體內(nèi)每一個細(xì)胞都將始終受到三方面的影響與調(diào)節(jié)，即來自體外環(huán)境的影響、體內(nèi)神經(jīng)一體液因素的調(diào)節(jié)以及細(xì)胞與局部微環(huán)境的相互作用。這些因素控制著體內(nèi)細(xì)胞的增殖活動、代謝和功能狀態(tài)，維持著細(xì)胞的分化特征。二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)當(dāng)有機(jī)體的細(xì)胞被置于體外環(huán)境中培養(yǎng)時，主要的體內(nèi)調(diào)節(jié)因素喪失，細(xì)胞所面臨的基本生活環(huán)境就是培養(yǎng)液以及大為減弱的相鄰細(xì)胞間的相互作用。失去了體內(nèi)多方面調(diào)節(jié)因素的壓力，細(xì)胞隨即轉(zhuǎn)向“自由”生長狀態(tài)。增殖約束逐漸取消，分化特征逐漸減弱，原本各種各樣的分化細(xì)胞，逐漸失去各自的形態(tài)與功能“個性”，表現(xiàn)出某種趨同性，這種現(xiàn)象被稱為去分化或脫分化（dedifferentiation）。（一）培養(yǎng)細(xì)胞分化狀態(tài)的變化二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)相反，低密度生長、低Ca2+濃度（僅100～600μmol/L）以及有細(xì)胞生長因子的存在（如表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、血小板來源的生長因子等），有利于細(xì)胞增殖，不利于細(xì)胞分化。根據(jù)實驗?zāi)康牡牟煌?，有時為了防止培養(yǎng)細(xì)胞“自主”去分化，可以采取某些措施，如在培養(yǎng)時：*提高接種的細(xì)胞密度（高于105個／cm2）；*提高Ca2+濃度（至300～1500μmol/L）；*使用誘導(dǎo)分化的激素與／或生長因子。（一）培養(yǎng)細(xì)胞分化狀態(tài)的變化二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)（二）培養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力分裂增殖和生長發(fā)育（后者包含分化）是體外培養(yǎng)細(xì)胞的兩大生命特征。大多數(shù)類型的有機(jī)體細(xì)胞在培養(yǎng)過程中能始終保持有絲分裂的能力。培養(yǎng)中的細(xì)胞只要生長空間許可，就會發(fā)生分裂增殖。只有當(dāng)增殖生長至相互緊密接觸成片時，便發(fā)生所謂的“接觸抑制”現(xiàn)象而停止增殖。二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)培養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力一般與該種細(xì)胞在體內(nèi)的增殖能力相仿。胚胎組織細(xì)胞相對于成年組織細(xì)胞，體外生長時更易增殖和生長。例如：二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)體外培養(yǎng)的人胚成纖維細(xì)胞可連續(xù)經(jīng)歷150～300個增殖周期，不間斷地反復(fù)傳代達(dá)30～50代，最后衰老死亡，壽命約為一年。（二）培養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力大多數(shù)分化程度較高的細(xì)胞，如上皮源性的細(xì)胞，在體外培養(yǎng)時僅能傳代幾次或10余次。其原因：除了胚胎細(xì)胞本身的生命力比成年組織細(xì)胞旺盛外，還有一個可能就是，胚胎組織內(nèi)存在分化水平較低的、可增殖的前體細(xì)胞或者胚胎干細(xì)胞。培養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力一般與該種細(xì)胞在體內(nèi)的增殖能力相仿。胚胎組織細(xì)胞相對于成年組織細(xì)胞，體外生長時更易增殖和生長。例如：二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)（二）培養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力高度分化的有絲分裂后細(xì)胞如神經(jīng)元和肌肉細(xì)胞，體外培養(yǎng)時的生長繁殖能力與其在體內(nèi)時相似，除了來自早期胚胎的材料尚能進(jìn)行很有限的數(shù)次分裂外，一般沒有分裂增殖能力，體外培養(yǎng)這些細(xì)胞僅能表現(xiàn)一定程度的生長發(fā)育現(xiàn)象，通常不進(jìn)行傳代。培養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力一般與該種細(xì)胞在體內(nèi)的增殖能力相仿。