加味甘麥大棗湯對海馬區(qū)bdnf表達的影響

加味甘麥大棗湯對海馬區(qū)bdnf表達的影響

抑郁是一種常見的心理疾病，主要表現(xiàn)為嚴重的長期抑郁、缺乏、興趣低下、飲食缺乏、睡眠障礙、焦慮和多焦慮。通常伴有全身多系統(tǒng)的不同客觀檢查不一致的身體不適。在嚴重的情況下，你可能會自殺或思考。抑郁癥的發(fā)病機制尚未明確,在抑郁癥發(fā)病機制的研究中發(fā)現(xiàn)腦源性神經營養(yǎng)因子(BDNF)的表達有重要意義。研究表明急性和慢性應激均可導致海馬的BDNF的水平下降,持續(xù)的抗抑郁藥物治療可以增加BDNF的表達并防止應激誘發(fā)的BDNF下降。目前,關于中醫(yī)藥治療抑郁癥的研究比較廣泛。有研究表明,甘麥大棗湯有一定的抗抑郁作用,但其效果不是很明顯。本實驗中的加味甘麥大棗湯是甘麥大棗湯基礎上加入遠志、石菖蒲、北秫米、姜半夏、郁金而形成的。本文是從加味甘麥大棗湯對慢性輕度不可預見性抑郁癥動物模型的腦區(qū)改變,利用行為學及免疫組織化法觀察加味甘麥大棗湯對抑郁癥大鼠海馬BDNF表達的影響。1材料和方法1.1材料：如下所述1.1.1物中心提供雄性SD大鼠40只,體重220±20g,清潔級動物。由浙江中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供。實驗動物隨機分為4組即正常對照組(10ml/Kg生理鹽水)模型組(10ml/Kg生理鹽水)西藥組(0.4mg/ml/㎏鹽酸氟西汀)中藥組(2g/ml/㎏)各組均灌胃給藥,每天1次,連續(xù)22天。1.1.2加味甘麥病料鹽酸氟西汀膠囊(上海中西制藥有限公司,產品批號:090402)、加味甘麥大棗湯(浙江中醫(yī)藥大學中醫(yī)門診部提供:小麥336g,甘草、大棗、石菖蒲、姜半夏、郁金各100.8g,遠志67.2g,北秫米134.4g)、BDNF一抗及二抗試劑盒(博奧森生物技術有限公司)。1.1.3國外研究現(xiàn)狀Nikoneclipse80i顯微鏡(Nikon公司)、CCDDS-Fi1500萬象素(Nikon公司)、CarlZeissImagingSystems(CarlZeiss公司)。1.2方法：描述如下1.2.1應激刺激連續(xù)給藥慢性不可預知溫和應激刺激動物模型的制備:正常對照組動物不給予任何刺激;其它各組動物連續(xù)給藥22天,在前21天中受到的應激刺激包括:24h禁食,4℃冷水中游泳5min,24h禁水,1h水平方向高速搖晃,45℃熱水刺激5min,1min夾尾,無刺激,每日隨機給予一種刺激。1.2.2lh-實驗動物的活性第22天將正常對照組動物放入水深15cm的玻璃缸(圓柱形,直徑18cm,高40cm)中,水溫25℃,測定在5min內保持漂浮不動的時問;其它各組動物在末次給藥lh后,進行與正常對照組動物相同的實驗。記錄比較中藥組,西藥組,正常對照組和模型組在5min內保持漂浮不動的時間。1.2.3多聚甲醛溶液各組大鼠給予過量的水合氯醛處死,采用內固定法,從左心室插管后,迅速剪開右心耳,灌注生理鹽水250ml,大鼠眼球及肝臟變白后,繼續(xù)灌注4%的多聚甲醛溶液500ml左右。灌注結束后,開顱取腦,去除嗅球和腦干,由視交叉平面冠狀切取組織塊放于4%多聚甲醛固定置于4℃保存2～3天,然后取出標本脫水,透明,石蠟包埋,于視交叉處連續(xù)冠狀切片,片厚5μm,切片置于4℃保存?zhèn)溆谩?.2.4dab顯色片切片脫蠟至水,蒸餾水洗2min;高壓熱修復;3%H2O2溶液阻斷過氧化物酶,10min;蒸餾水洗2min,PBS洗3min;滴加一抗,37℃孵育1h;流水沖洗3min,蒸餾水洗3min,PBS洗5min;滴加二抗,37℃孵育60min;流水沖洗3min,蒸餾水洗3min,PBS洗5min;DAB顯色2min;復染、透明后封片;圖像分析。