149培養(yǎng)基配制及適用性檢查操作規(guī)程總結(jié)

定義〔包括微量元素〕以及生長素和水等。應進展培育基的適用性檢查。程序培育基的制備按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培育基加純化水進展配制。常用培育基的配制養(yǎng)分瓊脂培育基1000ml,250ml的錐形瓶200ml,用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：供細菌計數(shù)微生物限度檢查中的細菌數(shù)測定。玫瑰紅鈉瓊脂培育基1000ml,250ml的錐形200ml,用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：供霉菌、酵母菌檢驗。膽鹽乳糖培育基1000ml,100ml的錐形100ml,用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：供大腸埃希菌檢驗。4-甲基傘型酮葡萄糖苷酸〔MUG〕培育基100ml,20ml的試管中，5ml,用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：供大腸埃希菌檢驗乳糖膽鹽發(fā)酵培育基100ml,25ml的試管中，10ml，用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：大腸菌群檢驗硫乙醇鹽流體培育基1000ml,500ml的玻璃300ml,用膠塞塞好，密封壓蓋。12115min，備用。用途：供需氣菌、厭氣菌檢驗制止復印制止復印制止復印改進馬丁瓊脂培育基1000ml,500ml的玻璃300ml,用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：供真菌檢驗胰酪胨大豆瓊脂培育基g,1000ml,250ml錐形瓶中,200ml,用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：環(huán)境監(jiān)測檢驗培育基平板及斜面的制備45℃左20～25ml〔∮90mm〕9～11m〔∮55mm1組，22～8℃冰箱中保存。1/5，高1/3,滅菌后趁熱放置成底層斜面或高層短斜面，待其凝固后使用，留意管口和瓶塞上勿沾有培育基，避開污染。培育基配制的留意事項承受枯燥培育基，按說明配制，應對滅菌后的培育基pH值進展校驗。配制的培育基不應有沉淀。如有沉淀，應于溶化后趁熱過濾，滅菌后使用。免松動或脫落造成染菌。培育基配制應在2h內(nèi)滅菌，避開細菌生殖。2～8℃，避光的環(huán)境，防止被污染，可在一周內(nèi)用畢；制備好的培育基放置時間不宜過長，以免水分散失及染菌。結(jié)塊、生霉直接影響培育基質(zhì)量。培育基適用性檢查計數(shù)培育基的適用性檢查細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)用的培育基應進展培育基的適用性檢查，成品培育基、由脫水培育基或按培育基處方配制的培育基均應檢查。菌種大腸埃希菌Escherichiacol〔CMCC〔〕44102〕金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureu〔CMCC〔〕26003枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis〔CMC〔〕63501〕白色念珠菌Candidaalbicans〔CMCC〔〕98001黑曲霉菌Aspergillusnige〔CMCC〔〕98003〕18～24小時；接種白色念珠菌的穎培育物至改進馬丁瓊脂培育基24～48110ml0.9%無菌氯化鈉溶1ml50～100cfu的菌懸液。接種黑曲霉的穎培育物至改進馬丁5～73～5ml0.05800.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，用管口裝有薄棉花的無菌吸管吸出孢子懸液1ml至無菌試管9ml0.05800.9%1ml50～100cfu22～824小時內(nèi)使2～81周內(nèi)使用。50～100cfu，分別2置30～35℃培育4850～100cfu，分別注入無菌平皿2個平皿，混勻，凝固，置23～28℃培育7250～100cfu，注入無菌平皿中，馬上傾注酵母浸出2個平皿，混勻，凝固，置23～28℃培育72小時，計數(shù)。同時，用相應的比照培育基替代被檢培育基進展上述試驗。結(jié)果判定：被檢培育基上的菌落平均數(shù)與比照培育基上的菌落平均數(shù)的比值大于70%掌握菌檢查用培育基的適用性檢查基處方配制的培育基均應檢查。菌種大腸埃希菌Escherichiacol〔CMCC〔〕44102〕金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureu〔CMCC〔〕26003〕乙型副傷寒沙門菌Salmonellaparatyphi〔CMCC〔〕50094銅綠假單胞菌Pseudomonasaeruginos〔CMCC〔〕10104〕生孢梭菌Clostridiumsporogene〔CMCC〔〕64941〕白色念珠菌Candidaalbicans〔CMCC〔〕98001〕穎培育物至養(yǎng)分瓊脂培育基上，生孢梭菌的穎培育物至硫乙醇酸鹽流體培育基中，培育18～2424～48小110ml0.9%1ml含10～100cfu的菌懸液。1。1掌握菌檢查用培育基的促生長力量、抑制力量和指示力量檢查掌握菌檢查 培育基膽鹽乳糖培育基4-甲基傘形酮葡糖苷酸培育基

