一例附睪炎的布魯氏菌的分離與鑒定

一例附睪炎的布魯氏菌的分離與鑒定

柳綠菌病是由柳綠菌屬引起的一起快速和緩慢的人畜共患的流行性疾病。又稱馬耳他熱或波狀熱。布魯菌病可引起反覆性發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛和疲倦等病征,急性期癥狀多在3～6個(gè)月內(nèi)消退。主要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、乏力、出汗、口渴口干、食欲減退、頭痛、流產(chǎn)、睪丸炎、腱鞘炎和關(guān)節(jié)炎等。發(fā)病有一定季節(jié)性,如羊型布魯菌病的發(fā)生是春季開始發(fā)生,夏季為發(fā)病高峰期,秋季逐漸下降;牛型布魯菌病以夏、秋季發(fā)病率較高。國(guó)內(nèi)多見于內(nèi)蒙、吉林、黑龍江、新疆、西藏等牧區(qū)和半農(nóng)半牧區(qū),而地處非疫區(qū)的上海則極少發(fā)生布魯菌病的感染。我們近期在一例臨床表現(xiàn)為附睪炎的男性患者血液中分離出一株馬耳他布魯氏菌(羊種)。一、傳統(tǒng)血常規(guī)及樣品患者,男性,56歲,因“右側(cè)陰囊疼痛伴發(fā)熱1周”于2011年3月17日急診入院?；颊?周前無誘因出現(xiàn)右側(cè)陰囊劇烈疼痛,絞痛發(fā)作,疼痛進(jìn)行性加重,不向右腹股溝發(fā)射,不伴惡心、嘔吐,無尿頻尿急尿痛,無肉眼血尿,伴有午后高熱?；颊哧幠颐黠@紅腫、觸痛陽(yáng)性。入院使用硫酸異帕米星+頭孢呋辛鈉抗炎對(duì)癥治療后仍有發(fā)熱,體溫波動(dòng)在36.0℃～40.2℃之間,呈波浪熱型。B超檢查:右側(cè)附睪頭部囊性占位性病變,左側(cè)未見明顯異常,雙側(cè)腹股溝淋巴結(jié)探及未見明顯異常。實(shí)驗(yàn)室檢查血常規(guī):WBC6.14×109/L,N69.5%;尿常規(guī):PRO(2+),LEU(-),ERY(3+);2011年3月21日血培養(yǎng)陽(yáng)性,涂片革蘭染色鏡檢為革蘭陰性短小球桿菌?；颊咧髟V近期無疫區(qū)旅游及牛、羊、豬等家畜接觸史,但工作環(huán)境可接觸到皮革原料,發(fā)病前曾吃過涮羊肉。二、微生物的檢查和結(jié)果1.革蘭氏染色鏡檢按標(biāo)準(zhǔn)操作要求無菌采集10mL靜脈血分別接種法國(guó)梅里埃公司的中和抗生素需氧培養(yǎng)瓶和美國(guó)BD公司的含樹脂需氧培養(yǎng)瓶各1瓶,進(jìn)行血培養(yǎng)檢測(cè)。4d后2個(gè)培養(yǎng)瓶均報(bào)警陽(yáng)性有細(xì)菌生長(zhǎng),分別涂片做革蘭氏染色,鏡下可見著色較淺的陰性細(xì)小桿菌呈細(xì)沙樣堆積,同時(shí)做瑞氏染色,鏡下可見藍(lán)色卵圓形短小桿菌串珠樣聚集成團(tuán)。2份標(biāo)本均分別轉(zhuǎn)種于血平板(上海伊華醫(yī)學(xué)科技有限公司提供)和巧克力平板(華美倫祥和醫(yī)療用品有限公司提供),置35℃、5%CO2環(huán)境培養(yǎng)24h后,血平板及巧克力平板均無細(xì)菌生長(zhǎng),繼續(xù)培養(yǎng)至48h,血平板上可見無色透明、濕潤(rùn)、表面有光澤的細(xì)小菌落,純培養(yǎng)物涂片鏡檢呈“細(xì)沙狀”著色弱的革蘭氏陰性短小球桿菌。詳見圖1～圖3。2.初步生化反應(yīng)氧化酶陽(yáng)性,觸酶陽(yáng)性,吲哚陰性。3.k2comts系統(tǒng)鑒定2份標(biāo)本均使用法國(guó)梅里埃公司生產(chǎn)的VITEK2COMPACT系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。鑒定結(jié)果一致為馬耳他布魯菌,生物編碼0000001300001001,鑒定值為99%。4.布魯菌抗體檢測(cè)采集患者血清樣本送至上海市疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行布魯菌血清凝集試驗(yàn)(試管法)檢測(cè)結(jié)果布魯菌抗體1∶1600陽(yáng)性(抗體效價(jià)≥1∶100為陽(yáng)性)。5.診斷和治療根據(jù)病原學(xué)檢查結(jié)果診斷為布魯菌病,建議使用多西環(huán)素聯(lián)合利福平治療,患者要求轉(zhuǎn)院至上海市公共衛(wèi)生預(yù)防中心進(jìn)行進(jìn)一步治療。三、布魯菌病的臨床表現(xiàn)布魯菌是英國(guó)軍醫(yī)Bruce于1886年在馬爾他島從死于“馬爾他熱”(布魯菌病)的士兵脾臟中分離出來的。目前世界上已發(fā)現(xiàn)有6種布魯菌,可分為20個(gè)生物型。