胚胎組織細(xì)胞相對于成年組織細(xì)胞，體外生長時更易增殖和生長。例如：二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)（二）培養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力只有那些獲得永生性（或稱不死性）的腫瘤細(xì)胞才可以在體外幾乎無期限地傳代下去。培養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力一般與該種細(xì)胞在體內(nèi)的增殖能力相仿。胚胎組織細(xì)胞相對于成年組織細(xì)胞，體外生長時更易增殖和生長。例如：二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)（二）培養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程從體外培養(yǎng)的總的過程來看，體外培養(yǎng)細(xì)胞的整個生命活動可分為三個時期：1、原（初）代培養(yǎng)期2、傳（繼）代培養(yǎng)期3、衰退期二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)1、原代培養(yǎng)期原（初）代培養(yǎng)期是指從體內(nèi)取出組織細(xì)胞開始培養(yǎng)到第一次進(jìn)行傳代之前的這一段時期。一般為1～4周。由于體外培養(yǎng)中的“傳代”并沒有與細(xì)胞周期的長短確切相關(guān)，傳不傳代及何時傳代與原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞數(shù)量、培養(yǎng)瓶皿的大小以及培養(yǎng)條件密切相關(guān)，在一定程度上具有可人為操作的特征。（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)原代培養(yǎng)期內(nèi)，培養(yǎng)物的細(xì)胞成分是混雜的，即呈現(xiàn)異質(zhì)性（heterogene），除了目的細(xì)胞之外，接種的細(xì)胞懸液中的其它各種細(xì)胞都還存在。這一時期的細(xì)胞生長能力逐漸旺盛，細(xì)胞的分裂活動逐漸增強(qiáng)。由于分裂的次數(shù)還不多，細(xì)胞之間發(fā)生相互影響，尤其是可能導(dǎo)致細(xì)胞性狀發(fā)生改變的影響（如細(xì)胞融合）還不大，細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能與體內(nèi)仍很相似，故原代培養(yǎng)期的細(xì)胞最接近在體時的情況。1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)原代培養(yǎng)期細(xì)胞的主要生長生物學(xué)行為包括以下幾個方面：（1）黏附與貼壁（2）鋪展（3）細(xì)胞運(yùn)動（4）細(xì)胞分裂1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)（1）黏附與貼壁黏附于固相表面是錨定依賴性細(xì)胞生命活動的基本要求。分散生物體組織制成的細(xì)胞懸液，當(dāng)被接種到培養(yǎng)器皿內(nèi)以后，首先要發(fā)生黏附(adherence),即細(xì)胞要黏著或結(jié)合到生長基質(zhì)表面上，這是細(xì)胞培養(yǎng)開始以后能否成功的第一步。錨定依賴性細(xì)胞在解離成單個細(xì)胞懸液后耽擱得越久，越容易發(fā)生退化。1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)貼壁（attachment）與黏附只是程度上的不同，沒有截然的界限。貼壁可以理解為，培養(yǎng)細(xì)胞黏附以后更進(jìn)一步地與生長表面結(jié)合的過程。黏附的細(xì)胞可能通過少數(shù)接觸點(diǎn)與生長表面結(jié)合，而貼壁的細(xì)胞會以整個接觸面與生長表面牢靠結(jié)合。（1）黏附與貼壁1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)不同細(xì)胞的黏附能力不同。有些細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的黏附能力強(qiáng)，這些細(xì)胞被接種到培養(yǎng)器皿內(nèi)以后，能在數(shù)分鐘至數(shù)十分鐘內(nèi)黏附到固相表面。而有的細(xì)胞如神經(jīng)元細(xì)胞、羊水細(xì)胞，其黏附能力弱，當(dāng)被接種到培養(yǎng)器皿內(nèi)以后，需要數(shù)小時乃至更長的時間才能黏附到固相表面。