特性抑制力量

試驗菌株金黃色葡萄球菌大腸埃希菌

培育基乳糖膽鹽發(fā)酵培育基

+指示力量+指示力量抑制力量

大腸埃希菌大腸菌群 乳糖發(fā)酵培育基凱瓊脂培育基養(yǎng)分肉湯培育基四硫磺酸鈉亮綠培育基賀菌屬瓊脂培育基

抑制力量

金黃色葡萄球菌沙門菌

凱瓊脂培育基三糖鐵瓊脂培育基

指示力量

銅綠假單胞菌菌梭菌

膽鹽乳糖培育基基亞碲酸鹽肉湯培育基醇氯化鈉瓊脂培育基梭菌增菌培育基

抑制力量抑制力量促生長力量+指示力量抑制力量促生長力量+指示力量抑制力量促生長力量促生長力量+指示力量

銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌大腸埃希菌銅綠假單胞菌大腸埃希菌大腸埃希菌生孢梭菌生孢梭菌念珠菌顯色培育基白色念珠菌1%聚山梨酯80+玉米瓊脂培育基

促生長力量+指示力量抑制力量促生長力量+指示力量

增菌培育基促生長力量檢查：分別接種不大于100cfu的試驗菌〔見表1〕于被檢培育培育基管比較，被檢培育基管試驗菌應生長良好。固體培育基促生長力量檢查：取試驗菌各1ml〔含菌數(shù)50～100cfu〕分別涂布于被檢培育基和比照培育基平板上，在相應掌握菌檢查規(guī)定的培育溫度及最短培育時間下培育。被檢培育基與比照培育基生長的菌落大小形態(tài)特征應全都。5.5.6：培育基抑制力量檢查：接種不少于100cfu的試驗菌〔1〕于被檢培育基中，在相應掌握菌檢查規(guī)定的培育溫度及最長時間下培育，試驗菌應不得生長。5.5.7：固體培育1m〔100cf〔1〕分別涂布于被檢培育5.5.8液體培育基指示力量檢查：分別接種不大于100cfu的試驗菌〔見表2〕于被檢培育養(yǎng)基管比較，被檢培育基管試驗菌生長狀況、指示劑反響等應與比照培育基全都。培育基無菌性及靈敏度檢查：無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培育基及真菌培育基等應品的無菌檢查同時進展。無菌性：每批培育基隨機取不少于5支〔瓶〕，培育14天，應無菌生長。靈敏度檢查菌種金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC(B)26003〕銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)〔CMCC(B)10104〕枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis〔CMC〔〕63501〕生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)〔CMCC(B)64941〕白色念珠菌(Candidaalbicans)〔CMCC(F)98001〕黑曲霉(Aspergillusniger)〔CMCC(F)98003〕菌液制備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的穎培育物至養(yǎng)分瓊脂培育基上，接種生孢梭菌的穎培育物至硫乙醇酸鹽流體培育基中，30℃～35℃培育24～48小時，取上述培育物1白金耳，加至10ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，1ml10～100cfu的菌懸液。接種黑曲霉的穎培育物至改進馬丁瓊脂斜5～73～5ml0.05％〔v/v〕800.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，用管口裝有薄棉花的無菌吸管吸出孢子懸液1ml至無菌試管9ml801ml含孢子數(shù)10～100cfu的孢子懸液。菌懸液在室溫下放置應在2小時內(nèi)使用，假設保存在2～8℃可在24小時內(nèi)使用。910021支不接種9ml5支,100cfu215天。逐日觀看結(jié)果。靈敏度檢查符合規(guī)定。50-100cfu/ml的大腸1ml，分別注入無菌平皿中，馬上傾注胰15ml，每株菌種平行制備2個平皿，混勻，凝固，另取1個平皿直15ml30-3548h，每日觀看結(jié)50-100cfu/ml1ml，分別注入無菌平皿中，馬上傾注胰酪胨大豆瓊脂培育基約15ml，每株菌種平行制備2個平皿，混勻，凝115ml，作為空白比照，于20~25℃分72h，每日觀看結(jié)果并計數(shù)。同時，用比照培育基代替被檢培育基進展上述試驗。市售預制〔TSA〕接觸皿適用性檢查：分別吸取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草0.1ml〔50-100cfuTSA接觸皿培育21個同批號的平皿作為陰性比照，30~3548h，每日觀看結(jié)果。另取白色念珠菌、黑曲霉試驗菌液0.1ml〔含菌量為50-100c，承受涂抹法于市售預制TSA接觸皿培育基外表均勻涂抹，每株試驗菌平行制20~2572h，每日觀看結(jié)果。同時，用比照培育基制備的平皿代替被檢培育基進展上述試驗。落形態(tài)大小與比照培育基上的菌落數(shù)全都，判該培育基的適用性檢查符合規(guī)定。參考資料及附錄《中國藥典》2023版一部中國藥品檢驗標準操作標準MUG培育基適用性檢查記錄〔SOP-QC-149-R01-01〕〔SOP-QC-149-R02-01〕〔SOP-QC-149-R03-01〕〔SOP-QC-14