復(fù)方婦炎平膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

復(fù)方婦炎平膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

復(fù)合婦炎平膠囊是我院治療慢性盆腔炎的經(jīng)驗(yàn)處方。它由退腐草、椰子仁、延胡索、大黃和其他中藥組成。具有活血化瘀、通濕清熱止帶的功效，對治療急性和慢性盆腔炎有顯著療效。為控制本品質(zhì)量,采用薄層色譜法對制劑中敗醬草、薏苡仁、延胡索進(jìn)行定性鑒別,采用高效液相色譜法對制劑中鹽酸小檗堿進(jìn)行含量測定,并對其含量測定進(jìn)行方法學(xué)的考察。1藥品、試劑與儀器ZF-90型暗箱式紫外透射儀(上海顧村電光儀器廠);DIONEXultimate3000高效液相色譜儀(美國戴安公司);鹽酸小檗堿對照品(中國藥品生物制品鑒定所,批號(hào)0713-200107,);敗醬草對照藥材、薏苡仁對照藥材、延胡索乙素對照藥材(中國藥品生物制品鑒定所);復(fù)方婦炎平膠囊樣品(自制,批號(hào)060909,060910,060911);乙腈為色譜純,其他試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1斷裂本品為硬膠囊劑,內(nèi)容物為棕褐色粉末,氣微,味苦。2.2包裝侵權(quán)2.2.1陰性對照的制備取樣品粉末4g,研細(xì),加1mol·L-1硫酸溶液20mL,水浴加熱回流2h,放冷,用氫氧化鈉調(diào)pH至7,加氯仿提取2次,每次20mL,合并氯仿液,水浴揮干,殘?jiān)訜o水乙醇5mL使溶解,作為供試品溶液。按處方從中除去敗醬草藥材,依法制成陰性對照溶液。另取敗醬草對照藥材5g,加水50mL,加熱回流1h,濾過,濾液濃縮至干,殘?jiān)凑諛悠返奶幚矸椒ㄌ幚碇瞥蓪φ账幉娜芤骸Ｎφ账幉娜芤?μL,供試品溶液、陰性對照溶液各3μL,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以正己烷-醋酸乙酯-甲醇-醋酸(10∶3∶1∶0.4)為展開劑,展開,取出晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色斑點(diǎn),陰性無干擾。2.2.2薏養(yǎng)殖軟糖的制備取樣品粉末1g,加石油醚(60～90℃)10mL,超聲處理30min,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)邮兔?60～90℃)1mL使之溶解,作為供試品溶液。按處方從中除去薏苡仁藥材,依法制成陰性對照溶液。另取薏苡仁對照藥材1g,同法制成對照藥材溶液。吸取對照藥材溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各2μL,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.2)為展開劑,展開,取出晾干,噴以10%的硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),陰性無干擾。2.2.3陰性對照品溶液的制備取樣品粉末1g,加甲醇50mL,超聲處理30min,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)铀?0mL使溶解,加濃氨試液調(diào)pH至9,用乙醚振搖提取3次,每次10mL,合并乙醚液,揮干。殘?jiān)蛹状?mL使溶液,作為供試品溶液。按照處方,從中除去延胡索藥材依法制成陰性對照溶液。另取延胡索乙素對照藥材1g,加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作為對照品溶液。吸取對照藥材溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各5μL,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,置于氨水飽和的層析缸中,以正己烷-氯仿-甲醇(7.5∶4∶1)為展開劑,展開,取出晾干,置碘缸中至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),陰性無干擾。2.3重量測定2.3.1對照溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿對照品10.12mg,加甲醇定容至10mL,再精密量取1mL定容至10mL,作為對照品溶液。2.3.2超聲處理取樣品內(nèi)容物研細(xì),取約0.1g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加鹽酸甲醇50mL,稱重,超聲處理20min,放冷,稱重,用鹽酸甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液用0.45μm微孔濾膜濾過,即得。2.3.3準(zhǔn)分離主溶液的制備按處方比例及生產(chǎn)制備方法,配制不含黃柏陰性樣品,按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備,作為陰性對照溶液。2.3.4測定總樣量色譜柱:Hypersil-ODS2(4.6mm×250mm,5μm);流動(dòng)相:乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50)(每100mL加十二烷基磺酸鈉0.1g);檢測波長:265nm;流速:1.0mL·min-1;自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣。在此色譜條件下,分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20μL,注入液相色譜儀中,測定。結(jié)果表明,缺鹽酸小檗堿陰性對照品對檢測無干擾。2.3.5峰面積積分回歸線性方程精密稱取鹽酸小檗堿對照品,加甲醇制成質(zhì)量濃度為20.24,40.48,60.72,80.96,101.2mg·L-1系列溶液。分別進(jìn)樣20μL,按照上述色譜條件測定峰面積積分值。以鹽酸小檗堿含量為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),得回歸線性方程為Y=16.447X+0.4803,r=0.9996。結(jié)果表明,鹽酸小檗堿在20.24～101.2mg·L-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.3.6穩(wěn)定性試驗(yàn)吸取供試品溶液20μL,注入液相色譜儀中,測定峰面積積分值,然后分別在0,4,8,12,24h進(jìn)樣測定。結(jié)果表明,供試品在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好,鹽酸小檗堿RSD為0.95%(n=5)。吸取同一供試品溶液20μL,注入液相色譜儀中,測定峰面積積分值,連續(xù)5次,鹽酸小檗堿面積積分值RSD為0.68%(n=5)。結(jié)果表明儀器精密度良好。2.3.7對照品溶液制備取已知鹽酸小檗堿含量的樣品內(nèi)容物(批號(hào)060911),研細(xì),精密稱取0.05g,平行6份,置具塞錐形瓶中,加入一定量的鹽酸小檗堿對照品,按上述樣品制備法制備樣品。吸取供試品溶液各20μL,注入液相色譜儀中,測得回收率均在95%～105%之間,RSD為1.85%(n=6)。結(jié)果表明精密度良好,結(jié)果見表1。2.3.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)(批號(hào)060911)的樣品研細(xì),約0.1g,精密稱定,平行6份,制成供試品溶液,吸取供試品溶液各20μL,注入液相色譜儀中,測得鹽酸小檗堿平均含量為42.85mg·g-1,RSD為0.76%(n=6),結(jié)果表明重復(fù)性良好。2.3.9含量測定取樣品3批,按上述色譜條件及方法,分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各20μL注入液相色譜儀中,測定峰面積,計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量,結(jié)果3批樣品含量分別為27.68,26.13,23.57mg/粒。3皂苷及其衍生物的提取本實(shí)驗(yàn)中敗醬草等藥材的TLC鑒別試驗(yàn)顯示,陰性無干擾,方法具有專屬性。方中黃柏,其主要活性成分鹽酸小檗堿,具有抗菌、抗炎等作用,為君藥,所以作為定量測定指標(biāo)。HPLC檢測方法簡便,靈敏度高,重復(fù)性好,可作為本品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方中敗醬草所含皂苷類成分的薄層鑒別中,根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點(diǎn),用酸水解得游離皂苷元,并用氫氧化鈉調(diào)pH以除去酸性雜質(zhì),加氯仿萃取。以正己烷-醋酸乙酯-甲醇為展開劑,調(diào)整其比例,并加入冰醋酸,噴以硫酸乙醇溶液顯色,所得斑點(diǎn)清晰,雜質(zhì)少,無干擾。薏苡仁所含薏苡仁酯的薄層鑒別中,根據(jù)其易溶于石油醚(60～90℃)的理化性質(zhì),用超聲處理的方法制成樣品,以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(10