（1）黏附與貼壁1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)降低培養(yǎng)液的懸浮力*減少接種時細(xì)胞懸液的量，以小量細(xì)胞懸液接種，使得細(xì)胞只需下沉很短的距離即可觸及生長表面。待細(xì)胞黏附和貼壁之后，再補(bǔ)充足夠的培養(yǎng)液。*減少培養(yǎng)液中血清的含量使培養(yǎng)液的黏度降低。促進(jìn)因素使用細(xì)胞外基質(zhì)成分（1）黏附與貼壁1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)培養(yǎng)液中的離子成分及其濃度可影響細(xì)胞的黏附和貼壁（培養(yǎng)液中的Ca2+含量過低不利于細(xì)胞的黏附、貼壁和鋪展）。影響因素培養(yǎng)液的溫度也會影響?zhàn)じ胶唾N壁的速度（低溫會減低細(xì)胞的活動，妨礙黏附和貼壁）。（1）黏附與貼壁1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)（2）鋪展鋪展（spread）是大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行生命活動的一種基本的生長特點(diǎn)或生長行為。對錨定依賴性細(xì)胞來說，鋪展?fàn)顩r將制約著細(xì)胞的分裂增殖活動。1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)細(xì)胞的鋪展?fàn)顩r可用兩種參數(shù)描述：其一是培養(yǎng)細(xì)胞的面積大小，這一參數(shù)可以在顯微鏡下直接用測微尺測量；其二是培養(yǎng)細(xì)胞的高度，實際上就是細(xì)胞在垂直方向上的厚度（可以通過在顯微鏡下觀察已發(fā)生鋪展的細(xì)胞）。（2）鋪展1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)扁平的極性細(xì)胞（polarizedcell）放射狀鋪展細(xì)胞持續(xù)0.5-2h便逐漸鋪開伸展鋪展過程細(xì)胞的形態(tài)變化細(xì)胞：圓形細(xì)胞：圓餅形[稱為放射狀鋪展細(xì)胞（radialspreadcell)]（2）鋪展1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)極性細(xì)胞就是各種有機(jī)體細(xì)胞在體外的特征性細(xì)胞形態(tài)，有的為梭形、有的為三角形、有的為其它不規(guī)則形態(tài)等等。培養(yǎng)細(xì)胞鋪展以后的極性細(xì)胞形態(tài)不是固定不變的，相反，會隨著細(xì)胞的生命活動尤其是細(xì)胞運(yùn)動而發(fā)生改變。（2）鋪展1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)鋪展以后的細(xì)胞在相差顯微鏡下進(jìn)行觀察，細(xì)胞輪廓清楚，胞核隱約可見，常可看到核仁。在每一個細(xì)胞的周圍，有一圈亮的光暈，稱為生長暈（growthhallow）。這是細(xì)胞與周圍生長基質(zhì)之間厚度不同而產(chǎn)生的一種光學(xué)現(xiàn)象。（2）鋪展1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)海馬神經(jīng)元（培養(yǎng)7d）生長狀況良好的細(xì)胞，細(xì)胞透亮勻質(zhì)，生長暈明顯。細(xì)胞生長狀況不良時，細(xì)胞色暗、輪廓明顯、反差增大，有時候胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)小的顆粒結(jié)構(gòu)和泡狀結(jié)構(gòu)，可能分別為變形的線粒體及液泡（溶酶體）。（2）鋪展1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)（3）細(xì)胞運(yùn)動原代培養(yǎng)期內(nèi)，細(xì)胞常常會發(fā)生活躍的運(yùn)動。有時候，甚至可從生長基質(zhì)的某處遷移到另處。細(xì)胞的運(yùn)動與細(xì)胞質(zhì)周邊部分伸出的偽足有關(guān)，偽足可分為絲狀和片狀兩種。這些偽足向外伸出后，在適當(dāng)?shù)纳L基質(zhì)部位停留或者附著在某處，細(xì)胞體內(nèi)部的微管和微絲重新排列，進(jìn)一步引起胞質(zhì)的流動。1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)（4）細(xì)胞分裂對大多數(shù)在體內(nèi)可分裂的細(xì)胞來講，體外培養(yǎng)時細(xì)胞能否恢復(fù)分裂增殖活動、恢復(fù)得快慢以及分裂能力的大小等關(guān)系到整個培養(yǎng)的效果。一般來說，原代培養(yǎng)的細(xì)胞至少要渡過24～96h甚至更長的潛伏期才能恢復(fù)分裂。