幾種魚類血液指標(biāo)及不同器官消化酶活性比較

幾種魚類血液指標(biāo)及不同器官消化酶活性比較引言魚類消化酶主要有蛋白酶，脂肪酶和淀粉酶等幾種，魚類消化酶的活性隨種類，生長階段和健康狀況的不同而有差異，同時受水體溫度，鹽度，無機離子以及飼料等因素的影響，魚類消化酶研究可用于指導(dǎo)篩選飼料配方，開發(fā)新的飼料源和確立適宜養(yǎng)殖條件。而魚類的血液指標(biāo)則包括血液生理指標(biāo)和血液生化指標(biāo)，生理指標(biāo)包含紅細(xì)胞數(shù)目，白細(xì)胞數(shù)目，血沉降值；血液生化指標(biāo)包含血糖，血脂，血膽固醇。正常血液指標(biāo)值能反映物種的屬性和動物的生理狀態(tài)。魚類血液與其代謝、營養(yǎng)及健康狀況有著密切的聯(lián)系。一.血樣及酶液制備血樣制備：尾靜脈采血，將血液分裝于2支不同的離心管內(nèi)，一支用肝素抗凝，4℃保存，用于血液生理指標(biāo)測定；另一支不加抗凝劑，血液在室溫凝結(jié)2h后，4℃，2000r/min離心10min。取上清于-80℃保存，用于血液生化指標(biāo)測定。酶液制備：將4種魚置冰盤脊椎處死，取出胃、肝臟、腸等，剔除內(nèi)容物及結(jié)締組織，用預(yù)冷去離子水沖洗干凈，于4℃下剪碎。按樣品重的5倍加入PH7.0的冷凍去離子水，玻璃勻漿器勻漿，勻漿液4℃下以3000rpm/min的速率離心30分鐘，收集上清液為消化酶粗酶提取液，置于4℃冰箱中保存，24h內(nèi)檢測酶活力。二.血液指標(biāo)的測定

血液生理指標(biāo)測定：1.紅細(xì)胞計數(shù)2.白細(xì)胞計數(shù)3.紅細(xì)胞沉降率4.紅細(xì)胞比容血液生化指標(biāo)測定：1.血糖：鄰甲苯胺法；2.血清總脂：香草醛比色法；3.血清膽固醇：鄰苯二甲醛法。（試劑盒）三.消化酶指標(biāo)測定1.蛋白酶活力測定對照管測定管適當(dāng)稀釋酶溶液/1ml去離子水1ml/37℃水浴預(yù)熱3～5分鐘0.5酪素（預(yù)熱過）2ml2ml37℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)15分鐘10%三氯乙酸3ml3ml離心去除沉淀取上清液于另外試管內(nèi)1ml1ml0.55M碳酸鈉5ml5ml福林試劑1ml1ml蛋白酶活力單位定義：在37℃下每分鐘水解0.5%酪素產(chǎn)生1μg酪氨酸為一個酶活力單位U。蛋白酶的活力單位=A/15×FA為樣品測得光密度查曲線得到相應(yīng)酪氨酸的μg數(shù)；F為酶液最終稀釋倍數(shù)；15為反應(yīng)時間（min）。2.淀粉酶活力測定對照管測定管0.04%可溶性淀粉5ml5ml將兩管在37℃水浴預(yù)熱2～5分鐘酶液/0.1ml測定管混勻后，再置37℃水浴中反應(yīng)7.5分鐘0.01N碘應(yīng)用液5ml5ml淀粉酶活力單位定義：在37℃、30min內(nèi)，100ml酶液中的淀粉酶能完全水解淀粉10mg稱為一個淀粉酶活力單位。淀粉酶活力單位/100ml=（對照管光密度-測定管光密度）/對照管光密度×2/10×30/7.5×100/1=（對照管光密度-測定管光密度）/對照管光密度×803.脂肪酶活力測定將分光光度計于420nm處以Tris緩沖液調(diào)零，1cm光徑玻璃比色皿；然后將底物緩沖液在37℃預(yù)溫5min以上。往相應(yīng)編號試管中加入0.05ml新鮮血清，再用5ml加樣器吸取4ml預(yù)溫的底物緩沖液沖入試管中，迅速用冰箱保鮮膜蓋住管口，立即顛倒混合5次。然后迅速倒入比色皿中在420nm處比濁，讀取吸光度值（A1）。再將此比色液倒入原試管中置37℃準(zhǔn)確水浴10min，再用上法比色讀取吸光度值（A2）。最后取底物緩沖液4ml加0.9%氯化鈉50μL，420nm比濁，讀取吸光度值（As）。脂肪酶活力計算方法：U=（A1-A2）/As*3632(單位U/L)As=0.681四.結(jié)果探討1.魚類食性對消化酶的影響魚類的食性一般分為肉食性、草食性和雜食性，它與消化器官組織結(jié)構(gòu)和消化機能是相適應(yīng)的，消化器官組織結(jié)構(gòu)不同，所承擔(dān)的消化機能不同，因而消化酶活性也呈明顯差異。一般肉食性魚類的消化道短，蛋白酶活性強，草食性魚類的消化道長，淀粉酶活性強。蛋白酶活性從高到低順序為：肉食性魚類>雜食性魚類>濾食性魚類>草食性魚類；魚類淀粉酶活性也明顯與食性相關(guān)。有什么樣的食性，就有什么樣消化酶的組成狀況，而且消化酶活力大小變化程度與食物組成的變化程度是相關(guān)的，這正是魚類對本身生態(tài)環(huán)境的一種適應(yīng)。2.魚類自身生長階段對消化酶的影響隨魚體的生長，魚需要營養(yǎng)成分的質(zhì)與量也隨之變化。消化器官隨著生長相對增大，內(nèi)分泌機能增強，從而使消化酶也隨之相適應(yīng)而變化。因而，由于季節(jié)不同、環(huán)境水溫變化，魚類表現(xiàn)出不同的生長速度。3.血液生理指標(biāo)魚類血液性狀指標(biāo)的高低與魚類活動性及食性有關(guān)，活動性強的魚類高于活動性弱的魚類，肉食性魚類高于草食性魚類，草食性魚類高于雜食性魚類。血液生化指標(biāo)本試驗對四種魚類血液的一些有機化學(xué)成分，如血糖、血總脂、血膽固醇等進行了初步的測定，結(jié)果可以作為它們正常生理常數(shù)參考值，而且這些指標(biāo)觀測值的變化指示了它們對環(huán)境改變的反應(yīng)。五.實驗反思1.實驗材料比較單一實驗只選取了4種常見的肉食性經(jīng)濟魚類作為研究對象，由于肉食性魚類食物組成相似，導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)差別不大，可比性不太強。2.實驗?zāi)康谋容^簡單實驗只是簡單測定了4種魚類的血液指標(biāo)和消化酶指標(biāo)，可以適當(dāng)增加一些實驗條件，比如增加不同PH或溫度梯度下魚類的消化酶指標(biāo)，也可以增加不同飼料對魚類消化酶的影響。六.感言大學(xué)四年時光一晃就要過去了，四年的大學(xué)生活也給我留下了許多的美好回憶，而這篇論文的完結(jié)我需