不同注射法對受體牛同期揮發(fā)的影響

不同注射法對受體牛同期揮發(fā)的影響

同時(shí)，奶牛傷口的目的是簡化人工精子和胚胎移植，并適合集約栽培。該技術(shù)涉及通過溶黃體或撤除外源性激素使外周血液中孕酮或孕激素含量迅速下降,以達(dá)到同期發(fā)情的目的(RocheJ,1981)。通常采取2種方法進(jìn)行同期化處理,一是誘導(dǎo)卵巢中的黃體溶解,如PG處理,縮短黃體期。二是延長牛發(fā)情周期的黃體期,如孕酮及其類似物。PGF2a是牛最常用的同期發(fā)情方法,通常分為1次或2次處理,如1次處理時(shí),從理論上講,將有70%的母牛發(fā)情。如2次PG處理,通常的方法是2次之間相隔11d,使第二次處理時(shí)母牛黃體都處于功能性黃體階段。孕酮或孕激素借助固化裝置放在陰道內(nèi)或耳部皮下埋植后可持續(xù)釋放(Odde,1990),CIDR是目前使用的這類裝置之一。在用CIDR同期發(fā)情過程中,還需要PG的參與以便終止孕酮對卵巢的作用(RocheJ,1981),短期孕酮和一次性PG處理相結(jié)合可提高母牛的同期發(fā)情效果和發(fā)情反應(yīng)的一致性。本試驗(yàn)的目的是比較母牛1次、2次PG注射和CIDR+PG同期發(fā)情效果,并研究同期發(fā)情方法對胚胎移植受胎率的影響。1材料和方法1.1試驗(yàn)材料1.1.1試驗(yàn)地點(diǎn)1.1.2個(gè)體大小、生長品種為當(dāng)?shù)赝练N黃牛、西門塔爾雜種牛和黑白花奶牛。要求具備:直檢無繁殖機(jī)能障礙、生殖器官疾病和傳染病,個(gè)體大,體型結(jié)構(gòu)良好,骨盆較寬大,膘情中等水平;年齡在3~6歲之間,無流產(chǎn)史。經(jīng)產(chǎn)或育成牛,在同期發(fā)情前4周,肌注VA、VD各25IU和VE500mg,并補(bǔ)充亞硒酸鈉10mg。1.1.3藥物、維生素a、va和vd-roPGF2α:0.2mg/(2mL·瓶),中國科學(xué)院動(dòng)物研究所;CIDR:1.38g孕酮(DuirsPfarmAgLtd;NewZealand);維生素AD注射液:VA、VD各5萬IU,上海第九制藥廠;維生素E注射液:50mg/mL,上海第九制藥廠;5%亞硒酸鈉VE注射液:500mgVE+10mgSeO3/10mL,北京獸藥廠。1.2藥血壓cidr方法Ⅰ:一次性肌肉注射氯前列烯醇3支(0.2mg/支)。方法Ⅱ:二次性肌肉注射氯前列烯醇,時(shí)間間隔為11d,每次3支(0.2mg/支)。方法Ⅲ:不考慮母牛的發(fā)情周期,任選一天將CIDR放入母牛的陰道內(nèi),第九天肌注PGF2α0.6mg/頭(經(jīng)產(chǎn)牛)或0.5mg/頭(育成牛),第十二天取出CIDR后24h開始觀察發(fā)情,并準(zhǔn)確記錄發(fā)情時(shí)間。以上3種方法處理后,均在第二天開始24h觀察發(fā)情,對于發(fā)情的母牛在第七天通過直檢,鑒別黃體的情況。1.3試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析采用SAS軟件,進(jìn)行差異顯著性分析。2試驗(yàn)結(jié)果2.1不同優(yōu)良帶身份牛的實(shí)施效果本試驗(yàn)在祁縣城趙牛場進(jìn)行,經(jīng)產(chǎn)牛帶牛犢,膘情較瘦。同期發(fā)情方法同方法Ⅰ。由表1可見,育成牛同期發(fā)情率高于經(jīng)產(chǎn)牛(P<0.01),由于育成牛的營養(yǎng)狀況好于帶犢母牛,所以兩者之間在同期發(fā)情率方面有差異。但從發(fā)情牛的黃體合格率方面差異不顯著(P>0.05)。2.2產(chǎn)帶重酵母發(fā)病的發(fā)生率本試驗(yàn)選自3個(gè)不同的地點(diǎn)(徐溝安圣,祁縣城趙和祁縣申達(dá))的當(dāng)?shù)赝练N黃牛、西門塔爾雜種牛和黑白花奶牛,均為經(jīng)產(chǎn)帶犢母牛。由表2可見,在相同的飼養(yǎng)條件下,3個(gè)不同地點(diǎn)、不同品種產(chǎn)犢3個(gè)月以上的母牛同期發(fā)情率都顯著地高于產(chǎn)犢不足3個(gè)月的母牛(P<0.01)。說明牛本身的營養(yǎng)、以及生理狀況對牛的同期發(fā)情起到很重要的作用。另外,表中的數(shù)據(jù)顯示,3個(gè)不同品種的牛在不足3個(gè)月或是3個(gè)月以上的同期發(fā)情率比較上差異不顯著(P>0.05)。2.3方法和方法對受體移植可用率的影響本試驗(yàn)在祁縣城趙牛場,選用育成牛進(jìn)行,同期發(fā)情方法為方法Ⅰ、方法Ⅱ和方法Ⅲ。由表3可知,方法Ⅱ和方法Ⅰ在同期發(fā)情率上來看,兩者差異不顯著(P>0.05),兩者與方法Ⅲ相比,差異顯著(P<0.05)。從黃體合格率來看,三者之間差異均不顯著(P>0.05)。