醫(yī)學(xué)-ngf與腦出血

NGF與腦出血

目錄動(dòng)物實(shí)驗(yàn)臨床研究病例分享外源性NGF〔蘇肽生〕對(duì)大鼠腦出血的有效性研究華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科

唐洲平教授主要內(nèi)容研究背景與意義第一局部：腦出血模型的制作第二局部：NGF(蘇肽生)治療大鼠腦出血的研究研究背景及意義死亡率高達(dá)35%致殘率達(dá)95%NGF的概述20世紀(jì)50年代初，Levi-MontalciniR在小鼠肉瘤細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子--NGF〔nervegrowthfactor〕。它是一種由α、β及γ3亞基組成的活性蛋白質(zhì)，主要是由神經(jīng)元、神經(jīng)支配的靶組織或膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)生的，具有促進(jìn)中樞和外周神經(jīng)分化、生長(zhǎng)和存活的功能。NGF分子的四級(jí)結(jié)構(gòu)示意圖上圖為NGF的四級(jí)結(jié)構(gòu)，α亞基〔紅色〕，γ亞基〔綠色〕具有蛋白酶活性，β亞基〔藍(lán)色〕具有生物活性。NGF〔蘇肽生〕的有效性研究目的：大鼠腦出血模型，實(shí)驗(yàn)組大鼠給予NGF處理，探討外源性NGF對(duì)大鼠腦出血的作用機(jī)制。材料NGF〔蘇肽生，北京舒泰神公司〕小鼠抗大鼠Nestin抗體〔英國Abcam公司〕小鼠抗大鼠VEGF抗體〔英國Abcam公司〕HRP〔辣根過氧化物酶，北京中杉金橋公司〕方法將總共48只SD大鼠隨機(jī)分成三組，即實(shí)驗(yàn)組〔NGF組〕24只、對(duì)照組12只和假手術(shù)組12只，每組大鼠取三個(gè)時(shí)間點(diǎn)：第1、3以及7天。實(shí)驗(yàn)組大鼠造模后半小時(shí)通過顱內(nèi)血腫處注入NGF混合液〔2μl，300U〕。對(duì)照組大鼠給予同樣體積無菌生理鹽水。假手術(shù)組翻開頭皮只進(jìn)針，不給藥和鹽水。數(shù)據(jù)分析對(duì)各組大鼠行神經(jīng)功能缺損評(píng)分。將各組大鼠腦組織固定后脫水，制成石蠟切片，厚度約為4μm，行免疫組化染色，檢測(cè)Nestin以及VEGF陽性細(xì)胞，計(jì)數(shù)。將三組大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分、Nestin以及VEGF陽性細(xì)胞數(shù)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果表2：第1天和第3天三組評(píng)分幾乎相同，第7天實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)功能缺損評(píng)分要顯著低于對(duì)照組〔P＜0.05〕，兩組與假手術(shù)組比較均有顯著差異。表2：三組不同時(shí)間點(diǎn)ZeaLong評(píng)分免疫組化檢測(cè)表3：①實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組有顯著性差異〔P＜0.05〕。②實(shí)驗(yàn)組間第7天和第3天與第1天比照有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔P＜0.05〕。實(shí)驗(yàn)組和假手術(shù)組有顯著性差異〔P＜0.01〕。只數(shù)第1天第3天第7天實(shí)驗(yàn)組67.9±1.8①9.5±2.4①11.6±2.7①②對(duì)照組35.8±2.06.5±1.58.0±1.6假手術(shù)組31.1±0.21.0±0.81.4±0.6表3：三組于第1、3、7天的Nestin單標(biāo)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)〔均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差〕免疫組化檢測(cè)表4:①實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組有顯著性差異〔P＜0.05〕。②實(shí)驗(yàn)組間第7天和第3天與第1天比照有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔P＜0.05〕。實(shí)驗(yàn)組和假手術(shù)組有顯著性差異〔P＜0.01〕。