1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)*不同細(xì)胞分裂增殖活動恢復(fù)得快慢不同。*腫瘤細(xì)胞比正常二倍體細(xì)胞恢復(fù)得快。*在體內(nèi)原本增殖能力強(qiáng)的細(xì)胞恢復(fù)得快。*原代培養(yǎng)時接種的細(xì)胞密度越大，潛伏期越短，細(xì)胞分裂增殖活動恢復(fù)得越快。*培養(yǎng)條件適宜、穩(wěn)定，營養(yǎng)供應(yīng)充足，細(xì)胞分裂增殖活動恢復(fù)得快。（4）細(xì)胞分裂1、原代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)2、傳代培養(yǎng)期一旦原代培養(yǎng)物經(jīng)過分割，重新接種到兩個或兩個以上的器皿內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，就標(biāo)志著原代培養(yǎng)期結(jié)束，培養(yǎng)過程進(jìn)入了傳（繼）代培養(yǎng)期。原則上，傳代是以原代培養(yǎng)物貼壁生長，長滿培養(yǎng)器皿的生長面（器皿的底壁）或者在懸浮培養(yǎng)狀態(tài)下細(xì)胞密度足夠大時進(jìn)行。但傳代的具體時間并不是固定的，操作者可以根據(jù)具體情況安排傳代時間。但是，提前或推后傳代（尤其是后者）都不好。（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)在這一時期內(nèi)，最主要的特征是細(xì)胞分裂增殖活動旺盛，細(xì)胞生長活躍。傳代培養(yǎng)期并不單指原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代后的“第一代”培養(yǎng)過程，而是指由首次傳代開始經(jīng)反復(fù)傳代，一直到培養(yǎng)物開始衰退之前的全部時間。按照體外培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域的傳統(tǒng)概念，分離（散）細(xì)胞培養(yǎng)物一旦經(jīng)過傳代即改稱為細(xì)胞系。細(xì)胞系可以繼續(xù)傳代。因此，從培養(yǎng)物的角度來講，傳代培養(yǎng)期就是維持細(xì)胞系增殖、生長的培養(yǎng)過程。2、傳代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)傳代培養(yǎng)期是整個培養(yǎng)過程的主要時期，此期具有以下特點(diǎn)：持續(xù)時間長、細(xì)胞分裂增殖活動旺盛以及細(xì)胞生長活躍。在傳代培養(yǎng)期內(nèi)，細(xì)胞逐漸進(jìn)入去分化狀態(tài)。原本成分混雜的培養(yǎng)物中，某一種增殖能力較強(qiáng)的細(xì)胞會逐漸處于優(yōu)勢，比例越來越大，而將其它數(shù)量較少、比例較小的細(xì)胞逐漸淘汰掉。2、傳代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)在傳代培養(yǎng)期內(nèi)，需要進(jìn)行多次的傳代。在每一次人為的傳代培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)物將首先被蛋白酶消化而被制備成細(xì)胞懸液，再用于種植。種植后的細(xì)胞都要經(jīng)歷相似的恢復(fù)和生長過程。根據(jù)每一次傳代培養(yǎng)的細(xì)胞生長變化的過程，習(xí)慣上把每一代細(xì)胞的生長過程分為潛伏期、指數(shù)生長期和停滯期三個階段。2、傳代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)（1）潛伏期(latentphase)即細(xì)胞對傳代操作所致?lián)p傷的恢復(fù)期和對新的生長環(huán)境的適應(yīng)期。這也是原代培養(yǎng)開始時細(xì)胞必須經(jīng)歷的時期。2、傳代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)不論是原代培養(yǎng)前從生物體組織分離（散）制備細(xì)胞懸液，還是在進(jìn)行傳代操作時，都要使用蛋白酶消化或其它生物化學(xué)試劑，使細(xì)胞表面與其它細(xì)胞以及支持物黏附與連接的分子被破壞，細(xì)胞受到損傷，分散的細(xì)胞懸液，全部細(xì)胞變?yōu)閳A球形。接種到培養(yǎng)器皿內(nèi)以后，細(xì)胞開始經(jīng)歷與原代培養(yǎng)期內(nèi)相似的黏附、貼壁、鋪展等過程。修復(fù)損傷，“熟悉”環(huán)境，恢復(fù)生長，但很少分裂。（1）潛伏期(latentphase)2、傳代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)潛伏期的長短與細(xì)胞種類、接種的細(xì)胞密度、培養(yǎng)條件等因素均有關(guān)。