從受體移植可用率來看,方法Ⅰ和方法Ⅲ相比,差異顯著(P<0.05)。另外,在觀察發(fā)情時(shí),用CIDR+氯前列烯醇處理組母牛的發(fā)情集中,同期化程度比較高,比其它兩種方法更有利于在集中的一段時(shí)間內(nèi)完成胚胎移植。2.4加拿大荷斯坦牛的胚胎本實(shí)驗(yàn)在太原畜牧總站進(jìn)行。所用胚胎均為從加拿大進(jìn)口的荷斯坦牛的胚胎。由表2~4可知,2種不同同期發(fā)情方法對受體牛移植妊娠率沒有很大影響,差異不顯著(P>0.05)。3pgef2注射時(shí)牛胚胎受精率的變化不論是育成牛還是經(jīng)產(chǎn)牛,不同營養(yǎng)、管理和生理水平是同期發(fā)情效果好壞的主要影響因素,同期發(fā)情處理時(shí)處理牛體質(zhì)和營養(yǎng)水平對發(fā)情反應(yīng)高低起到重要作用。XuZZ和BurtonLJ(1993)試驗(yàn)證明如果處理牛營養(yǎng)水平太低和乏情期生理狀況下,單獨(dú)孕酮處理對處理牛不起作用。本試驗(yàn)研究中,在舍飼條件下,不論是什么同期發(fā)情方法,經(jīng)產(chǎn)牛的同期發(fā)情率和黃體合格率都低于育成牛,而且不同品種產(chǎn)犢3個(gè)月以上的母牛同期發(fā)情率都顯著地高于產(chǎn)犢不足3個(gè)月的母牛(P<0.01)。說明牛本身的營養(yǎng)對牛的同期發(fā)情起到很重要的作用。PGF2α處理母牛通過溶黃體作用可使其發(fā)情同期化,但個(gè)體之間由于卵泡成熟和排卵時(shí)間不穩(wěn)定從而引起同期發(fā)情后定期配種受精率差異很大。早期研究表明在PGF2α處理時(shí)黃體的成熟程度影響其溶黃體效果。在發(fā)情周期的前5d或6d,PGF2α不能有效地誘導(dǎo)溶黃體作用(Momont1984),然而,PGF2α確實(shí)對牛有溶黃體作用,不過母牛發(fā)情的時(shí)間在6d范圍,所以不可能在固定的時(shí)間內(nèi)輸精或進(jìn)行胚胎移植。最近的研究發(fā)現(xiàn),從PGF2α處理到母牛表現(xiàn)發(fā)情的時(shí)間由開始處理時(shí)卵巢中優(yōu)勢卵泡的發(fā)育階段所決定。如果當(dāng)PGF2α注射時(shí)卵泡波中的優(yōu)勢卵泡處于發(fā)育后期或早期靜止期,卵巢排卵將在3~4d內(nèi)。但當(dāng)PGF2α注射時(shí)卵泡波中的優(yōu)勢卵泡處于靜止期的中、后期(如不在是有功能的優(yōu)勢卵泡),則卵巢排卵將在5~7d后下個(gè)卵泡波排卵(Kastelic1991),這一時(shí)間間隔反映新的卵泡波中優(yōu)勢卵泡發(fā)育和排卵所需要的時(shí)間。從本試驗(yàn)看出,PGF2α注射后母牛的同期發(fā)情率和同期化程度比CIDR+PG要低。與HanselW(1979)和SmithR.D(1984)的結(jié)果一致。另外,用CIDR+PGF2α同期發(fā)情受體牛,母牛開始發(fā)情的時(shí)間早于注射1次或2次PGF2α約12h,這可能是由于孕酮長時(shí)間處理的結(jié)果,MacMillan(1985)發(fā)現(xiàn)CIDR-B處理牛12d,可獲得更準(zhǔn)確地同期發(fā)情率。BurtonL.J(1993)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)間隔13d2次PG同期發(fā)情處理會(huì)使母牛的受精率降低,這是由于在第二次注射PG時(shí),部分母牛的發(fā)情周期處在早期或中期的黃體期,如處在黃體期的晚期時(shí),母牛的受精率不受影響,FolmanY認(rèn)為2次PGF同期發(fā)情間隔時(shí)間延長到14d可改善處理牛的受胎率。就牛胚胎移植來講,WenkoffM.S(1987)和HaslerJ.F認(rèn)為自然發(fā)情和PG誘導(dǎo)發(fā)情的受體牛胚胎移植妊娠率沒有差異。本試驗(yàn)采用間隔11d2次PG同期發(fā)情處理母牛,結(jié)果顯示,與一次注射PG的同期發(fā)情率差異不顯著,但明顯高出3個(gè)百分點(diǎn)。在同期發(fā)情方案中,常常使用孕激素及其類似物處理母牛,但被處理牛受胎率有降低的趨勢。這是由于人為黃體期的孕酮水平抑制LH峰出現(xiàn)(Stock,1993),試驗(yàn)顯示,采用CIDR+PGF2α法作同期發(fā)情處理后,牛發(fā)情后第七天,黃體合格率與PGF2α一次注射法、PGF2α二次注射法處理的牛比較,差異不顯著(P﹥0.05),而且比較胚胎移植妊娠率,差異也不顯著(P﹥0.05)。原因可能是孕酮處理延長了優(yōu)勢卵泡的壽命(Rajamachendran,1992),降低了新卵泡發(fā)生的比率,而壽命較長的卵母細(xì)胞排卵,在