《病原生物學與免疫學實驗》

PAGE31PAGE5（供五年制基礎醫(yī)學專業(yè)使用）教學大綱實驗教學管理中心病基礎醫(yī)學實驗教學中心原生物學與免疫學實驗室2021年10月

前言一、基本信息課程名稱：病原生物學與免疫學實驗學時學分：共80學時，5學分適用專業(yè)：五年制基礎醫(yī)學專業(yè)先修課程：病原生物學、醫(yī)學免疫學二、課程簡介病原生物學及免疫學實驗是為基礎醫(yī)學專業(yè)本科開設的基本技能訓練課,其目的是幫助學生加深對理論課知識的認識和理解，培養(yǎng)學生的實驗思路、基本技能、無菌觀念、臨床技巧、創(chuàng)新意識和參與科學研究的能力；鍛煉學生將理論知識用于解決臨床實際問題的能力；為今后從事臨床醫(yī)學工作奠定基礎。本大綱按照高等醫(yī)學院?；A醫(yī)學本科學生的教學要求，我校教學計劃的安排，結合理論教學大綱而編制，總學時為80學時，共20次實驗。其中，醫(yī)學免疫學部分24學時（占30%）,人體寄生蟲學部分24學時（占30%），醫(yī)學微生物學部分32學時（占60%）。三、課程目標1.思想道德與職業(yè)素質(zhì)目標通過本課程學習，培養(yǎng)學生尊重科學、實事求是、熱愛醫(yī)學事業(yè)、不懼艱苦，為醫(yī)學健康事業(yè)服務的良好的醫(yī)學職業(yè)素養(yǎng)及高尚的思想品德。2.知識目標通過本課程的學習，使學生掌握病原微生物的基本特點，并將其與臨床表現(xiàn)相結合，在教師指導下，根據(jù)所學的病原生物學及免疫學實驗知識自行設計完成的實驗。3.技能目標通過本課程的學習，掌握病原生物學及免疫學實驗特有的基本操作技術，最終達到培養(yǎng)學生理論聯(lián)系實際、基礎聯(lián)系臨床的思維能力，并具有自主學習能力，為后續(xù)的臨床課程學習打下良好的基礎。四、教學要求根據(jù)課程教學大綱及目標，確保課程教學內(nèi)容、教學過程（環(huán)節(jié)）、知識與能力目標的達成，同時，對學生自主學習能力進行培養(yǎng)。五、考核方式本課程考試方式采用綜合形成性評價方式，平時成績30%，期末成績70%。平時成績包括考勤、平時作業(yè)、實驗報告、課堂表現(xiàn)、測試、圖片考試等。參與人：陳婷婷、鄧西川、方濟、何永林、劉佳、劉全、張光媛執(zhí)筆人：陳婷婷審定人：何永林教材、教輔用書與參考書目一、教材選用教材為楊致邦，葉彬《病原生物學與免疫學實驗》（第2版）.北京：科學出版社，2013，科學出版社出版。二、參考書1.曹雪濤.醫(yī)學免疫學.第七版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2018.2.李凡，徐志凱.醫(yī)學微生物學.第9版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2018.3.黃漢菊.醫(yī)學微生物學.第4版.北京：高等教育出版社，2020.4.羅恩杰.病原生物學.第六版.北京：科學出版社，2020.5．陳艷，葉彬.人體寄生蟲學.第二版.北京：科學出版社，2018.6.沈關心，徐威.微生物學與免疫學.