接種的細(xì)胞密度越大、數(shù)量越多，細(xì)胞群體越容易適應(yīng)體外環(huán)境，潛伏期就短，相反，即便是在很小的培養(yǎng)空間內(nèi)，如果接種的細(xì)胞數(shù)量不夠大，潛伏期仍會較長。傳代培養(yǎng)細(xì)胞的潛伏期要比原代培養(yǎng)的細(xì)胞短。傳代培養(yǎng)期的細(xì)胞，潛伏期一般為期6～24h。當(dāng)細(xì)胞開始分裂，意味著細(xì)胞已完全恢復(fù)生長狀態(tài)，潛伏期結(jié)束。（1）潛伏期(latentphase)2、傳代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)（2）指數(shù)生長期(或稱對數(shù)生長期logarithmicgrowthphase）它是細(xì)胞增生最活躍、活力最旺盛的階段，培養(yǎng)物中的細(xì)胞數(shù)量呈指數(shù)增長。指數(shù)生長期內(nèi)細(xì)胞分裂活動的程度（即增殖活性）可以作為判斷細(xì)胞生長是否旺盛的重要指標(biāo)。常以有絲分裂指數(shù)（mitoticindex，MI）、細(xì)胞群體倍增時間來表示。MI是指培養(yǎng)物中分裂相數(shù)量占全部細(xì)胞數(shù)量的百分比。2、傳代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)細(xì)胞的增殖活性與細(xì)胞種類、供體年齡以及培養(yǎng)條件等多種因素密切相關(guān)。一般細(xì)胞的MI約為0.1%～0.5%。原代培養(yǎng)物的MI比繼代培養(yǎng)物的MI低。連續(xù)細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞的MI較高，可達(dá)3%～5%。在接種的細(xì)胞數(shù)量適中、培養(yǎng)條件適宜的情況下，指數(shù)生長期一般持續(xù)3～5d，細(xì)胞即可長滿培養(yǎng)器皿，相互匯合成片。（2）指數(shù)生長期(或稱對數(shù)生長期logarithmicgrowthphase）2、傳代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)如果培養(yǎng)的是正常有機(jī)體細(xì)胞（非轉(zhuǎn)化細(xì)胞），當(dāng)細(xì)胞相互接觸連接成片時，細(xì)胞便不再運(yùn)動，表現(xiàn)出由于接觸而相互抑制的特征，此即為接觸抑制。細(xì)胞在發(fā)生接觸抑制以后，雖然運(yùn)動受到抑制，但只要營養(yǎng)成分充足，仍然可進(jìn)行短期的分裂增殖。只有當(dāng)細(xì)胞密度增大到一定程度，相互擁擠或擠壓而致鋪展程度降低細(xì)胞變高（厚），使得DNA合成受到限制時，細(xì)胞便不再分裂增殖。（2）指數(shù)生長期(或稱對數(shù)生長期logarithmicgrowthphase）2、傳代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)腫瘤細(xì)胞沒有接觸抑制現(xiàn)象。沒有接觸抑制特征的惡性細(xì)胞即便是發(fā)生相互接觸，但仍然可以運(yùn)動和增殖，于是會在所形成的單層細(xì)胞層上繼續(xù)堆疊。由于細(xì)胞密度增大而致的分裂抑制現(xiàn)象被稱為密度依賴性細(xì)胞生長抑制。（2）指數(shù)生長期(或稱對數(shù)生長期logarithmicgrowthphase）2、傳代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)（3）停滯期（stagnatephase）(plateauphase)或平臺期意即細(xì)胞不再分裂增殖，細(xì)胞數(shù)量維持在某一水平上，生長活動停滯。此時細(xì)胞仍有代謝活動，但因細(xì)胞數(shù)量多、營養(yǎng)消耗大、培養(yǎng)液中代謝廢物積聚漸多，細(xì)胞生長活動極為緩慢。即便經(jīng)常更換培養(yǎng)液也會因其迅速酸化而致細(xì)胞發(fā)生酸中毒、發(fā)生變性和從生長基質(zhì)表面脫落死亡。唯有進(jìn)行傳代方可緩解“人口壓力”。2、傳代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)在實際工作中，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)物長滿培養(yǎng)空間就進(jìn)行傳代，完全不必進(jìn)入或維持停滯期。若細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生酸中毒，即使進(jìn)行傳代，也會影響下一代細(xì)胞的功能狀況。酸中毒對細(xì)胞造成的損傷，至少需再經(jīng)過1～2次傳代之后，才能修復(fù)損失、淘汰掉死細(xì)胞，恢復(fù)旺盛的生長狀態(tài)。