我國(guó)已分離出羊種、牛種、豬種布魯菌共15個(gè)生物型。布魯菌病的宿主很多,已知有60多種動(dòng)物(家禽、家畜、野生動(dòng)物、馴化動(dòng)物)可以作為布魯菌病貯存宿主,往往先在家畜或野生動(dòng)物中傳播,隨后波及人類,是人畜共患的傳染病。我國(guó)布魯菌病發(fā)病病區(qū)主要在東北、華北、西北等以畜牧業(yè)、肉類、奶制品加工為主的地區(qū),其他多為散發(fā)區(qū)。布魯菌主要通過體表皮膚黏膜、消化道、呼吸道侵入機(jī)體,人的感染與職業(yè)、飲食、生活習(xí)慣有關(guān),如接產(chǎn)羊羔、屠宰病畜、剝皮、擠奶等接觸;進(jìn)食含布魯菌的生奶、奶制品或被污染的飲水和肉類而感染;吸入被布魯菌污染塵埃而感染的氣溶膠傳播亦為傳播途徑之一。布魯菌病的潛伏期由幾天至幾個(gè)月不等,發(fā)病時(shí)會(huì)出現(xiàn)類似感冒的癥狀,病理特征為全身彌漫性網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞增生和肉芽腫結(jié)節(jié)形成。布魯菌病所累及的組織器官很廣泛,但以單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)、骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等常見。部分慢性期患者肉芽組織發(fā)生纖維硬化性變,臨床可出現(xiàn)后遺癥,嚴(yán)重者可喪失勞動(dòng)力。本病例在發(fā)病前長(zhǎng)期居住在沿海城市,從未到過疫區(qū),發(fā)病時(shí)臨床癥狀僅表現(xiàn)為發(fā)熱及陰囊疼痛,通過實(shí)驗(yàn)室檢查明確病原菌才得以確診。在沒有明顯的流行病學(xué)接觸史,患者卻感染發(fā)病,究其原因可能與目前市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展,家畜及其產(chǎn)品的流通日益頻繁,存在一些未經(jīng)嚴(yán)格檢疫的帶菌牲畜進(jìn)入市場(chǎng)流通。同時(shí)部分人群未養(yǎng)成良好的飲食習(xí)慣,喜歡食用生、鮮或未煮熟的乳、肉及其制品而造成感染。在隨后的流行病學(xué)調(diào)查中,得知患者在日常工作中可接觸到皮革原材料,并在發(fā)病前1周曾食用過涮羊肉,可能是造成患者發(fā)病的原因。布魯菌病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸比較復(fù)雜,其臨床表現(xiàn)多種多樣,很難以一種癥狀來確定診斷,易引起漏診、誤診。需結(jié)合流行病學(xué)接觸史、臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查對(duì)患者做出綜合判斷。在缺乏明顯的流行病學(xué)接觸史,沒有典型的臨床表現(xiàn)時(shí),實(shí)驗(yàn)室檢查顯得尤為重要。因?yàn)樵摬∫坏┭诱`治療,病程進(jìn)入慢性變態(tài)反應(yīng)期,對(duì)患者造成的損害往往是不可逆的。布魯菌生長(zhǎng)緩慢,初次分離更為遲緩,本病例菌株在BACTEC9120和BACT/ALERT3D兩套自動(dòng)血培養(yǎng)系統(tǒng)均于培養(yǎng)4d后才提示細(xì)菌生長(zhǎng)。而且,布魯菌革蘭氏染色弱著色,涂片鏡檢不易檢出,可加做瑞氏染色以提高細(xì)菌檢出率。在懷疑布魯菌感染時(shí),根據(jù)布魯菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則(GB15988-1995)血液培養(yǎng)20d,盲傳血平板及巧克力平板至5%CO2環(huán)境培養(yǎng)48h以上,未見生長(zhǎng)可確定為陰性。在目前抗生素使用較廣泛的情況下,血培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)在使用抗生素之前采集,如已在使用抗生素,應(yīng)在下次給藥前抽取,同時(shí)建議使用抗生素中和瓶以提高血培養(yǎng)的陽(yáng)性檢出率。實(shí)驗(yàn)室及時(shí)、準(zhǔn)確的病原學(xué)報(bào)告可以幫助臨床盡早確診,實(shí)施正確的治療方案,讓患者得到及時(shí)、有效的治療。此外,布魯菌對(duì)人有極強(qiáng)致病力,《WHO實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》將布魯菌列為Ⅲ類危險(xiǎn)