第8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2017.目錄實驗一中性粒細胞吞噬功能測定………7實驗二凝集實驗…………7實驗三免疫標記技術……………………8實驗四免疫斑點試驗……………………8實驗五免疫熒光法測抗核抗體…………9實驗六淋巴細胞分離計數(shù)………………10實驗七糞便內(nèi)蟲卵及易與蟲卵混淆的常見物觀察……10實驗八醫(yī)學線蟲…………11實驗九醫(yī)學吸蟲…………12實驗十醫(yī)學絳蟲…………12實驗十一醫(yī)學原蟲…………13實驗十二醫(yī)學節(jié)肢動物……………………14實驗十三細菌形態(tài)結構的觀察……………14實驗十四細菌的生長現(xiàn)象與消毒滅菌……15實驗十五致病性球菌………16實驗十六腸道桿菌…………16實驗十七結核桿菌、厭氧菌………………17實驗十八四體、真菌、病毒………………18實驗十九臨床微生物實驗技術1…………18實驗二十臨床微生物實驗技術2………19教學時數(shù)分配表（共80學時）實驗序號實驗課內(nèi)容實驗學時數(shù)實驗類型實驗一中性粒細胞吞噬功能測定4綜合型實驗實驗二凝集實驗4基本實驗方法實驗三免疫標記技術4綜合型實驗實驗四免疫斑點試驗4經(jīng)典驗證型實驗實驗五免疫熒光法測抗核抗體4綜合型實驗實驗六淋巴細胞分離計數(shù)4綜合型實驗實驗七糞便內(nèi)蟲卵及易與蟲卵混淆的常見物觀察4綜合型實驗實驗八醫(yī)學線蟲4綜合型實驗實驗九醫(yī)學吸蟲4綜合型實驗實驗十醫(yī)學絳蟲4綜合型實驗實驗十一醫(yī)學原蟲4綜合型實驗實驗十二醫(yī)學節(jié)肢動物4綜合型實驗實驗十三細菌形態(tài)結構的觀察4綜合型實驗實驗十四細菌的人工培養(yǎng)與消毒滅菌4基本實驗方法實驗十五化膿性球菌4綜合型實驗實驗十六腸道桿菌4綜合型實驗實驗十七結核桿菌、厭氧菌4綜合型實驗實驗十八四體、真菌、病毒4綜合型實驗實驗十九臨床微生物學技術14基本實驗方法實驗二十臨床微生物學技術24基本實驗方法合計80

實驗一中性粒細胞吞噬功能測定[實驗類型]綜合型實驗[目的要求]1.熟悉“細菌計數(shù)法測定中性粒細胞吞噬功能”試驗的原理、方法及用途;2.了解中性粒細胞生物學特性及其意義;3.了解常用吞噬細胞功能檢測試驗的種類、原理和方法。[實驗學時]4學時[實驗內(nèi)容]1.細菌計數(shù)法測定中性粒細胞吞噬功能（小組做）；2.探討去甲腎上腺素體外對中性粒細胞吞噬功能的影響（小組做）。[實驗分組]3-4人/組。實驗二凝集實驗[實驗類型]基本實驗方法[目的要求]1.掌握體外抗原抗體反應的特點和影響因素，經(jīng)典體外抗原抗體反應的方法和應用；2.掌握玻片凝集反應的原理和應用；3.熟悉ABO血型的鑒定方法，乳膠凝集實驗檢測方法及結果判定；4.了解間接凝集試驗的原理和用途。[實驗學時]4學時[實驗內(nèi)容]1.學習體外抗原抗體反應的特點和影響因素；2.學習經(jīng)典的體外抗原抗體反應的原理、方法和應用；3.玻片凝集試驗——血型鑒定（每人做）；4.間接乳膠凝集試驗——類風濕因子的檢測（小組做）。[實驗分組]3-4人/組。實驗三免疫標記技術[實驗類型]綜合型實驗[目的要求]1.掌握雙抗夾法檢測HBsAg的基本步驟;2.