（3）停滯期（stagnatephase）(plateauphase)或平臺期2、傳代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)對于每一代培養(yǎng)細(xì)胞都可以在接種以后的不同培養(yǎng)時間計數(shù)培養(yǎng)物的細(xì)胞數(shù)量（實際操作時，一般以細(xì)胞密度代替），然后，繪制出時間—密度曲線，作為培養(yǎng)細(xì)胞的生長曲線。不同種類的細(xì)胞，其生長曲線各有特點(diǎn)。生長曲線可反映細(xì)胞的生物學(xué)特征。（3）停滯期（stagnatephase）(plateauphase)或平臺期2、傳代培養(yǎng)期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)3、衰退期傳代培養(yǎng)到一定的代數(shù)時，細(xì)胞的生命活動明顯減弱。細(xì)胞雖然生存，但生長緩慢、很少分裂增殖甚或不再分裂，培養(yǎng)物很難再長滿培養(yǎng)空間，即便是及時換液也無濟(jì)于事。這表明培養(yǎng)物已經(jīng)進(jìn)入衰退期，再向前發(fā)展，只有退化、死亡。此時，用相差顯微鏡觀察可見細(xì)胞輪廓增強(qiáng)，色澤變暗，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)暗的顆粒樣結(jié)構(gòu)以及空泡狀結(jié)構(gòu)。胞質(zhì)突起回縮，突起邊緣有時可脫落。（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)衰退期不同于上面講到的每一代培養(yǎng)細(xì)胞的停滯期。處于停滯期的細(xì)胞可通過傳代進(jìn)行挽救，而處于衰退期的細(xì)胞以任何方法都不能阻止其向死亡方向發(fā)展。3、衰退期（三）體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長過程二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)（四）體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)1、顯微結(jié)構(gòu)總的來講：培養(yǎng)的細(xì)胞與其在體內(nèi)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)相似。上皮組織的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)后仍主要呈現(xiàn)上皮細(xì)胞的形態(tài)：如形態(tài)較為規(guī)整、扁平、沒有特別明顯的胞質(zhì)突起、細(xì)胞之間容易形成類似上皮樣的胞體接觸等。二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)培養(yǎng)中的上皮細(xì)胞結(jié)締組織的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)后仍主要呈現(xiàn)結(jié)締組織細(xì)胞的形態(tài)：如形態(tài)一般不規(guī)整、有較多較復(fù)雜的胞質(zhì)突起，胞體不容易接觸，但胞突常相互接觸，細(xì)胞松散，似結(jié)締組織。（四）體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)1、顯微結(jié)構(gòu)總的來講：培養(yǎng)的細(xì)胞與其在體內(nèi)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)相似。二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)培養(yǎng)中的成纖維細(xì)胞肌肉組織的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)后仍主要呈現(xiàn)肌肉細(xì)胞的形態(tài)：如細(xì)長如管、有時出現(xiàn)橫紋（骨骼肌和心肌）等。（四）體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)1、顯微結(jié)構(gòu)總的來講：培養(yǎng)的細(xì)胞與其在體內(nèi)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)相似。