細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備 細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備1儀器設(shè)備

細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備1

儀器設(shè)備2023/10/271細(xì)胞培養(yǎng)室

設(shè)置和設(shè)備2023/10/2722023/10/2722023/10/273細(xì)胞培養(yǎng)的必備設(shè)施無菌室---目的防止微生物污染和有害因素的影響工作環(huán)境清潔、空氣清新、干燥和無煙塵。2023/10/2732023/10/274劃分為更衣間、緩沖間和操作間2023/10/2742023/10/2752023/10/276定期滅菌清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，每月檢查菌落數(shù)，保證潔凈度達(dá)10000級，超凈臺達(dá)到100級。使用前紫外滅菌30分鐘以上，操作完畢清理，再紫外滅菌20分鐘。儀器、平皿等應(yīng)包扎嚴(yán)密，滅菌，已污染器材和培養(yǎng)基應(yīng)停止使用。人員進(jìn)無菌室前，須用肥皂或消毒液洗手，更換工作服，鞋，帽子，口罩和手套。2023/10/276無菌室使用規(guī)范2023/10/277物品，用75％酒精消毒外包裝。如菌液灑在桌上或地上，應(yīng)用5%石碳酸或3％來蘇爾傾覆污染處至少30分鐘，再處理。有菌液吸管、試管、培養(yǎng)皿等應(yīng)5%來蘇爾浸泡24小時后，沖洗。凡有活菌物品，必須經(jīng)消毒后，才能沖洗，嚴(yán)禁污染下水道。2023/10/2772023/10/278細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)置包括無菌操作區(qū)、孵育區(qū)、制備區(qū)、清洗區(qū)、消毒滅菌區(qū)、貯藏區(qū)2023/10/2782023/10/2792023/10/279細(xì)胞培養(yǎng)室2023/10/27102023/10/2710細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備2023/10/2711超凈臺的使用設(shè)在避免日光直射，潔凈無塵房間；提前30分鐘開啟紫外燈；風(fēng)機(jī)開啟10-15min，除臭氧；75%酒精擦拭；用后，整理，75%酒精擦拭；紫外滅菌30min。2023/10/2711與生物安全柜的區(qū)別2023/10/27122023/10/2713恒溫培養(yǎng)箱2023/10/2713電熱恒溫培養(yǎng)箱CO2培養(yǎng)箱2023/10/2714普通恒溫培養(yǎng)箱的使用檢查電源、電壓；打開電源開關(guān)，調(diào)制所需溫度；放入培養(yǎng)物；關(guān)好培養(yǎng)箱；注意指示溫度是否與實(shí)際溫度相符；培養(yǎng)物不能過滿；2023/10/27142023/10/27152023/10/27152023/10/2716CO2培養(yǎng)箱的使用使用方法同上注意★

O2傳感器是在飽和濕度下校正的，因此加濕盤必須時刻裝有滅菌水（加新潔爾滅5ml/L）。超溫報警燈亮，并發(fā)出尖銳報警聲時，應(yīng)關(guān)閉電源30分鐘。鋼瓶壓力低于0.2MPa時應(yīng)更換鋼瓶。盡量減少打開玻璃門的時間。2023/10/27162023/10/2717長時間不用，清除水盤，打開玻璃門通風(fēng)24小時后再關(guān)閉。定期消毒，75%酒精擦拭，不要碰撞傳感器等部件。培養(yǎng)瓶蓋不能過松或過緊，保證通氣且不污染；2023/10/27172023/10/27182023/10/27182023/10/2719冰箱使用及注意事項常溫冰箱：4℃

低溫冰箱：-20℃

超低溫冰箱：-70~-80℃

注意分組、做好編號保溫及時清理2023/10/27192023/10/2720其他設(shè)備倒置顯微鏡電熱鼓風(fēng)干燥箱電子天平恒溫水浴箱離心機(jī)壓力蒸汽滅菌器液氮儲存罐2023/10/27202023/10/2721倒置顯微鏡組成和普通顯微鏡一樣，只不過物鏡與照明系統(tǒng)顛倒普通顯微鏡：照明系統(tǒng)在載物臺之下物鏡在上；倒置顯微鏡：照明系統(tǒng)在載物臺之上，物鏡在下，用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞。

2023/10/27212023/10/27222023/10/2722比較放置平穩(wěn)開電源，調(diào)光強(qiáng)；放培養(yǎng)瓶/皿；調(diào)至清晰物象；關(guān)機(jī)。2023/10/2723作用：干燥和干熱滅菌滅菌要求：

160度90-120min滅菌時邊升溫邊鼓風(fēng)

60度時，停止鼓風(fēng)；滅菌結(jié)束緩慢自然冷卻。60度以下可開箱取出滅菌物物品堆積不能過擠橡膠制品不能滅菌著火？2023/10/2723干燥箱干燥：烘箱溫度為105—120℃烘1h左右。2023/10/27241、放置平穩(wěn)2、通電、打開開關(guān)3、放置稱量紙4、平衡/調(diào)零5、左物右碼6、不能用手拿砝碼7、稱量8、清理2023/10/27242023/10/2725離心機(jī)低速：每分鐘幾千轉(zhuǎn)

高速：每分鐘1-3萬轉(zhuǎn)

超速：每分鐘3萬轉(zhuǎn)以上2023/10/27252023/10/27262023/10/27262023/10/27272023/10/27272023/10/27282023/10/27282023/10/27292023/10/2730離心機(jī)使用放置：平穩(wěn)、堅固；平衡：離心管+管套平衡，對稱放入離心機(jī)、蓋蓋子；通電，開開關(guān)，設(shè)定離心時間；緩慢加檔至所需速度；★離心結(jié)束，速度旋鈕回調(diào)至0；停轉(zhuǎn)后，開蓋，取出物品。嚴(yán)禁轉(zhuǎn)動狀態(tài)開蓋；發(fā)現(xiàn)噪聲大、震動，停機(jī)；2023/10/27302023/10/27312023/10/2731壓力蒸汽滅菌器2023/10/2732使用及注意事項補(bǔ)水：高出電熱管，低于支架；放置物品：包扎，擺放不能過密；加熱：放出冷空氣，有大量蒸汽噴出后，關(guān)閉閥門；滅菌：壓力升至所需范圍，計算滅菌時間，維持恒壓，通常121.3度，15~30分鐘即可關(guān)閉電源；自然冷卻，壓力表降至0，溫度降至60℃以下，打開放氣閥，打開蓋子取物品。2023/10/27322023/10/2733注意液體裝容器的3/4，不能密封，要排氣；擰緊鍋蓋時，對稱、均勻、逐步，不能漏氣；2023/10/2733高壓滅菌時，如何做到不密閉？2023/10/27342023/10/27352023/10/27352023/10/2736使用及注意事項★陰涼干燥處放置★只能使用配套瓶塞★注意防護(hù)，防止凍傷；★減少開罐次數(shù)；★檢查液氮量，不低于冷藏物最高面，否則補(bǔ)充；細(xì)胞編號，放入冷凍盒，系上線，寫上標(biāo)簽，懸于罐外。2023/10/27362023/10/27372023/10/2737加水，水位至少達(dá)電熱管上方1cm處；接