熟悉酶免疫技術基本原理、特點、種類及其作用;3.熟悉膠體金法檢測早早孕的基本步驟;4.了解免疫標記技術的種類;5.了解酶聯(lián)免疫吸附實驗(間接法)的基本過程及其作用。[實驗學時]4學時[實驗內(nèi)容]1.免疫標記技術錄相；2.ELISA法測HBsAg（小組做）；3.早孕檢測(膠體金法)（小組做）。[實驗分組]3-4人/組。實驗四斑點酶免疫實驗[實驗類型]經(jīng)典驗證型實驗[目的要求]1.熟悉斑點免疫檢測微量抗原的方法及步驟；2.了解斑點免疫的基本原理、特點及用途；3.了解常用細胞免疫功能檢測試驗的種類、原理和方法。[實驗學時]4學時[實驗內(nèi)容]1.“細胞免疫檢測”錄像；2.斑點酶免疫實驗檢測細胞因子（小組做）。[實驗分組]3-4人/組。實驗五免疫熒光法測抗核抗體[實驗類型]綜合型實驗[目的要求]1.掌握免疫熒光法的原理；2.掌握免疫熒光檢測過程中避免非特異熒光干擾的方法；3.了解熒光顯微鏡的原理，使用與調(diào)試方法。4.了解實驗檢測免疫熒光法測抗核抗體的臨床意義及結果判定。[實驗學時]4學時。[實驗內(nèi)容]1.學習免疫熒光檢測的特點和影響因素；2.學習熒光顯微鏡的原理，使用與調(diào)試；3.免疫熒光法測抗核抗體試驗；4.小白鼠的處死、解剖，肝印片的制作。[實驗分組]3-4人/組。實驗六人外周血淋巴細胞分離、計數(shù)[實驗類型]綜合型實驗[目的要求]1.熟悉普通顯微鏡的使用。2.掌握水平離心機的使用。3.掌握血球計數(shù)板的使用方法。4.掌握密度梯度離心分離細胞的原理與方法。5.掌握密度梯度離心分離細胞的特點和影響因素。6.掌握離體細胞的活力測定與影響因素。7.了解靜脈負壓采血及抗凝血管的使用。[實驗學時]3+3學時。[實驗內(nèi)容]1.學習密度梯度離心分離細胞的原理與方法。2.學習血球計數(shù)板的使用方法和應用。3.淋巴細胞分離、計數(shù)、活細胞計數(shù)。4.負壓管靜脈采血。[實驗分組]3-4人/組。實驗七糞便內(nèi)蟲卵及易與蟲卵混淆的常見物觀察[實驗類型]綜合性實驗[目的要求]1.掌握糞便直接涂片法等常用糞檢方法的操作；2.熟悉糞便內(nèi)寄生蟲或寄生蟲卵與其他形狀類似物的區(qū)別；[教學時數(shù)]4學時[主要內(nèi)容]1.技術操作:糞便直接涂片法、水洗自然沉淀法、飽和鹽水浮聚法、改良加藤法；2.觀察糞便直接涂片上的寄生蟲卵；3.觀察示教標本：糞便內(nèi)的淀粉、花粉、油滴、氣泡、植物細胞、動物細胞、植物纖維；4.復習顯微鏡的使用方法。[實驗分組]3-4人/組。實驗八醫(yī)學線蟲[實驗類型]綜合性實驗。[目的要求]1.掌握蛔蟲卵、鞭蟲卵、鉤蟲卵、蟯蟲卵的形態(tài)特征；2.掌握旋毛蟲囊包的形態(tài)特征；3.熟悉蛔蟲、鞭蟲、鉤蟲、蟯蟲、絲蟲成蟲形態(tài)；4.熟悉旋毛蟲成蟲形態(tài)；5.了解透明膠紙法的操作，了解上述蟲種寄生部位的病理標本；6.了解上述蟲種寄生部位的病理標本。[教學時數(shù)]4學時[主要內(nèi)容]1.觀察蛔蟲卵(受精卵、未受精卵、脫蛋白膜卵、感染性蛔蟲卵)，鞭蟲卵、鉤蟲卵混懸液涂片、蟯蟲卵貼片標本，兩種鉤蟲口囊；2.觀察示教標本：蛔蟲、鞭蟲、鉤蟲、蟯蟲成蟲；3.觀察旋毛蟲囊包染色玻片標本；4.