二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)培養(yǎng)中的心肌細(xì)胞神經(jīng)組織的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)后仍主要呈現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)：如細(xì)胞分出明確的胞體與胞突、突起的數(shù)量和形態(tài)學(xué)特征與體內(nèi)同種細(xì)胞的相似、細(xì)胞核及核仁明顯（神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞）、不同神經(jīng)細(xì)胞（神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞）的大小比例等。（四）體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)1、顯微結(jié)構(gòu)總的來講：培養(yǎng)的細(xì)胞與其在體內(nèi)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)相似。二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)培養(yǎng)中的神經(jīng)細(xì)胞然而，將細(xì)胞從體內(nèi)復(fù)雜的環(huán)境轉(zhuǎn)移到體外較為均一的環(huán)境中生長，生長環(huán)境發(fā)生了巨大變化。原本在體內(nèi)形形色色的各種細(xì)胞形態(tài)，在失去了體內(nèi)細(xì)胞之間的那種相互影響壓力之后，表型上發(fā)生去分化變化，形態(tài)上表現(xiàn)雷同的外觀。（四）體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)1、顯微結(jié)構(gòu)二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)剛接種時，所有的細(xì)胞均為圓球形。相差顯微鏡下只能看見一個個亮圈而看不到細(xì)胞核。圓球形細(xì)胞的大小給人以遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于在體組織切片上看到的外觀之印象。隨著細(xì)胞的黏附、貼壁或鋪展，細(xì)胞變扁，呈現(xiàn)出較為特異性的外觀。（四）體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)1、顯微結(jié)構(gòu)二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)培養(yǎng)的細(xì)胞，在形態(tài)學(xué)上的特征，只可以在接種的對象明確的情況下，大致表明出細(xì)胞類型。如果要確認(rèn)培養(yǎng)物中的細(xì)胞種類，必須借助特異性的鑒別方法加以識別。最常使用的方法是以細(xì)胞的某種特異性蛋白質(zhì)或肽的抗體進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定。（四）體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)1、顯微結(jié)構(gòu)二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)2、超微結(jié)構(gòu)透射電鏡下，一般看不到培養(yǎng)細(xì)胞與在體細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)方面有什么明顯的差異。培養(yǎng)細(xì)胞顯示出與體內(nèi)相應(yīng)細(xì)胞有更多的相似性。掃描電鏡下，培養(yǎng)的細(xì)胞與在體的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)差別較大，主要表現(xiàn)在細(xì)胞的外形上。培養(yǎng)的細(xì)胞尤其是遷移活動旺盛的細(xì)胞，一般出現(xiàn)更多的突起，以腫瘤細(xì)胞為甚。（四）體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)（五）植塊培養(yǎng)物的生長生物學(xué)體外培養(yǎng)的植塊主要有組織塊和器官型植塊兩種。雖然不同的植塊培養(yǎng)物生長狀況有所不同，但大致有一些共性。對于大多數(shù)動物組織而言，植塊經(jīng)過短期(1～3d)培養(yǎng)后，植塊內(nèi)的細(xì)胞都會從植塊向外遷移，這是一個普遍現(xiàn)象。不同細(xì)胞從植塊開始遷移的時間、遷出的數(shù)量以及遷移活動的高峰期有所不同。二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)隨著培養(yǎng)時間延長，細(xì)胞不斷遷出，遷移出來的細(xì)胞不斷分裂增殖，最后都會在植塊周圍形成一圈細(xì)胞。在植塊周圍形成了一個由細(xì)胞組成的，好像日月的光“暈（halo）”一樣的暈圈。