只數(shù)第1天第3天第7天實(shí)驗(yàn)組65.5±1.7①7.3±1.9①9.4±2.0①②對(duì)照組34.3±1.45.6±2.16.1±1.3假手術(shù)組30.6±0.40.8±0.30.7±0.1表4：三組于第1、3、7天的VEGF單標(biāo)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)〔均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差〕免疫組化染色圖片圖A、B、C為三組術(shù)后第1天比較Nestin陽性細(xì)胞無明顯差異〔×400〕。ABC免疫組化染色圖片圖A、B、C為三組術(shù)后第3天比較，圖C(實(shí)驗(yàn)組)的Nestin陽性細(xì)胞增多〔P＜0.05〕，圖B(對(duì)照組)也可見少量陽性細(xì)胞〔×400〕。ABC免疫組化染色圖片圖A、B、C為三組術(shù)后第7天比較，圖C(實(shí)驗(yàn)組)的Nestin陽性細(xì)胞明顯增多〔P＜0.01〕〔×400〕。ABC免疫組化染色圖片圖A、B、C為三組術(shù)后第1天比較VEGF陽性細(xì)胞無明顯差異〔×400〕。ABC免疫組化染色圖片圖A、B、C為三組第3天比較，圖C〔實(shí)驗(yàn)組〕的VEGF陽性細(xì)胞增多〔P＜0.05〕〔×400〕。ABC免疫組化染色圖片圖A、B、C為三組第7天比較，圖C〔實(shí)驗(yàn)組)的VEGF陽性細(xì)胞明顯增多〔P＜0.01〕〔×400〕。ABC結(jié)果將三組大鼠腦切片行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，顯示①Nestin與VEGF陽性細(xì)胞數(shù)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組有顯著差異〔p＜0.05〕；②實(shí)驗(yàn)組間第7天和第3天與第1天比照有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔P＜0.05〕；③實(shí)驗(yàn)組和假手術(shù)組有顯著性差異〔P＜0.01〕。討論通過對(duì)大鼠腦出血模型實(shí)驗(yàn)研究，顯示外源性NGF可以促進(jìn)內(nèi)源性NSCs激活、增殖、遷移以及分化；同時(shí)促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)VEGF，新生血管形成。最終使顱內(nèi)受損的神經(jīng)細(xì)胞得到有效的修復(fù)，促進(jìn)機(jī)體的神經(jīng)功能恢復(fù)。其機(jī)制為外源性NGF通過與NSCs上特異受體〔如TrkA及p75〕結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)第二信使體系，產(chǎn)生級(jí)聯(lián)反響，促使細(xì)胞核表達(dá)細(xì)胞分化。NGF的信號(hào)傳導(dǎo)通路示意圖JunyingYuan,BruceA.Yankner.Apoptosisinthenervoussystem:NeuronalsurvivalpathwaysinducedbythebindingofNGFtoitsreceptorTrkA.Nature,2000,10(407):802-809.腦出血臨床觀察報(bào)告天津市環(huán)湖醫(yī)院王新平教授試驗(yàn)簡(jiǎn)介試驗(yàn)?zāi)康模涸u(píng)價(jià)蘇肽生〔注射用鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子〕治療急性腦出血損傷后功能恢復(fù)的有效性及平安性。試驗(yàn)單位天津市環(huán)湖醫(yī)院天津第五中心醫(yī)院天津泰達(dá)醫(yī)院年齡：18-75歲，性別不限；愿意服從本研究方案；腦出血患者〔均符合全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議制訂的診斷標(biāo)準(zhǔn))經(jīng)頭顱CT確診，出血位置基底節(jié)區(qū)、腦葉、丘腦等，起病在48小時(shí)內(nèi)。入組標(biāo)準(zhǔn)排除標(biāo)準(zhǔn)對(duì)神經(jīng)生長(zhǎng)因子有過敏史者。收縮壓>220mmHg或舒張壓>130mmHg，伴有嚴(yán)重的心血管、肝、腎或造血系統(tǒng)病變者可能因精神障礙或其他精神系統(tǒng)疾病影響完成試驗(yàn)者在3個(gè)月內(nèi)參加過臨床試驗(yàn)者妊娠或哺乳期婦女試驗(yàn)分組試驗(yàn)組：蘇肽生組，52例。對(duì)照組：胞二磷膽堿組，63例。兩組患者性別構(gòu)成、年齡、出血量、出血部位、神經(jīng)功能缺損程度〔NIHSS評(píng)分〕、伴發(fā)疾病、既往史等比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。研究方法給藥方法對(duì)照組：胞二磷膽堿0.5g,生理鹽水250ml,靜脈注射，每日1次，治療2周。