強直性脊柱炎的實驗室檢測及其意義課件

強直性脊柱炎的實驗室檢測及其意義四川金域魏徵霄2021-02-08內(nèi)容提要：

強直性脊柱炎特點及其與B27關(guān)系什么是HLA及HLA-B27MHC、HLA、亞型、關(guān)聯(lián)、RRHLA-B27與哪些疾病相關(guān)HLA-B27怎么檢測MLCT、ELISA、IMS-ELISA、FCM、PCR-SSP22023/11/7

強直性脊柱炎(AS)是一種慢性、進行性，中軸關(guān)節(jié)受累的關(guān)節(jié)病變，其中以骶髂關(guān)節(jié)和脊柱關(guān)節(jié)受累為主要臨床表現(xiàn)。該病早期進展較慢，但后期開展較快，很短時間內(nèi)形成駝背畸形，髖、膝等關(guān)節(jié)強直，故早期診斷顯得尤為重要。2023/11/7強直性脊柱炎的流行病學(xué)患病率我國0.3%高！〔RA0.36%〕發(fā)病年齡40歲以前發(fā)病頂峰20-30歲男女比例10:1強直性脊柱炎相關(guān)檢測：HLA-B27AnkylosingSpondylitis，AS患病率：0.3%，20-30歲，男女比例10:1，有家族傾向；主要侵犯：中軸關(guān)節(jié)〔骶髂關(guān)節(jié)、脊柱骨突、脊柱旁軟組織〕可伴發(fā)外周關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，嚴重者發(fā)生脊柱畸形和關(guān)節(jié)強直B27檢測可作為有相關(guān)病癥或高危人群AS早期的篩選方法！AS不是RA的一種特殊類型！5強直性脊柱炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎地區(qū)分布種族差異大世界性性別分布男＞女女＞男年齡20-3030-50家族史明顯不明顯類風(fēng)濕因子（－）（

）AS與HLA-B276健康人群HLA-B27陽性率及AS患病率各地區(qū)、種族有顯著的差異HLA—B27與強直性脊柱炎的發(fā)病有很強的相關(guān)性兩種錯誤認識：HLA-B27陽性≠AS！

HLA-B27陽性不會轉(zhuǎn)陰！HLA-B27陽性率AS患病率AS患者B27陽性率中國人2-7%0.3%90～95%歐洲白種人4～13％1％80～100%南非黑人1％很低22%美國黑人2～4％57%印地安人9～50％6～12％80～100%AS與HLA-B27的關(guān)聯(lián)機制連鎖不平衡學(xué)說分子模擬學(xué)說關(guān)節(jié)源性肽假說其他：

T細胞受體庫假說

超抗原假說

B27修飾因子假說

Cys67模型7HLA相關(guān)概念主要組織相容性抗原主要組織相容性復(fù)合體〔MHCⅠⅡⅢ類)：H-2SLAHLAMHC、HLA復(fù)合體……基因MHC分子、HLA分子……抗原HLA：人類白細胞抗原〔HumanLeukocyteAntigen〕8HLA相關(guān)概念9不同地區(qū)HLA-B27亞型的流行病學(xué)分布歐洲、非洲2705、2702、2707東南亞（印尼、馬來西亞、泰國）2706、2704、2705中國、新加坡、日本2704、2705、2707HLA-B27相關(guān)疾病10疾病HLA-B27陽性率(%)強直性脊椎炎>90銀屑病性關(guān)節(jié)炎

55Reiter’s綜合癥37反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎沙門氏菌感染29.7志賀氏菌感染20.7耶爾森氏菌感染17.6淋病雙球菌感染14.0正常人群

2～7HLA-B27檢測方法及評價抗原水平微量細胞毒法84%ELISA85%IMS-ELISA88%流式細胞術(shù)法93%基因水平PCR-SSP96%11微量細胞毒法〔microlymphocytotoxictest，MLCT〕原理：如果受試者淋巴細胞外表表達有相應(yīng)的HLA-B27抗原，就可以與B27抗體結(jié)合，形成Ag-Ab復(fù)合物激活補體，發(fā)生對細胞膜的破壞及細胞殺傷作用，通過染色法觀察，死細胞的細胞膜通透性改變，染料能夠進入使之著色，而活細胞細胞膜完整不被染色。根據(jù)死細胞占全部細胞的百分比，可以判斷受試者淋巴細胞外表是否存在HLA-B27抗原及其與抗體的反響強度。優(yōu)點：不需特殊儀器設(shè)備，易于操作，一般的實驗室都可開展。缺點：標本存放不能超過8小時；感染可以使細胞膜外表的B27分子的數(shù)量或結(jié)構(gòu)改變，影響MLCT的結(jié)果，易出現(xiàn)假陰性。12J.Kirveskari,etal.BritishJournalofRheumatology,1997,36:185-189ELISA原理：應(yīng)用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中HLA-B27水平。用純化的B27抗體包被微孔板，依次參加HLA-B27抗原〔待檢標本〕、生物素化的抗HLA-B27抗體、HRP標記的親和素，形成雙抗體夾心反響，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的HLA-B27呈正相關(guān)。其結(jié)果與MLCT法符合率為99％，且不受感染因素的影響，重復(fù)性好。13瞿良等．實用醫(yī)學(xué)雜志，2005,19(21):2190-2191磁珠酶聯(lián)免疫分析〔IMS-ELISA〕磁珠別離與ELISA結(jié)合

B27單抗標記磁珠

HRP標記CD45單抗

通過磁場別離游離相優(yōu)點：反響時間短〔1小時完成〕對標本新鮮度要求不高2～8℃靜置4d之內(nèi)可用14楊雅瓊等．現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2002,17(2):60-62流式細胞術(shù)法利用熒光標記的HLA-B27單克隆抗體，與細胞外表的B27抗原結(jié)合，使結(jié)合后的淋巴細胞具有一定的熒光強度，這種熒光強度可由流式細胞儀測得的通道值來反映，以其值的上下判斷HLA-B27抗原表達百分比，從而判斷HLA-B27是否陽性。優(yōu)點：全自動儀器檢測，減少了人為因素的影響，重復(fù)性高，操作簡單，自動化程度高；靈敏度可達100%，特異性達97.4%；結(jié)果穩(wěn)定，樣本之間，不同儀器之間，不同實驗室之間可重復(fù)性高。結(jié)果判斷準確，為目前較為理想的方法，國外已將FCM法檢測HLA-B27作為AS診斷的常規(guī)檢測方法。缺點：儀器昂貴，目前只在較大醫(yī)院應(yīng)用，且熒光易淬滅。15PCR-SSP通過設(shè)計基因序列特異的引物SSP，特異性的擴增出標本中的HLA-B27基因片段，以瓊脂糖凝膠電泳分析PCR擴增產(chǎn)物，假設(shè)出現(xiàn)目的條帶那么表