對于有些遷移能力不強(qiáng)的組織細(xì)胞，如神經(jīng)組織植塊或肌肉組織植塊的細(xì)胞，在植塊所附帶的結(jié)締組織成分不多的情況下，短時間內(nèi)培養(yǎng)，從植塊遷移出來的細(xì)胞可能會很少，甚至沒有細(xì)胞外遷。（五）植塊培養(yǎng)物的生長生物學(xué)二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)從植塊遷移出來的細(xì)胞，其細(xì)胞生物學(xué)特性與分離（散）細(xì)胞培養(yǎng)物有相似之處。若以植塊培養(yǎng)法借助細(xì)胞外遷來收集某種細(xì)胞時，在目的細(xì)胞充分外遷之后，但尚未發(fā)生接觸抑制之前，應(yīng)該及時進(jìn)行傳代培養(yǎng)。（五）植塊培養(yǎng)物的生長生物學(xué)二、體外培養(yǎng)物的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)三、影響動物細(xì)胞體外生長的因素體外培養(yǎng)的動物細(xì)胞脫離了在體時的調(diào)節(jié)和控制，獨(dú)立面對生長環(huán)境中的各種因素，只有適應(yīng)體外環(huán)境條件才能生長。除了向培養(yǎng)基（液）中釋放代謝產(chǎn)物或者分泌一些生物活性物質(zhì)而影響培養(yǎng)基（液）之外，幾乎對生長環(huán)境產(chǎn)生不了什么較大的主動影響。如果環(huán)境因素發(fā)生改變，將會對細(xì)胞生長帶來明顯影響。能夠影響體外培養(yǎng)的細(xì)胞生長的因素很多，例如營養(yǎng)條件、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)液的酸堿度、氧張力等。（一）營養(yǎng)成分與生長基質(zhì)成分對細(xì)胞生長的影響（二）溫度條件對細(xì)胞生長的影響（三）氣相環(huán)境對細(xì)胞生長的影響（四）培養(yǎng)液的酸堿度對細(xì)胞生長的影響（五）輻射線對細(xì)胞生長的影響（六）超聲波對細(xì)胞生長的影響（七）影響細(xì)胞生長的其它因素三、影響動物細(xì)胞體外生長的因素（一）營養(yǎng)成分與生長基質(zhì)成分對細(xì)胞生長的影響體外培養(yǎng)細(xì)胞的營養(yǎng)條件主要是通過培養(yǎng)液來提供的。在培養(yǎng)液中，除了細(xì)胞生命活動所需的各種營養(yǎng)物質(zhì)之外，還必須提供調(diào)節(jié)細(xì)胞生長與功能活動的激素、生長因子以及生長基質(zhì)成分等。盡管已開發(fā)的各種人工合成培養(yǎng)基成分復(fù)雜而且明確，但始終缺乏某些尚不清楚的與細(xì)胞生長發(fā)育和功能活動有關(guān)的微量成分。故體外培養(yǎng)動物細(xì)胞的培養(yǎng)液中一般仍需要加入5%～20%（V/V)的血清。三、影響動物細(xì)胞體外生長的因素1、血清的成分與作用2、無血清培養(yǎng)液的設(shè)計及應(yīng)用3、生長基質(zhì)成分（一）營養(yǎng)成分與生長基質(zhì)成分對細(xì)胞生長的影響三、影響動物細(xì)胞體外生長的因素1、血清的成分與作用血清是由很多分子量不同的生物分子組成的極為復(fù)雜的混合物，包括各種血漿蛋白質(zhì)、肽類、脂肪、糖類（碳水化合物）、無機(jī)物質(zhì)以及血小板凝集時釋放的各種生長因子。這些生長因子有的能促進(jìn)某些細(xì)胞增殖，而有的能誘導(dǎo)某些細(xì)胞分化。血清中既有促進(jìn)細(xì)胞生長代謝的成分，又有抑制細(xì)胞生長活動的成分，從而實現(xiàn)對生長調(diào)節(jié)的平衡影響。（1）血清的成分（一）營養(yǎng)成分與生長基質(zhì)成分對細(xì)胞生長的影響三、影響動物細(xì)胞體外生長的因素（2）血清在體外培養(yǎng)中的作用血清在體外培養(yǎng)中的作用是多方面的。血清對于培養(yǎng)細(xì)胞的主要作用體現(xiàn)在以下幾個方面：1）血清中含有基本的營養(yǎng)物質(zhì)：可以作為人工合成培養(yǎng)基中所缺乏的或者含量不足的營養(yǎng)成分的補(bǔ)充。1、血清的成分與作用（一）營養(yǎng)成分與生長基質(zhì)成分對細(xì)胞生長的影響三、影響動物細(xì)胞體外生長的因素2）血清中含有激素與生長調(diào)節(jié)因子：生長因子能夠刺激細(xì)胞生長、分化與增生，激素能調(diào)節(jié)細(xì)胞多種生命活動。血清在體外培養(yǎng)中的作用是多方面的。血清對于培養(yǎng)細(xì)胞的主要作用體現(xiàn)在以下幾個方面：（2）血清在體外培養(yǎng)中的作用1、血清的成分與作用（一）營養(yǎng)成分與生長基質(zhì)成分對細(xì)胞生長的影響三、影響動物細(xì)胞體外生長的因素3)血清中含有促進(jìn)細(xì)胞黏附與鋪展的因子：主要是一些細(xì)胞外基質(zhì)成分，如纖維連接蛋白（fibronectin),對于