2結果2.1對大鼠累計不動時間的影響與正常對照組相比,其它3組累計不動時間均有不同程度的延長,說明模型制作成功,有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與對照組相比,西藥組與中藥組大鼠累計不動時間均有減少,(P<0.01),有統(tǒng)計學意義;而中藥組與西藥組相比,西藥組大鼠累計不動時間雖短于中藥組,但兩者間無明顯差異(P>0.05)。2.2組陽性表達面積的比較與正常對照組相比,其它3組陽性面積均有顯著減少(P<0.01),有統(tǒng)計學意義;與對照組相比,西藥組與中藥組陽性表達面積均有增加(P<0.01),有統(tǒng)計學意義;中藥組與西藥組相比,西藥組陽性表達反應面積大于中藥組,但兩者間無明顯差異,無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。3對抑郁癥大鼠血清中brba的影響目前治療抑郁癥的臨床藥物是以西藥為主的,但是,抗抑郁西藥具有易產生耐藥性和副作用多等不利因素,使得其臨床應用受到極大限制。而中藥復方具有成分多、作用環(huán)節(jié)多、靶點多的特點,盡管單一成份含量低,作用不明顯,但可通過多靶點起作用,產生協(xié)同效益。既彌補了有效成份含量低的欠缺,也降低了副作用。因此,對于研究中藥復方的抗抑郁作用也越來越廣泛。甘麥大棗湯,出自張仲景《金匱要略》:“婦人臟躁,喜悲傷欲哭,象如神靈所作,數欠伸,甘麥大棗湯主之?！迸K躁的表現(xiàn)為精神失常,無故悲傷欲哭,頻作欠身,神疲乏力等。還常伴有心煩失眠,情緒易于波動等。本病多因憂思過度導致心陰受損,肝氣失和所致。這與抑郁癥的心理學病因類似,也與抑郁癥的臨床表現(xiàn)有相似之處。加味甘麥大棗湯是在甘麥大棗湯基礎上加入遠志、石菖蒲、北秫米、姜半夏、郁金而形成的。遠志,寧心安神、祛痰開竅;石菖蒲,開竅凝神、化濕和胃;北秫米,和胃安眠;半夏,燥濕化痰、降逆止嘔、消痞散結;郁金,活血行氣止痛、解郁清心。諸藥合用,可起到寧心安神、解郁行氣的作用。從實驗結果中我們可以看出,中藥組與西藥組大鼠累計不動時間與正常對照組相比均有不同程度的延長、與模型組相比均有減少,說明加味甘麥大棗湯與鹽酸氟西汀均有一定的治療效果,但是鹽酸氟西汀組不動時間短于加味甘麥大棗湯組。腦源性神經營養(yǎng)因子屬于神經營養(yǎng)因子家族,在成年哺乳動物腦內廣泛表達,在神經系統(tǒng)的發(fā)育和功能維持中起至關重要的作用。廣泛分布于中樞神經系統(tǒng)中,尤其是大腦皮層和海馬區(qū)。對神經元的存活、分化、生長和突觸形成、突觸連接及維持神經元正常的生理功能起著關鍵作用。有資料表明,重癥抑郁患者血清BDNF水平較正常對照組明顯降低,經有效抗抑郁治療后,血清BDNF明顯升高。分子遺傳學研究亦提示BDNF基因可能與抑郁癥的病因有關。在應激抑郁動物模型的研究中發(fā)現(xiàn),長時間暴露于應激會減少BDNF表達,對抑郁動物模型給予抗抑郁治療,可以上調海馬區(qū)BDNF的生成,減少海馬區(qū)內BDNFmRNA,可以阻斷抗抑郁藥物的治療作用,給予外源性BDNF也可以起到抗抑郁作用。結合本實驗,可見慢性應激可引起B(yǎng)DNF的減少,與對照組相比,其它3組陽性表達面積均有增加,與正常組相比,加味甘麥大棗湯組、鹽酸氟西