觀察上述成蟲寄生部位的病理標本；5.觀察示教標本：旋毛蟲成蟲，旋毛蟲成蟲寄生部位的病理標本。[實驗分組]3-4人/組。實驗九醫(yī)學吸蟲[實驗類型]綜合性實驗。[目的要求]1.掌握肝吸蟲、肺吸蟲蟲卵形態(tài)特征；2.掌握血吸蟲、姜片蟲的蟲卵形態(tài)特征；3.熟悉肝吸蟲、肺吸蟲成蟲的形態(tài)，肝吸蟲、肺吸蟲的中間宿主；4.熟悉血吸蟲、姜片蟲成蟲的形態(tài)，兩種吸蟲的中間宿主；5.了解肝吸蟲、肺吸蟲寄生部位的病理標本；6.了解血吸蟲、姜片蟲寄生的病理標本。[教學時數(shù)]4學時[主要內(nèi)容]1.觀察肝吸蟲、肺吸蟲蟲卵混懸液涂片標本。2.觀察血吸蟲、姜片蟲蟲卵混懸液涂片標本。3.觀察肝吸蟲、肺吸蟲的成蟲、中間宿主標本。4.觀察血吸蟲、姜片蟲的成蟲標本、中間宿主標本。5.觀察示教標本：肝吸蟲、肺吸蟲、血吸蟲和姜片蟲寄生人體的病理標本。[實驗分組]3-4人/組。實驗十醫(yī)學絳蟲[實驗類型]綜合性實驗。[目的要求]1.掌握豬帶絳蟲、牛帶絳蟲、曼氏迭宮絳蟲的頭節(jié)、孕節(jié)的區(qū)別；2.熟悉這幾種絳蟲的蟲卵形態(tài)特征，上述絳蟲的中間宿主；3.了解上述絳蟲寄生人體的病理標本。[教學時數(shù)]4學時[主要內(nèi)容]1.觀察豬帶絳蟲、牛帶絳蟲的頭節(jié)、成節(jié)、孕節(jié)玻片標本；2.觀察帶絳蟲蟲卵封片、曼氏迭宮絳蟲蟲卵混懸液涂片標本。成蟲全蟲標本；3.觀察示教標本：上述絳蟲的中間宿主標本、成蟲或幼蟲寄生人體器官的病理標本。[實驗分組]3-4人/組。實驗十一醫(yī)學原蟲[實驗類型]綜合性實驗。[目的要求]1.掌握溶組織內(nèi)阿米巴(包囊、滋養(yǎng)體)、藍氏賈第鞭毛蟲(包囊、滋養(yǎng)體)、無鞭毛體、陰道毛滴蟲的形態(tài)結構。2.掌握間日瘧原蟲與惡性瘧原蟲紅內(nèi)期、弓形蟲滋養(yǎng)體的形態(tài)結構。3.熟悉結腸阿米巴包囊形態(tài)。4.熟悉瘧原蟲子孢子、瘧原蟲卵囊、三日瘧原蟲紅內(nèi)期的滋養(yǎng)體和裂殖體形態(tài)。[教學時數(shù)]4學時[主要內(nèi)容]1.觀察溶組織內(nèi)阿米巴及藍氏賈第鞭毛蟲的包囊和滋養(yǎng)體、陰道毛滴蟲滋養(yǎng)體染色玻片。2.觀察間日瘧原蟲、惡性瘧原蟲的薄血膜染色玻片、弓形蟲滋養(yǎng)體染色玻片。3.觀察示教標本：結腸阿米巴包囊染色玻片。4.觀察示教標本：溶組織內(nèi)阿米巴寄生人體的病理標本。5.觀察示教標本：瘧原蟲子孢子、三日瘧原蟲成熟裂殖體。[實驗分組]3-4人/組。實驗十二醫(yī)學節(jié)肢動物[實驗類型]綜合性實驗。[目的要求]1.掌握的三屬蚊區(qū)別，五種常見蠅的區(qū)別，人體虱、人頭蚤與恥陰虱的區(qū)別、硬蜱與軟蜱的區(qū)別，毛囊螨與皮脂螨的區(qū)別。2.認識常見蚊、蠅、虱、蚤、蜱、螨成蟲及幼蟲的形態(tài)。[教學時數(shù)]4學時[主要內(nèi)容]1.觀察三屬蚊（按蚊、庫蚊、伊蚊）的成蚊針插標本；2.觀察五種常見蠅（家蠅、大頭金蠅、綠蠅、麻蠅、麗蠅）成蠅針插標本；3.觀察人體虱、人頭蚤、恥陰虱、蚤的成蟲封片標本，注意它們適應寄生生活的形態(tài)特征；4.觀察自制的蠕形螨標本；5.