試驗(yàn)組：蘇肽生，30μg/次，肌肉注射，每日1次，治療2周。各組均不使用其他腦保護(hù)劑如VitE、大劑量VitC、腦復(fù)康、L-葉皂苷鈉等。研究結(jié)果﹡*P<0.05治療前后NIHSS評(píng)分比較治療前后ADL評(píng)分比較﹡*P<0.05治療前后總有效率比較試驗(yàn)過程中未發(fā)生嚴(yán)重不良反響事件對(duì)照組與治療組無顯著性差異說明蘇肽生治療腦出血方案平安性良好平安性評(píng)價(jià)討論神經(jīng)元的再生過程受眾多因素的影響。其中內(nèi)環(huán)境中的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子〔如NGF〕能夠激活來自中樞神經(jīng)系統(tǒng)不同區(qū)域的神經(jīng)元前體細(xì)胞潛在的再生能力。但內(nèi)源性NGF在腦內(nèi)含量卑微，及時(shí)補(bǔ)充外源性NGF，能有效促進(jìn)神經(jīng)元再生，從而促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)功能的修復(fù)。本試驗(yàn)僅僅是初步研究結(jié)果，樣本數(shù)偏小〔120例〕，需要進(jìn)一步大規(guī)模試驗(yàn)的驗(yàn)證。需要進(jìn)一步細(xì)化蘇肽生對(duì)于不同原因引起的腦出血的平安性和有效性。對(duì)于蘇肽生在腦出血、腦缺血、腦堵塞等其他中樞系統(tǒng)疾病的作用機(jī)理及臨床應(yīng)用需要進(jìn)一步探討。鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子治療急性腦梗死的臨床對(duì)照研究浙江鄞州人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科范晨蕾實(shí)驗(yàn)方法患者入院后即開始常規(guī)治療，給予生命體征監(jiān)護(hù)、予以吸氧、抗生素預(yù)防肺部感染及其它并發(fā)癥。根據(jù)病情給予脫水降低顱內(nèi)壓，控制血糖、血壓、改善腦細(xì)胞代謝、抗凝及抗血小板凝集。隨時(shí)糾正水電解質(zhì)平衡及酸堿失調(diào)。治療組在常規(guī)治療的根底上給予蘇肽生，肌肉注射，共維持２８ｄ。對(duì)照組那么僅按常規(guī)治療，不應(yīng)用鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子。治療組好轉(zhuǎn)的６０例中，于０～２周、２～４周、４～６周內(nèi)獲得臨床好轉(zhuǎn)的例數(shù)分別為20、39、1例，絕大多素患者在４周內(nèi)均能獲得較好的臨床療效。病歷分享蘇肽生治療丘腦、基底節(jié)腦堵塞1例病歷資料：患者，女性，67歲，因“左側(cè)肢體癱瘓1月余〞入院?；颊哂谝辉虑俺霈F(xiàn)左側(cè)肢體癱瘓，無肢體麻木，意識(shí)狀態(tài)稍差，嗜睡，伴有吐詞不清，可聽懂別人說話，惡心欲吐，眼裂呈進(jìn)行性減小及右側(cè)頭痛，無發(fā)熱等不適，視物及聽力尚可。病后以腦卒中收入我院，先后2次住院治療后好轉(zhuǎn)。為求進(jìn)一步診治來我院。病后患者精神差，小便同常，大便近日干結(jié)，體力下降。既往有腎性高血壓，規(guī)律用藥，控制可；腎積水；頸椎??；萎縮性胃炎。入院查體：BP:142/88mmHgR:22次/分P:80次/分T:36.8℃神志清楚，吐詞欠清，雙側(cè)瞳孔等大等圓，直徑約3mm，對(duì)光反射靈敏，雙側(cè)右側(cè)凝視麻痹，眼裂正常，睜眼稍無力，雙側(cè)鼻唇溝等稱，伸舌稍左偏；心肺腹〔－〕；左側(cè)肢體肌力2級(jí)，肌張力增高，右側(cè)肌力可，肌張力正常，腱反射等稱引出；感覺共濟(jì)運(yùn)動(dòng)不配合，左側(cè)Babinski征〔＋〕、Gordon征〔＋〕，右側(cè)病理反射未引出；腦膜刺激征〔－〕。門診資料：頭部MRI示右側(cè)顳額頂葉、丘腦及基底節(jié)急性腦堵塞；頸部血管彩超示左側(cè)椎動(dòng)脈偏窄并血流阻力指數(shù)增高，右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈血流速度降低并血流阻力指數(shù)增高；頭顱MRA示右側(cè)大腦中動(dòng)脈M1段閉塞；泌尿系B超示左腎局限性積水，右腎輕度積水；左下肢靜脈B超示左下肢靜脈栓塞，左下肢靜脈血栓性靜脈炎。診斷結(jié)果：1、腦堵塞2、腎性高血壓3、左下肢深靜脈血栓形成4、腎積水治療方案：入院后完善相頭檢查、監(jiān)控血壓，治療上予以擴(kuò)管改善循環(huán)、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)、腦保護(hù)、康復(fù)治療及其他對(duì)癥支持治療。應(yīng)用