觀察示教標本：蚊幼蟲、蛹的活體標本。蠅蛆、蛹的固定或活體標本。疥螨的封片標本。[實驗分組]3-4人/組。實驗十三細菌形態(tài)結構的觀察[實驗類型]綜合型實驗[目的要求]1.掌握實驗室無菌操作技術，革蘭染色結果判斷，細菌的特殊結構（莢膜、鞭毛、芽胞）的形態(tài)特點；2.熟悉細菌標本革蘭染色的操作步驟和方法；3.了解實驗室生物安全規(guī)則。[實驗學時]4學時[實驗內(nèi)容]1.實驗室生物安全規(guī)則；2.細菌標本革蘭染色觀察（Gram’sStain)(每人做）；3.復習顯微鏡(油鏡)的使用(每人做）；4.細菌特殊結構（莢膜、鞭毛、芽胞）的觀察（示教）。[實驗分組]4人/組。實驗十四細菌的人工培養(yǎng)與消毒滅菌[實驗類型]基本實驗方法[目的要求]1.掌握細菌在各種培養(yǎng)基的生長現(xiàn)象,細菌菌落的概念,熟悉細菌菌落的特點；2.熟悉常用的消毒滅菌方法、使用注意事項等；細菌生化反應的原理和結果；3.了解細菌人工培養(yǎng)的方法和過程。[實驗學時]4學時[實驗內(nèi)容]一、錄像1．細菌的人工培養(yǎng)；2．消毒滅菌。二、細菌培養(yǎng)物觀察1．液體培養(yǎng)物觀察（小組示教）；2．固體培養(yǎng)基觀察（小組示教）；三、細菌的生化反應（小組示教）。[實驗分組]4人/組。實驗十五化膿性球菌[實驗類型]綜合型實驗[目的要求]1.掌握化膿性球菌的形態(tài)特征；2.熟悉三種葡萄球菌、三型鏈球菌菌落的特點，血漿凝固酶試驗的意義和結果判斷；3.了解病原性球菌的分離與鑒定程序，血漿凝固酶試驗的方法。[實驗學時]4學時[實驗內(nèi)容]一、化膿性球菌(錄像)二、化膿性球菌培養(yǎng)物1．三種葡萄球菌普通瓊脂平板菌落觀察（小組做）；2．三型鏈球菌血瓊脂平板菌落觀察（小組做）；三、乙型溶血性鏈球菌液體培養(yǎng)物涂片、革蘭氏染色、鏡檢（每人做）；四、血漿凝固酶試驗(玻片法)（小組做）[實驗分組]4人/組。實驗十六腸道桿菌[實驗類型]綜合型實驗[實驗學時]4學時[目的要求]1.掌握腸道桿菌在選擇鑒別培養(yǎng)基上的菌落特點，常見腸道致病菌的生化反應特點；2.熟悉測定細菌對藥物敏感度的方法（瓊脂擴散法）和結果判斷；3.了解腸道桿菌的分離與鑒定程序。[實驗內(nèi)容]一、腸道桿菌(錄像)；二、S.S、伊紅美藍選擇鑒別培養(yǎng)基上的菌落觀察（小組示教）；三、雙糖鐵培養(yǎng)基生化反應觀察（小組示教）；四、細菌藥物敏感試驗（瓊脂擴散法）（小組做）。[實驗分組]4人/組。實驗十七結核分枝桿菌、厭氧菌[實驗類型]綜合型實驗[目的要求]1.掌握結核分枝桿菌、破傷風梭菌，產(chǎn)氣莢膜梭菌的形態(tài)結構特點；2.熟悉痰標本涂片查抗酸桿菌的方法，破傷風梭菌，產(chǎn)氣莢膜梭菌在庖肉基、牛乳基中的生長現(xiàn)象；3.了解厭氧菌的培養(yǎng)方法。[實驗學時]4學時[實驗內(nèi)容]1.厭氧菌培養(yǎng)方法、保險粉法培養(yǎng)破傷風桿菌（全班示教）；2.破傷風桿菌，產(chǎn)氣莢膜桿菌的形態(tài)結構觀察；（示教鏡）；3.破傷風桿菌，產(chǎn)氣莢膜桿菌庖肉基、牛乳基生長現(xiàn)象觀察（全班示教）；4.模擬肺結核病人痰標本涂片查抗